生きた 線虫Caenorhabditis elegans ワームにおける軸索輸送の可視化

まず、イメージング用に準備された線虫スライドを取ります。4倍から20倍の倍率のレンズでスライドを観察し、線虫を見つけます。彼らの位置を覚えておいてから、63倍の倍率のレンズに切り替えて詳細なイメージングを行います。

初期画像をキャプチャして、取得パラメータを評価します。強度ヒストグラムを使用して信号強度をモニターし、必要に応じて励起レーザー強度を上げます。次に、488ナノメートルのレーザーを使用して、分析する軸索の領域を漂白します。

漂白ステップの前後の信号強度を比較して、漂白効率を決定します。2 x 2 ビニングを使用して、個々のトランスポート イベントの信号強度を高めます。露光時間を増やし、連続する時間点間で300〜700ミリ秒の時間分解能を使用して、Rab3輸送イベントを追跡します。

輸送イベントの信号強度と頻度に基づいて、1〜3分のタイムラプスを記録します。