3Dマルチカルチャーのための皮膚細胞球の調製

吊り下げドロップ法を開始するには、事前に調製した皮膚細胞懸濁液の20マイクロリットルをペトリ皿の蓋にピペットで移します。次に、蓋をペトリ皿の下半分で覆い、そっとひっくり返して吊り下げる滴を作成します。液滴から完全に成長した培地が蒸発するのを防ぐために、ペトリ皿に滅菌水を追加します。

液滴を摂氏37度で48〜72時間インキュベートします。次に、新しいプレートのウェルに完全な成長培地を充填します。滅菌カットされたピペットチップを使用して、細胞球をマルチウェルプレートのウェルに移します。

実験前に、移した球体をマルチウェルプレートで摂氏37度の1日間インキュベートします。リミッティングセル接着法では、まずPBS中の1%界面活性剤溶液をU底プレートの各ウェルに100マイクロリットル加えます。次に、プレートを溶液と摂氏37度で24時間インキュベートします。

次に、目的の細胞密度で細胞懸濁液を調製します。ウェルから界面活性剤溶液をピペットで取り出し、50マイクロリットルの細胞懸濁液を各ウェルに播種します。最後に、プレートを摂氏37度で24時間インキュベートして、細胞凝集体に到達させます。

10, 000個の細胞からなる球体は、ウェルで見えるため、操作が容易でした。球体が大きいほど安定性が低下しました。異なる細胞タイプは、異なる色の球体を形成しました。

完全に丸みを帯びた球体は、吊り下げ式では移乗時に形状が崩れやすいものでした。変形を抑え、無傷の細胞凝集体を得るためには、正確な取り扱いが必要でした。不正確さと経験不足が球体の損傷につながりました。