Splitting of Murine Retina for Immunofluorescence Analysis

まず、マウスの網膜が入ったペトリ皿のエイム培地を、新しいカーボゲン化エイムズと交換します。広口トランスファーピペットを使用して、解剖したマウス網膜の一部を、神経節細胞側を上にしてスライドガラスに置きます。デリケートなタスクワイプで余分な液体を取り除き、平らにします。

必要に応じて、細い先端の絵筆を使用して、解剖顕微鏡の下で網膜の端をそっと引っ張ります。鉗子を使用して、乾燥したニトロセルロース膜を網膜に配置し、神経節細胞側に接着します。網膜を裏返してスライドガラスにニトロセルロースを置き、網膜の感光体側に別の乾燥膜片を置きます。

次に、絵筆の先端をエイムズメディアで濡らします。上膜に穏やかな下向きの圧力をかけて、均一な接着を助けます。次に、1対の鉗子で下膜をガラスに固定します。

次に、別のペアを慎重に使用して、ゆっくりと安定した動きで上膜をはがします。視細胞を含む上膜を廃棄します。最後に、内側の網膜を含む下膜を炭化エーム培地に戻します。