まず、凍結乾燥レクチン固定ビーズの入った密封袋を室温のベンチに置きます。机の上に帯電防止布を置き、ポータブル除電器をワークスペースに向けて配置します。帯電防止ピンセットを使用して、レクチン固定ビーズの間に2つのスペーサービーズが配置されるように、ビーズを空の先端に挿入します。
ニッパーを使って先端の上部をやさしく絞って開口部を閉じます。先端が曲がっている場合は、手動でまっすぐにします。その後、必要になるまで摂氏4度の乾燥剤を入れた密封袋に保管します。
約10マイクロリットルの分析種タンパク質溶液を、10マイクログラムの乾燥ビオチン化試薬が入ったチューブに加えます。混合物を渦巻きにしてよく混ぜます。その後、室温で1000Gで5秒間遠心分離します。
チューブを光を避けて室温で1時間インキュベートします。次に、90マイクロリットルのプロービングバッファーをサンプルに加えて、インキュベートする前に10倍に希釈します。自動反応測定装置の正面ドアを開けます。
液体リザーバー、準備したチップ、および分析物を装置内の指定された位置に移します。自動反応測定装置本体の電源スイッチをONにします。画面に表示されている診断開始ボタンをタッチします。
ホーム画面のAssayを押して、プロトコールを選択します。次に、アッセイメソッドのBAssaySTDオプションを選択し、Nextを押します。サンプル名を入力し、[次へ] を押します。
次に、ヒントの名前を入力し、もう一度[次へ]を押します。右側のメモを確認し、[開始]を押して測定を開始します。画面が実行モードに切り替わったことを確認し、ファイナライズ矢印が強調表示されるまで待ちます。
測定が完了すると、画面が結果モードに変わります。本体側面のポートにUSBメモリースティックを差し込みます。結果モードで[エクスポート]を押して、データをCSVファイルとして保存し、Excelでさらにデータ分析と個別のグラフを作成します。
12種類のポリアクリルアミド糖に対するレクチンの結合パターンには明確な違いが見られました。チップ測定を行った精製タンパク質製品は、特定のレクチンの糖類に対する反応性の増加を示しました。
