Preparation of Bacterial Inoculum for Acinetobacter Biofilm Formation

細菌接種液調製プロセスを開始するには、滅菌ピペットチップを使用してバイアルから2〜10マイクロリットルの細菌株を採取し、市販の血液寒天プレートに接種します。滅菌ループを使用して、寒天の表面を縞模様にし、断続的な炎で薄くします。準備した寒天プレートを逆さまにした状態で摂氏30度で約20〜24時間インキュベートします。

次に、滅菌針で細菌培養物の単一コロニーを選択し、この培養液を5ミリリットルの滅菌BHIブロスに接種します。接種した培養液を摂氏30度の振とうインキュベーターで毎分150回転の速度で約20〜24時間インキュベートします。次に、1ミリリットルの培養液を滅菌マイクロ遠心チューブに移し、6, 000gおよび室温で10分間遠心分離します。

遠心分離後、上清を廃棄します。1ミリリットルの滅菌リン酸緩衝生理食塩水(PBS)をペレットに加え、ボルテックスを使用して再懸濁します。再懸濁したペレットを室温で6, 000gで10分間遠心分離し、上清を廃棄する。

今回は、得られたペレットを、ボルテックスを用いて滅菌した10倍希釈BHIブロスに再懸濁します。600ナノメートルで約0.1の光学濃度を達成するようにしてください。