蛍光標識フィブリノーゲンをヒト血栓に組み込み、血栓の可視化を強化

まず、蛍光タグ付きフィブリノーゲンをクエン酸ヒト全血3ミリリットルに添加して、最終濃度を1ミリリットルあたり60マイクログラムにします。Chandler Loopを直径120mmのドラム缶で摂氏37度の水浴槽にセットします。標準の200マイクロリットルPCRチューブをカットし、チューブの端を接続します。

血液凝固を開始するには、176マイクロリットルの200ミリモル塩化カルシウムを3ミリリットルの全血に加えます。.3ミリリットルの注射器を使用して、穏やかな反転で適切に混合した後、血液をチューブに入れます。すぐにチューブをチャンドラーループドラムに置き、両端を接続します。

暗い場所で、ウォーターバスに部分的に沈められたドラムを40RPMで回転させます。40〜60分後、チューブから血栓を取り出します。Gross Chandler Loop FITC フィブリノーゲンタグ付き全血特性は、紫外線下での蛍光の均一な分散を示しました。

さらに、全血中のFITCフィブリノーゲンの程度を変えても、血栓の重量は変わりません。