ショウジョウバエメラノガスターにおけるプログラム可能な自動ナノリットル注射器による腫瘍他家移植

要約

このプロトコルは、新生物形成の様々な側面を研究するための成体宿主の腹部への ショウジョウバエ 腫瘍の初期および継続的な世代間他家移植のための詳細なガイダンスを提供する。オートインジェクター装置を使用すると、研究者は従来の手動の方法によって達成されたものと比較して、効率と腫瘍収量を改善することができます。

要約

このプロトコルは、自動ナノリットル注射装置を用いたショウ ジョウバエメラノガスター における腫瘍の他家移植を記載している。 オートインジェクター装置を使用することにより、訓練を受けたオペレータは、手動インジェクターを使用して得られたものと比較して、より効率的で一貫した移植結果を達成することができる。ここでは、 ショウジョウバエ の系統の交差から、原発腫瘍の誘導と解剖、原発腫瘍の新しい成人宿主への移植、および拡張研究のための腫瘍の世代移植の継続まで、時系列的にトピックをカバーします。実証として、ここではNotch細胞内ドメイン(NICD)過剰発現誘導唾液腺虚環腫瘍を世代移植に用いた。これらの腫瘍は、まず幼虫唾液腺虚環内の遷移帯微小環境で確実に誘導され、次いでインビボで同種移植および培養され、継続的な腫瘍成長、進化、および転移を研究することができる。この他家移植法は、潜在的な薬物スクリーニングプログラム、ならびに腫瘍 - 宿主相互作用の研究に有用であり得る。

概要

このプロトコルは、自動ナノリットル注入装置(例えば、Nanoject)を用いて、 ショウジョウバエ 幼虫唾液腺(SG)想像上の環腫瘍を成体宿主の腹部に同種移植するための段階的なガイダンスを提供する。このプロトコルはまた、腫瘍を新世代の成体宿主に再同種移植するための指示も提供し、腫瘍の進化や腫瘍と宿主の相互作用などの腫瘍特性の継続的な縦断的研究の機会を提供する。このプロトコールは、薬物スクリーニング実験にも適用することができる。

この方法は、 ショウジョウバエ に腫瘍他家移植を行う有効性を改善するために開発されたもので、吸引力と注射力に一貫性がないことが多い手動注射器¹を使用して、腫瘍同種移植の最適でない結果をもたらす。オートインジェクター装置は、より良い制御を提供し、同種移植後のハエ死亡率の低下をもたらし得る。訓練を受けたオペレータは、手動注射器を使用した場合の約80%と比較して、オートインジェクターで90%以上の宿主生存率を達成することができた¹。全体的な腫瘍獲得率は、同種移植後8〜12日目に60%〜80%である。平均噴射時間も、手動インジェクタを使用した1フライあたり30〜40秒から、オートインジェクターを使用した1フライあたり20〜25秒に改善されました。

このプロトコルは、 ....

プロトコル

1. SG虚環腫瘍の作製

1. 成虫のハエを UAS-NICD (オス:10-15匹のハエ)と Act-Gal4、UAS-GFP/CyO;tub-Gal80^ts (処女メス:10-15匹のハエ)の遺伝子型と交配し、18°Cで1日間繁殖させる。 選択された成虫のハエは、高い繁殖力を確保するために5〜9日齢でなければなりません。
2. 成虫のハエがバイアルに含まれるハエの餌に18°Cで24時間卵を産むのを許し、成虫のハエを取り除きます。
   注:フライフードは、 ショウジョウバエ ストック^{センター8}の標準的なコーンミールフードレシピを使用して調製されます。各バイアルには約10mLのフライフードが含まれている必要があります。
3. 卵を18°Cで6日間孵化させます。 この期間中、幼虫は孵化します。
4. 幼虫を含むバイアルを29°Cのインキュベーターに移し、さらに7日間インキュベートする。
   注:このインキュベーションステップは、特定の実験計画に応じてオプションです。

2. 他家移植のための成体野生型 ショウジョウバエ の調製

1. 野生型または適切な変異成虫のハエを100%_CO2で麻酔し、性別に基づいてハエを分類する。オスとメスの両....

結果

ここでは、ナノリットル注射オートインジェクター装置を用いてSG想像環腫瘍の世代的他家移植を行い、その後、共焦点レーザー走査顕微鏡による腫瘍ライブイメージングを実施し、腫瘍増殖、腫瘍細胞移動、腫瘍-宿主相互作用のトピックをより深く掘り下げることができました。ハエを装着するときは、顕微鏡スライドに接着し、ポリジメチルシロキサン(PDMS)ブロック¹¹?.......

ディスカッション

腫瘍他家移植は、ショウジョウバエの腫瘍の成長と進行の間に生じる特定の問題に研究者が対処するのに役立ちます。そのような課題の1つは、原発性腫瘍培養中の担癌幼虫または成虫の早期死亡の回避^である12。この文脈において、腫瘍同種移植を継続することは、腫瘍が無期限に成長することを可能にし、腫瘍の成長、転移、および進化の縦断的研究を容易にする?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Confocal Laser Scanning Microscope	Zeiss	LSM 980	Also known as "Zeiss LSM 980"
Cornmeal Fly Food	Bloomington Drosophila Stock Center	N/A	Also known as "BDSC Standard Cornmeal Food"
Dissection Needle (30Gx1/2)	BD PrecisionGlide	305106
Dissection Plate	Fisher Scientific	12-565B
Fly Tape	Fisherbrand	159015A
Fluoresence Adapter for Stero Microscope	Electron Microscopy Sciences	SFA-UV	Also known as "NightSea Fluorescence Adapter"
Fluoresence Microscope	Zeiss	495015-0001-000	Also known as "Zeiss Stereo Discovery.V8"
Forceps	Fine Science Tools	11251-10	Also known as "Dumont #5 Forceps"
Glass Capillary (3.5'')	Drummond	3-000-203-G/X
Glue	Elmer	E305	Also known as "Elmer Washabale Clear Glue"
Light Microscope	Zeiss	435063-9010-100	Also known as "Zeiss Stemi 305"
Micropipette Puller	World Precision Instruments	PUL-1000	Also known as "Four Step Micropipette Puller"
Nanoject Apparatus	Drummond	3-000-204	Also known as "Nanoject II Auto-Nanoliter Injector"
Schneider's Medium	ThermoFisher	21720001
Syringe (27G x1/2)	BD PrecisionGlide	305109
Vial	Fisherbrand	AS507