この作業の一部は助成R 44 AI072784下国立衛生研究所（NIH）によってサポートされていました。我々は博士キルスティンセントジョージ、サラB. Griesemer、ダリルラムソンとウイルス病研究室のエイミー·ディーン、定量インフルエンザビリオンと臨床的に検証されインフルエンザへのアクセスをリアルタイム用ズワースセンター、ニューヨーク州保健部に感謝PCRアッセイ。

<ol>
	<li>Boom, R., Sol, C. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+simple+method+for+purification+of+nucleic+acids.">Rapid and simple method for purification of nucleic acids.</a> J. Clin. Microbiol. 28, 495-503 (1990).</li><li>Baker, M. 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TruTipの概念およびワークフローの簡略化（ 図1）、それは容易に適合させる、自動化された効率的および臨床サンプルマトリックス、入力サンプルボリューム、および液体ハンドリングシステムの数のために有効である。これは、すべての臨床試料が一意であることが認識されるべきであり、粘度、粒子状物質、粘液、表面汚染物質、微生物、および/またはヒトの遺伝的背景の次に1つを変化するであろう。臨床試料組成物および自動TruTipサンプル調製プロトコルの利用目的の予想ばらつきを考えると、それは、したがって、特定のサンプルの種類の所望の結果を達成するために、TruTip手順における特定のステップを修正する必要があるかもしれない。かかわらず、サンプルタイプの、しかし、典型的に核酸の純度及び/又は回収に最も大きな影響を及ぼすTruTipパラメータがあります。 <ol><li> 溶解バッファー（とアルコール）との混合と均質化のサンプル。TruTips再を持っているがlatively大きな細孔の大きさ、サンプルの均質化と液化は、効率的な細胞溶解のために非常に重要である、とTruTipモノリス以降の結合手順。均質かつ十分に液化溶解物、サンプルがサンプル全体の処理時間を短縮し、より高い流量を有するTruTipを介して移動することができる。大容量プラズマプロトコルは、大きな入力サンプル量にもかかわらず、完全に均質と難しいサンプル（オンラインまたはオフライン）液化するためのユーザーのための可能性を示しています。 </li><li> 流速。遅い流速核酸結合又は溶出中には、通常、全体の処理時間を犠牲にもかかわらず、より高い核酸収量をもたらす。遅い流量はまた、DNAのせん断の程度を減らすことができます。 </li><li> サイクル数。吸引の最適な数とサイクルを分配するには、サンプルの種類、総サンプル量、および流速に依存する。 図1のステップ1は、典型的には、サイクルnumbeポイントですRS（と流量）などの異なる患者からNPA粘度の範囲のために最適化するために、より挑戦的な溶解物のいずれかを表す咽頭吸引（ 図5）のようなサンプルを用いて、いくつかの実証的な最適化が必要になる場合があります。 </li><li> 乾燥。TruTipモノリスの完全な乾燥が精製された核酸試料を抑制下流のプロセスまたはテストを共溶出するから残留有機溶剤を防止することが不可欠である。 TruTipを遠心分離又は吸引濾過によって乾燥されていないので、乾燥工程中に流量およびサイクル数の両方を最大化することが重要である。たまに乾燥サイクルが完了した後TruTipの末端に洗浄液の残液滴が存在する。ハミルトンロボットは、それによって無溶媒溶出を確実に、液滴を解放するために井戸の側の &quot;先端タッチ&quot;を実行する能力を持っています。 epMotionシステムがこの機能を持っているが、エルでTruTip末端のプレすすぎませんutionバッファは、同じ効果を達成するようにプログラムすることができる。 </li></ol>ロボットアームチャネルに幾何学、ピペットチップ材料、及び取り付け方法は、各機器メーカー一意であるため、異なるTruTip構築物は、それぞれの液体ハンドリングシステムのために必要とされる。 TruTipモノリス寸法（直径、厚さ、孔径）は、核酸結合能（および溶出効率）と相関しない、などの任意の固相抽出技術が期待される。厚い（&gt; 4 mm）の行列は、大容量のサンプルのための核酸結合容量を増加および/または特定のTruTip形式を横切る結合容量が等しくなるように、1mlのTruTipに埋め込まれてもよいが、TruTipの厚さとの間の流量との間にトレードオフが存在する初期結合工程（粗溶解の存在下で）。従って、それは（ 例えば&lt;、自動化されたプロトコルの最初のステップのための大ボリュームピペットチップに大径のモノリスを埋め込 ​​むことが時として有利で ​​ある/ em&gt;の大容量抽出のために5ミリリットルハミルトン/ Akonni TruTips）。リキッドハンドリングロボットの製造業者によって規定特定TruTip構成を考えると、しかし、我々は、必ずしもTruTip核酸利回りは異なるメーカーの、または異なるTruTipサイズ渡るリキッドハンドリングプラットフォーム間で同一であることを期待しないでください。 彼らは通常は無菌の部位（ 例えば脳脊髄液）から取得していない限り、臨床検体は（定義により）ヒトゲノムDNAのかなりの量が含まれます。他のアプリケーションで不要なヒトDNAゲノムの背景（ 図5のような）を表す一方、時にはヒトゲノムDNAは、（ 図6のように）が望まれている。バックグラウンドDNAの存在は、通常モノリスの結合容量を超えない試料中の核酸の総量限り、問題とならない、背景DNAは、キャリアとして機能することができ、所望の標的核酸場合酸は微量で存在する。ことを除いて感染症検査の試料調製対物レンズに類似している大容量の血漿抽出プロトコール（ 図7）母系DNAの10〜20倍過剰の存在下で（断片化）胎児DNAを単離すること、を目的配列は高度に合同であるとのみ特異性の高い分子検査および/またはサイズの差別によって区別す​​ることができます。この場合には、総循環DNAを5mlのTruTipを用いて単離し、高分子続くと低分子量の胎児DNAを、結合バッファー条件を変えることによって、1mlのTruTipに後続の結合および溶出を介して分離される。シリカモノリスへの結合および溶出特性に基づいて標的核酸の選択的なサイズ分離と濃縮は、膜またはサイズ排除スピンカラムによって達成さよりも有意に異なる作用機モードである。ヒトゲノムDNAからサイズ分離と微生物のDNAの濃縮は、かもしれないカスタマイズTruTip結合および溶出バッファーを経由して、将来のアプリケーションでccomplished。 自動化されたプロトコルは、多様な臨床サンプル、そしてそれがどのように大規模なボリュームと特定の液体ハンドリングロボットに適合させることができるを処理するためTruTipモノリス自体の有用性を強調してここに示しました。合理化された方法は、典型的には他の自動化システムと比較してより高速な抽出プロトコールをもたらす。 TruTip手続きを自動化するために必要な主要なハードウェアはピペットチャンネルアーム自体ではなく、磁気棒、真空システムであるため、TruTip技術のシンプルさは、しかし、また、新しい、自動化された核酸精製システムを購入に興味のある人のためのいくつかのコスト優位性を与える、または遠心分離機オンボード。予め充填された試薬プレートを利用することも領域と必要な消耗を低減し、走行あたりのスルー​​プットを倍増できる。 TruTipプロトコルでデッキスペースを最小限に抑えることも、上流またはdを統合する上級ユーザーを可能にするTruTipとownstream自動化されたプロセス。例えば分別全血にハミルトンのeasyBloodソリューションが大幅にバイオバンキングプロセスを合理化したい自動TruTip抽出方法で組み込むことができます。このような核酸定量、正規化、PCRをセットアップ、またはDNA配列としてポスト抽出プロセスも容易に大きくリキッドハンドリングプラットフォーム上TruTipに統合されています。

核酸精製は、のみを使用し、ほとんどの研究分子診断のために必要であり、ライフサイエンスアプリケーション。様々なアプローチが、その多くは、カオトロピック塩1の存在下でシリカに結合する核酸の基本的な原理に基づいており、フェノール/クロロホルム抽出の時から浮上している。抽出プロセスは、（2-13に例を参照）、スピンフィルタ、磁気ビーズおよびライフサイエンス業界を支配して関連するアプローチで、様々なビーズとメンブレンベースの形式を使用することにより合理化および自動化されています。効果的で挑戦的な臨床行列に直面したとき、粒子と膜は限界を知っていた。例えば、膜およびビーズベースの列が対応し、小孔サイズを（従って、高い背圧）があり、遠心分離または真空システムによって処理されるために、支持体のいくつかのタイプを必要とする。膜やビーズ列結果のの物理的特性効率的な消耗、及び/又は一方向流路を加工することができる合計（入力）サンプル量を詰まらせることなく処理することができる試料の種類を制限する重要な流体抵抗。逆に、磁性粒子は攪拌により試料全体に分散されている必要があります。均一溶液中に磁性粒子を分散させる必要が最も磁気ビーズ消耗品を使用して処理することができる総入力サンプル量を制限する。臨床サンプルの属性（例えば、粘度や複雑さなど）がチューブまたはロッドの側面に非効率的な磁気粒子濃度につながることができます。また、シリカ微粒子は、その磁化を失い、最終サンプルを汚染する、抽出プロセス中にビーズのオフに破ることができる。 TruTip技術は、これらの核酸試料処理の制約および制限14のいくつかを克服するために開発された。多孔質モノリス内に埋め込むことによりピペットチップは、流体の背圧が低下し、真空下（ すなわち、ピペット吸引）による流量制御を可能にする。この機能は、大幅に簡素化することが困難な試料タイプ（ 図1）から核酸を精製するために必要な抽出処理および計装を可能にする。モノリスのジオメトリと気孔率はモノリスの厚さは1.0から5.0ミリリットルまでのサンプル量に十分な核酸結合容量を提供しながら、目詰まりを最小限にするために調整されています。検体吸引分注時の双方向の流れがサンプル抽出かつ効率的な核酸の回収および溶出に対する結合モノリスとの間の延長された滞留時間を可能にし、ピペットチップ自体の体積容量を超えること処理される比較的大きな試料体積を可能にする。我々は以前に、シングルまたはマルチチャネルライを使用して、鼻咽頭サンプルからインフルエンザRNAを精製するための手動TruTip手順の開発と応用が報告され忍ピペッター15。同等の抽出効率が10 6遺伝子コピーで自動QIAcubeと手動TruTipメソッド間インフルエンザ当たりミリリットル鼻咽頭吸引液を得た。本研究の目的は、一般的に基準臨床検査で見つかった液体ハンドリングロボットを用いた鼻咽頭吸引（NPA）および他の臨床的に関連するサンプルタイプの中·高スループット自動化TruTip核酸の精製手順を実証することであった。

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruTip Influenza Extraction Kit (EPM TruTips)</td>
			<td>Akonni Biosystems, Inc.</td>
			<td>300-11120</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% Ethanol</td>
			<td>Acros Organics/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AC615110040</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>99% Acetone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270725-4L</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC-treated water</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>AM9906</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoir, 30 ml</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>960050100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep well plate 96/2,000 &mu;l</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>30502302</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epT.I.P.S. Motion Filtertips, 1,000 &mu;l</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>960050100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epMotion 5070 System</td>
			<td rowspan="3">Eppendorf</td>
			<td>5070 000.000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensing tool TM1000-8</td>
			<td>960001061</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir rack</td>
			<td>960002148</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Table 1. Reagents and equipment for automated RNA extraction from NPA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruTip gDNA Blood Extraction Kit (Hamilton TruTips)</td>
			<td>Akonni Biosystems, Inc.</td>
			<td>300-20341</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td>Acros Organics/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AC615110040</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>AMRESCO LLC</td>
			<td>E195</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Hamilton filtered CO-RE 96 tip rack</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>235905</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Hamilton non-filtered CO-RE 96 tip rack</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>235904</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Reagent Trough</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>187297</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep Well 2 ml plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2800</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc 96 DWP-2 ml</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>27874</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Trough</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-222-412</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton STAR System</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173027</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Independent Pipette Channels / Modular Arm</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173081/173050</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml 96-channel head</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>199090</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182085</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample Carriers/Inserts</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173400/182238</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182090</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiflex Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188039</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HHS2 Heater Shaker Unit</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>199033</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188047</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Table 2. Regents and equipment for 96-well genomic DNA extraction from whole blood.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruTip R+D Circulating DNA Extraction Kit (Hamilton TruTips)</td>
			<td>Akonni Biosystems, Inc.</td>
			<td>Call to inquire</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>459828-1L</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Acros Organics/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AC327270010</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>AMRESCO LLC</td>
			<td>E195</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filtered 4 ml Tips</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>184022</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unfiltered 1 ml Tips</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>235939</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Deep Well Plates</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2800</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>05-526B</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Reagent Troughs</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>187297</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>120 ml Reagent Troughs</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182703</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Volume 96-Pos Reagent Troughs</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14-222-412</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STARplus Autoload Workstation Base / Deck Module</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173025/190012</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Independent Pipette Channels / Arm</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173081/173052</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Independent Channel / Modular Arm</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>184090/173050</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182090</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiflex Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188039</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack Carrier for 50 ml Reagent Troughs</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188047</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>120 ml Reagent trough carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>185290</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182085</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Tube Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182245</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Position Sample Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173400</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>32 Position Sample Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173410</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Table 3. Reagents and equipment for large volume DNA extraction from plasma.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput, automated extraction of dna and rna from clinical samples using trutip technology on common liquid handling robots

TruTipは、多孔質モノリシック結合マトリックスがピペットチップ内に挿入される単純な核酸抽出技術である。モノリスの形状は、1.0から5.0ミリリットルにボリュームの範囲の特定のピペットチップに適合させることができる。モノリスの大気孔率は容易に最小限の流体の背圧でそれを通過する粘性または複雑なサンプルを有効にします。双方向フローは、モノリスと試料との間の滞留時間を最大化し、単一TruTip内で処理すべき大量の試料を可能にする。かかわらず、サンプルボリュームまたはTruTipジオメトリの基本的な手順は、細胞溶解、TruTipモノリスの内側の孔に結合核酸、結合していない試料成分と溶解緩衝液を洗い流し、適切な緩衝液中に精製し、濃縮した核酸を溶出するが含まれています。 TruTipの属性と適応はエッペンドルフepMotion 5070を使用して、3つの自動化された臨床サンプル処理プロトコルで実証されている鼻咽頭吸引液からRNAの単離、全血からのゲノムDNAの分離、及び母体血漿（それぞれ）の大ボリュームから胎児のDNA抽出と濃縮を含め、ハミルトンSTARとSTARplus液体ハンドリングロボット、。

NPAからインフルエンザRNA抽出のためのリアルタイムPCRデータは、 図5Aに示されている。推定された核酸抽出効率は、プロトコル15の手動バージョンで得られた結果と同様である。平均C T値の線形応答は、平均C Tの標準偏差が1未満の値を持つ6 4 10〜10遺伝子コピーミリリットル-1は 、（AとBインフルエンザ= 0.99と0.98、それぞれR 2）インフルエンザを改正した観察されサイクル。 epMotionシステムとの交差汚染の有無を10 6遺伝子コピーミリリットル-1 NPAを含む12正NPAサンプルは12バッファブランクが散在された図5Bに示されている。陽性対照の平均C tが ±0.14 30.16だった、とすべてのバッファー·ブランクが陰性であった。全試料の処理時間は、それぞれ8,16及び24の試料について16、28及び40分である。典型的な臨床鼻咽頭吸引または綿棒が10 7遺伝子コピーミリリットル-1（1,000 TCID 50あたりビリオン16と&gt; 10 4 TCID 50ミリリットル-1インフルエンザ17と仮定して）が含まれますので、自動epMotionプロトコルは過半数に有効であると期待されている臨床NPA標本の。 ヒトゲノムDNAに対して行わ分子試験の範囲を考えると、全血から核酸抽出の主な目的は、汚染物質を含まない、高分子量のゲノムDNAを製造することである。 96サンプルのための自動化されたプロトコル（ 例えばプロメガMagneSil = 90分とキアゲンQIAamp調製DNA血液バイオロボットMDxのシステム= 2.5時間）。 図6Aは、UV /可視吸光度プロファイルを示し、他の自動化されたシステムに比べて改善されて1時間内に完了する平均で、ハミルトンSTARプロトコル上の45試薬ブランクで同時に処理45陽性の血液サンプル<sub&gt; 280分の260 1.96の比率と1.93の平均230分の260比。 吸光度比260/280 1.7から2.0と230分の260比と&gt; 1.7は、一般的に残留塩、タンパク質や溶剤、最下流分子のアプリケーションのための許容の自由、非常に純粋なDNAを示すものである。 図6B中の1％アガロースゲルで得られたgDNAは、最小限の剪断を有する高分子量（&gt; 24キロバイト）であることを示している。 45陽性サンプルのフルセットからの平均核酸収率は5.26である±ライフテクノロジーズQuantifilerヒトDNA定量キットに基づいて、200μlの全血あたり0.46μgのヒトDNA、。 図5Bに示したものと同様交差汚染試験は陰性対照バッファブランク陽性サンプルが点在し、並行して抽出を行った。すべてのブランクが再びPCR（図示せず）による陰性であった。精製されたgDNAはまた、多数の他のPCRベースの解析（図示せず）に適している。 大容量TruTip手順で処理プールされた母体の血漿サンプルの8複製サンプルからリアルタイム結果を図7に示す。完全なプロトコル（オフラインプロテイナーゼKのインキュベーションを含む）は、核酸キット（全く同等の自動抽出キットはまだ利用できません）循環キアゲンマニュアルに似て約2.5時間、に仕上がっています。すべての複製の平均C T値は34.58±0.66及び29.76±胎児の男性（CHY）と合計（CH1）DNAのための0.50、それぞれ、自動化された抽出方法の優れた再現性を示しています。全DNAプール内の胎児DNAの濃度は（ゲノム換算）であり、2.8％の全サンプルにわたる結果平均％胎児DNAと、規格に適合ポイント分析の比較に基づいて計算されます。このサンプル抽出を実行する前にプールしたため、このサンプルの実際の％ウシ胎児DNAは不明である。胎児のDNA合成、非プール血漿サンプルはTruTip法を用いて抽出キアゲン循環核酸キット（図示せず）を用いた結果と比較して、典型的には1.5倍高い。 <img alt="図1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig1.jpg" /> 図1。 TruTip抽出処理と、液体ハンドリングシステムの作業の流れにかかわらず、その他の試料調製又は液体処理工程は、特定の液体処理装置およびソフトウェアの機能に応じて自動化されたルーチンに組み込むことができる。 <img alt="図2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig2.jpg" /> 図2。 （A）エッペンドルフepMotion 5070サンプルプレートレイアウト。試薬/ consuma（B）のアレンジメントワークテーブル上BLES。epMotionしか同時に8サンプルの最大値を処理しますが、サンプルプレートは、24サンプル（それぞれの列1、5および9）にするように構成できは<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig2large.jpg" target="_blank">大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig3.jpg" /> 図3。全血からゲノムDNAを精製するためのハミルトンSTARデッキレイアウト（ノンスケール）デッキポジション1 =ハミルトン1ミリリットルフィルタリングヒント; 2 =ハミルトン1ミリリットル非フィルタ処理のヒント; 3 = Akonni /ハミルトン1ミリリットルLPT 2ミリメートルのTruTips; 4 =入力血液サンプルキャリア（採血管やマイクロチューブ）、溶解緩衝液Fの5-9 = 290ミリリットル試薬トラフ、エタノールは、バッファJ、洗浄バッファーKと溶出バッファーA2を洗って、それぞれ、10 = 96 DEEPうまく結合板、11 = 96深井戸Jを洗って、12 = 96深井戸Kを洗う、13 = 96深井戸溶出板;ヌンク96ディープウェル培養プレートを14 =ハミルトンHHS2ヒーター/シェーカー; 15 = 50ミリリットル試薬トラフプロテイナーゼKを含む<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig3large.jpg" target="_blank">より大きな数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図4" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig4.jpg" /> 図4。大容量の血漿試料（正確な縮尺ではない）からDNAを精製するためのハミルトンSTARplusデッキレイアウトシステムは、8×5ミリリットルのチャンネルと8×1ミリリットルのチャネル（デッキレイアウトに図示せず）を備えている。デッキポジション1 =ハミルトン4ミリリットルフィルタリングヒント; 2 = Akonni /ハミルトンを5ml TruTips; 3 =ソース血漿サンプル、4 = 50 mlコニカルチューブ、CN-W1、CN-W2とCN-W4を含む5 = 120ミリリットル試薬トラフreageNTS; CN-L1試薬を含む7 = 290ミリリットル試薬トラフ;; 8 = 290ミリリットル試薬トラフ含むCNプロテイナーゼK、CN-B2、CN-B3、EBA2、EBBとCN-W3試薬を含む6 =低容量試薬トラフ-B1試薬; 9ステップ1 = 96ディープウェルプレート、10ステップ2 = 96ディープウェルプレート、精製、最終製品のために11 =サンプルのキャリア、12 =ハミルトン1ミリリットルフィルタリングされていないヒント; 13 = Akonni /ハミルトン1ミリリットルLPT 4ミリメートルTruTipsは<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig4large.jpg" target="_blank">大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図5" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig5.jpg" /> 図5。 （）。インフルエンザウイルスの自動TruTip抽出からのリアルタイムPCRの結果は、鼻咽頭吸引（NPA）に添加。入力NPA体積=100μlを、溶出体積=50μlの。結果が3の複製、電子の平均である希釈レベルとインフルエンザターゲットごとに異なる​​5つのNPAの背景（N = 15）からxtractions。定量PCRは、以前15に記載のアッセイ条件にライトサイクラー480システム上で行われた。12正NPAサンプルテンプレートなしのコントロールおよび自動抽出手順の対象と散在しているとき（B）いいえ交差汚染が検出されない。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig5large.jpg" target="_blank">より大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図6" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig6.jpg" /> 図6。ランダムに選択された10〜光度1000（ThermoFisher）から全血からのヒトゲノムDNA抽出の結果。）UV-可視トレースが複製されます。B）1％TruTip精製したgDNAのアガロースゲル。 M =フィッシャー24キロバイトマックスDNAラダー。レーン1から4 =〜100ngの精製gDNAを4からランダムに選択された複製。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig6large.jpg" target="_blank">より大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図7" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig7.jpg" /> 図7。自由に血漿からDNAを循環させる8つの反復TruTip抽出からのリアルタイムPCRの結果。アスタリスク（*または**）で表されるサンプルは、別の日に抽出した。 CHYは男性胎児DNAを定量化し、CH1合計存在するDNA（胎児と母体の）を定量化します。定量PCRはCHYとCH1 18を標的と以前に発表されたアッセイとライトサイクラー480システム（Roche社）を行った。

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High-throughput, Automated Extraction of DNA and RNA from Clinical Samples using TruTip Technology on Common Liquid Handling Robots

TruTipは、多孔質モノリシック結合マトリックスがピペットチップ内に挿入される単純な核酸抽出技術である。これにより、試料調製フォーマットは、ほとんどの液体ハンドリング機器と互換性があり、高スループットの臨床応用およびサンプルタイプに多くの媒体を用いることができる。

共通液ハンドリングロボットでTruTipテクノロジーを使用して臨床検体からのDNAやRNAのハイスループット、自動抽出

TruTip is a simple nucleic acid extraction  technology whereby a porous, monolithic binding matrix is inserted into a  pipette tip. The geometry of the ...

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34.4K ビュー.  Akonni Biosystems, Inc.. TruTipは、多孔質モノリシック結合マトリックスがピペットチップ内に挿入される単純な核酸抽出技術である。これにより、試料調製フォーマットは、ほとんどの液体ハンドリング機器と互換性があり、高スループットの臨床応用およびサンプルタイプに多くの媒体を用いることができる。

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CometChip: A High-throughput 96-Well Platform for Measuring DNA Damage in Microarrayed Human Cells

DNA damaging agents can promote aging, disease and cancer and they are ubiquitous in the environment and produced within human cells as normal cellular metabolites. Ironically, at high doses DNA damaging agents are also used to treat cancer. The ability to quantify DNA damage responses is thus critical in the public health, pharmaceutical and clinical domains. Here, we describe a novel platform that exploits microfabrication techniques to pattern cells in a fixed microarray. The &#8216;CometChip&#8217; is based upon the well-established single cell gel electrophoresis assay (a.k.a. the comet assay), which estimates the level of DNA damage by evaluating the extent of DNA migration through a matrix in an electrical field. The type of damage measured by this assay includes abasic sites, crosslinks, and strand breaks. Instead of being randomly dispersed in agarose in the traditional assay, cells are captured into an agarose microwell array by gravity. The platform also expands from the size of a standard microscope slide to a 96-well format, enabling parallel processing. Here we describe the protocols of using the chip to evaluate DNA damage caused by known genotoxic agents and the cellular repair response followed after exposure. Through the integration of biological and engineering principles, this method potentiates robust and sensitive measurements of DNA damage in human cells and provides the necessary throughput for genotoxicity testing, drug development, epidemiological studies and clinical assays.

We describe here a platform that allows comet assay detection of DNA damage with unprecedented throughput. The device patterns mammalian cells into a microarray and enables parallel processing of 96 samples. The approach facilitates analysis of base level DNA damage, exposure-induced DNA damage and DNA repair kinetics.

CometChip：マイクロアレイヒト細胞におけるDNA損傷を測定するためのハイスループット96ウェルプラットフォーム

DNA damaging agents can promote aging, disease and cancer and they are ubiquitous in the environment and produced within human cells as normal cellular ...

生物工学

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native context at a molecular level. The technique involves initially preserving the sample in its native state by rapidly freezing the specimen in vitreous ice, then collecting a series of micrographs from different angles at high magnification, and finally computationally reconstructing a 3-D density map. The frozen-hydrated specimen is extremely sensitive to the electron beam and so micrographs are collected at very low electron doses to limit the radiation damage. As a result, the raw cryo-tomogram has a very low signal to noise ratio characterized by an intrinsically noisy image. To better visualize subjects of interest, conventional imaging analysis and sub-tomogram averaging in which sub-tomograms of the subject are extracted from the initial tomogram and aligned and averaged are utilized to improve both contrast and resolution. Large datasets of tilt-series are essential to understanding and resolving the complexes at different states, conditions, or mutations as well as obtaining a large enough collection of sub-tomograms for averaging and classification. Collecting and processing this data can be a major obstacle preventing further analysis. Here we describe a high-throughput cryo-ET protocol based on a computer-controlled 300kV cryo-electron microscope, a direct detection device (DDD) camera and a highly effective, semi-automated image-processing pipeline software wrapper library tomoauto developed in-house. This protocol has been effectively utilized to visualize the intact type III secretion system (T3SS) in Shigella flexneri minicells. It can be applicable to any project suitable for cryo-ET.

We present a protocol on how to utilize high-throughput cryo-electron tomography to determine high resolution in situ structures of molecular machines. The protocol permits large amounts of data to be processed, avoids common bottlenecks and reduces resource downtime, allowing the user to focus on important biological questions.

Tomoautoの使用：ハイスループット自動クライオ電子断層撮影のためのプロトコル

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; represented by &#34;devices&#34; created as combinations of individual genetic components. However, manual assembly of such large numbers of devices is time-intensive, error-prone, and costly. The increasing sophistication and scale of synthetic biology research necessitates an efficient, reproducible way to accommodate large-scale, complex, and high throughput device construction.
Here, a DNA assembly protocol using the Type-IIS restriction endonuclease based Modular Cloning (MoClo) technique is automated on two liquid-handling robotic platforms. Automated liquid-handling robots require careful, often times tedious optimization of pipetting parameters for liquids of different viscosities (e.g. enzymes, DNA, water, buffers), as well as explicit programming to ensure correct aspiration and dispensing of DNA parts and reagents. This makes manual script writing for complex assemblies just as problematic as manual DNA assembly, and necessitates a software tool that can automate script generation. To this end, we have developed a web-based software tool, http://mocloassembly.com, for generating combinatorial DNA device libraries from basic DNA parts uploaded as Genbank files. We provide access to the tool, and an export file from our liquid handler software which includes optimized liquid classes, labware parameters, and deck layout. All DNA parts used are available through Addgene, and their digital maps can be accessed via the Boston University BDC ICE Registry. Together, these elements provide a foundation for other organizations to automate modular cloning experiments and similar protocols.
The automated DNA assembly workflow presented here enables the repeatable, automated, high-throughput production of DNA devices, and reduces the risk of human error arising from repetitive manual pipetting. Sequencing data show the automated DNA assembly reactions generated from this workflow are ~95% correct and require as little as 4% as much hands-on time, compared to manual reaction preparation.

Here, an automated workflow to perform modular DNA &#34;device&#34; assembly using a modular cloning DNA assembly method on liquid-handling robots is presented. The protocol uses an intuitive software tool for generating liquid handler picklists for combinatorial DNA device library generation, which we demonstrate using two liquid handling platforms.

モジュラー DNA デバイスの液体ハンドリング アセンブリを自動化

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of bioprocess conditions. One important aspect is the improvement of cultivation medium to provide an optimal environment for microbial formation of the product of interest. It is well accepted that the media composition can dramatically influence overall bioprocess performance. Nutrition medium optimization is known to improve recombinant protein production with microbial systems and thus, this is a rewarding step in bioprocess development. However, very often standard media recipes are taken from literature, since tailor-made design of the cultivation medium is a tedious task that demands microbioreactor technology for sufficient cultivation throughput, fast product analytics, as well as support by lab robotics to enable reliability in liquid handling steps. Furthermore, advanced mathematical methods are required for rationally analyzing measurement data and efficiently designing parallel experiments such as to achieve optimal information content.
The generic nature of the presented protocol allows for easy adaption to different lab equipment, other expression hosts, and target proteins of interest, as well as further bioprocess parameters. Moreover, other optimization objectives like protein production rate, specific yield, or product quality can be chosen to fit the scope of other optimization studies. The applied Kriging Toolbox (KriKit) is a general tool for Design of Experiments (DOE) that contributes to improved holistic bioprocess optimization. It also supports multi-objective optimization which can be important in optimizing both upstream and downstream processes.

This manuscript describes a generic approach for tailor-made design of microbial cultivation media. This is enabled by an iterative workflow combining Kriging-based experimental design and microbioreactor technology for sufficient cultivation throughput, which is supported by lab robotics to increase reliability and speed in liquid handling media preparation.

自動 Microbioreactor 技術を用いた異種タンパク質生産の最適化のための汎用プロトコル

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Optimizing the Use of a Liquid Handling Robot to Conduct a High Throughput Forward Chemical Genetics Screen of Arabidopsis thaliana

Chemical genetics is increasingly being employed to decode traits in plants that may be recalcitrant to traditional genetics due to gene redundancy or lethality. However, the probability of a synthetic small molecule being bioactive is low; therefore, thousands of molecules must be tested in order to find those of interest. Liquid handling robotics systems are designed to handle large numbers of samples, increasing the speed with which a chemical library can be screened in addition to minimizing/standardizing error. To achieve a high-throughput forward chemical genetics screen of a library of 50,000 small molecules on Arabidopsis thaliana (Arabidopsis), protocols using a bench-top multichannel liquid handling robot were developed that require minimal technician involvement. With these protocols, 3,271 small molecules were discovered that caused visible phenotypic alterations. 1,563 compounds induced short roots, 1,148 compounds altered coloration, 383 compounds caused root hair and other, non-categorized, alterations, and 177 compounds inhibited germination.

Optimizing the Use of a Liquid Handling Robot to Conduct a High Throughput Forward Chemical Genetics Screen of Arabidopsis thaliana

A high throughput screen of synthetic small molecules was conducted on the model plant species, Arabidopsis thaliana. This protocol, developed for a liquid handling robot, increases the speed of forward chemical genetics screens, accelerating the discovery of novel small molecules affecting plant physiology.

高スループット転送化学遺伝学の画面シロイヌナズナを行う液体処理ロボットの使用を最適化します。

Chemical genetics is increasingly being employed to decode traits in plants that may be recalcitrant to traditional genetics due to gene redundancy or ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of experimental conditions while minimizing potential process variability. Applications of this approach include: clone screening, temperature and pH shifts,&#160;media and supplement optimization. Furthermore, the small reactor volumes are conducive to large Design of Experiments that investigate a wide range of conditions. This allows upstream processes to be significantly optimized before scale-up where experimentation is more limited in scope due to time and economic constraints. Automated microscale bioreactor systems offer various advantages over traditional small scale cell culture units, such as shake flasks or spinner flasks. However, during pilot scale process development&#160;significant care must be taken to ensure that these advantages are realized. When run with care, the system can enable high level automation, can be programmed to run DOE&#39;s with a higher number of variables&#160;and can reduce sampling time when integrated with a nutrient analyzer or cell counter. Integration of the expert-derived heuristics presented here, with current automated microscale bioreactor experiments can minimize common pitfalls that hinder meaningful results. In the extreme, failure to adhere to the principles laid out here can lead to equipment damage that requires expensive repairs. Furthermore, the microbioreactor systems have small culture volumes&#160;making characterization of cell culture conditions difficult. The number and amount of samples taken in-process in batch mode culture is limited as operating volumes cannot fall below 10 mL. This method will discuss the benefits and drawbacks of microscale bioreactor systems.

A detailed protocol for the concurrent operation of 48 parallel cell cultures under varied conditions in a microbioreactor system is presented. Cell culture process, harvest and subsequent antibody titer analysis are described.

高スループットの自動モデル IgG1 CHO 細胞での生産のための Microbioreactor システム

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain selection and by developing bioprocess parameters. Shake flasks have been used for this purpose. They, however, lack the capability to control the process parameters such as pH and dissolved oxygen (DO). This limitation can be overcome with the help of an automated micro-bioreactor. These bioreactors mimic cultivation at a larger scale. One of the major advantages of this system is the integration of the Design of Experiment (DOE) in the software. This integration enables establishing a design where multiple process parameters can be varied simultaneously. The critical process parameters and optimum bioprocess conditions can be analyzed within the software. The focus of the work presented here is to introduce the user to the steps involved in process design in the software and incorporation of the DOE within the cultivation run.

Here, we present a detailed procedure to run a Design of Experiment in an automated micro-bioreactor followed by cell harvest and protein quantification using a Protein A column.

中国ハムスター卵巣細胞培養におけるハイスループット自動マイクロバイオリアクターを用いたプロセス最適化

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

High Throughput Yeast Strain Phenotyping with Droplet-Based RNA Sequencing

The powerful tools available to edit yeast genomes have made this microbe a valuable platform for engineering. While it is now possible to construct libraries of millions of genetically distinct strains, screening for a desired phenotype remains a significant obstacle. With existing screening techniques, there is a tradeoff between information output and throughput, with high-throughput screening typically being performed on one product of interest. Therefore, we present an approach to accelerate strain screening by adapting single cell RNA sequencing to isogenic picoliter colonies of genetically engineered yeast strains. To address the unique challenges of performing RNA sequencing on yeast cells, we culture isogenic yeast colonies within hydrogels and spheroplast prior to performing RNA sequencing. The RNA sequencing data can be used to infer yeast phenotypes and sort out engineered pathways. The scalability of our method addresses a critical obstruction in microbial engineering.

A bottleneck in the &#8216;design-build-test&#8217; cycle of microbial engineering is the speed at which we can perform functional screens of strains. We describe a high-throughput method for strain screening applied to hundreds to thousands of yeast cells per experiment that utilizes droplet-based RNA sequencing.

液滴ベースのRNAシーケンシングによるハイスループット酵母株フェノタイピング

The powerful tools available to edit yeast genomes have made this microbe a valuable platform for engineering. While it is now possible to construct ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and organs are either highly expensive, like robotics, or lack nanoliter volume and millisecond time accuracy in liquid manipulation. We herein present the design and fabrication of a microfluidic system, which consists of 1,500 culture units, an array of enhanced peristaltic pumps and an on-site mixing modulus. To demonstrate the capacities of the microfluidic device, neural stem cell (NSC) spheres are maintained in the proposed system. We observed that when the NSC sphere is exposed to CXCL in day 1 and EGF in day 2, the round-shaped conformation is well maintained. Variation in the input order of 6 drugs causes morphological changes to the NSC sphere and the expression level representative marker for NSC stemness (i.e., Hes5 and Dcx). These results indicate that dynamic and complex environmental conditions have great effects on NSC differentiation and self-renewal, and the proposed microfluidic device is a suitable platform for high throughput studies on the complex life machinery.

We present a microfluidic system for high throughput studies on complex life machinery, which consists of 1500 culture units, an array of enhanced peristaltic pumps and an on-site mixing modulus. The microfluidic chip allows for the analysis of the highly complex and dynamic micro-environmental conditions in vivo.

ハイスループットマイクロ流体装置を用いた動的環境条件の生成

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...

Lustro Automation技術を用いた酵母光遺伝学的応答解析

High-Throughput Optogenetics Experiments in Yeast Using the Automated Platform Lustro

Optogenetics offers precise control over cellular behavior by utilizing genetically encoded light-sensitive proteins. However, optimizing these systems to achieve the desired functionality often requires multiple design-build-test cycles, which can be time-consuming and labor-intensive. To address this challenge, we have developed Lustro, a platform that combines light stimulation with laboratory automation, enabling efficient high-throughput screening and characterization of optogenetic systems.
Lustro utilizes an automation workstation equipped with an illumination device, a shaking device, and a plate reader. By employing a robotic arm, Lustro automates the movement of a microwell plate between these devices, allowing for the stimulation of optogenetic strains and the measurement of&#160;their response. This protocol provides a step-by-step guide on using Lustro to characterize optogenetic systems for gene expression control in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae. The protocol covers the setup of Lustro&#39;s components, including the integration of the illumination device with the automation workstation. It also provides detailed instructions for programming the illumination device, plate reader, and robot, ensuring smooth operation and data acquisition throughout the experimental process.

著者スポットライト:Lustro を使用したオプトジェネティクス研究の進歩 

This protocol outlines the steps for utilizing the automated platform Lustro to perform high-throughput characterization of optogenetic systems in yeast.

自動化プラットフォームLustroを用いた酵母のハイスループット光遺伝学実験

Optogenetics offers precise control over cellular behavior by utilizing genetically encoded light-sensitive proteins. However, optimizing these systems to ...