Acinetobacter Biofilm Quantification Using Crystal Violet

まず、滅菌ポリスチレン96ウェルプレートの各ウェルに200マイクロリットルの細菌接種物を追加します。次に、200マイクロリットルの脱イオン水を最も外側の井戸に追加して、内側の井戸が乾燥しないようにします。96ウェルプレートを摂氏25度で24時間インキュベートします。

インキュベーション後、ピペットを使用して各ウェルで上清を廃棄します。各ウェルに300マイクロリットルのPBSを慎重に加え、ピペットを使用してPBSを再度除去します。200マイクロリットルの1%クリスタルバイオレット溶液を各ウェルに加え、プレートを室温で30分間インキュベートします。

次に、各ウェルに200マイクロリットルの無水エタノールを分注した後、プレートを室温で15分間放置します。各ウェルの内容物をピペッティングで繰り返し上下に混合し、完全に混合します。マイクロプレートリーダーを使用して、595ナノメートルでウェルの吸光度を測定し、バイオフィルムの質量を決定します。

バイオフィルムの数は、0.04から1.69の光学濃度またはOD値の範囲で、株によって大きく異なり、A.bouvetiiを除くすべてのアセトバクター分離株はバイオフィルムを形成し、A.radioresistensは弱いバイオフィルムを形成しました。A.junii と A.baumannii は中程度のバイオフィルムを形成し、A.pittii と A.ursingii は強いバイオフィルムを形成した。