この作品は、失明（RPB）を防止するためにNIHの助成金1R01EY022901、リサーチからキャリア開発賞によってサポートされていました、CMReeves＆MAリーブス財団、視覚障害者のためのE.マチルダチーグラー財団、テンプル騎士団アイ財団、学科への無制限の助成金RPBからのユタ大学の眼科。 私たちは、原稿議論やコメントのためのSpectralisマルチモダリティイメージングシステムとタオ張に関する技術支援をBalamurali Ambatiに感謝します。

1。楽器の準備<ol><li>手順は、動物施設で手術室で行われる。 </li><li>実験を開始する前に、フェイスマスク、ヘアボンネット、手術用ガウン、無菌フットカバー、手袋を着用してください。 </li><li>ホットプレート上でビーカーを〜40℃の熱水。 </li><li>撮影時のマウスの体温を維持するために後で使用します加熱パッドの上に無菌青パッドを配置。加熱パッドをオンにします。 </li><li>イメージングシステムを準備します。 <ol><li>ダストカバーを外して、レーザーをオンにします。 </li><li> 55°レンズを取り出し、マシンにマウントします。 </li><li>コンピュータと入力、新しい患者のシートの下にイメージングのためのマウスの情報（ 例えば 、遺伝子型、年齢など ）からイメージングソフトウェアを開きます。 「デバイスの種類」の下では、赤外線（IR）モードを選択します。 </li></ol></li></ol> 注：これは、報告されているoを使用我々は（ 図1-4、代表的な結果を参照）、外部のレンズを用いることなく、IV-ICGAことにより、高品質の画像を得ることに問題はないものの、外部の二重非球面レンズfの画質を向上させることができる17-20。 2。 ICGAの尾静脈注射<ol><li> 1％トロピカミド点眼液をマウスの眼を拡張し、5分待ちます。 </li><li>必要に応じて麻酔（ケタミン/キシラジン/アセプロマジン65-100/10-20/1-3 mg / kg）の量を決定するために、マウスを秤量する。 </li><li> 32 Gの針と一緒に、滅菌1 mLの注射器を取り出す。麻酔薬（13 mg / mlのケタミン、2.6 mg / mlのキシラジン、滅菌PBS中の0.3 mg / mlのアセプロマジン）を腹腔内にマウスを注入する。マウスが完全に麻酔されるまで待ちます（約5分）。 </li><li>静脈の血管拡張を引き起こすために40℃の温水中にマウスの尾を置きます。 </li><li> 32 Gの針を1ミリリットルの注射器を取り出す。 ICの所望の量を撤回G、1 mg / mlの25gのマウス（2 mg / kg）のために、無菌のチューブに0.2μMのシリンジフィルターで無菌濾過しICG、典型的に50μl。シリンジ内に空気を導入しないように注意してください。 </li><li>注入されるべき領域を殺菌するアルコール綿で尾を拭きます。 </li><li>外側尾静脈が上になるように、片手で尻尾を持ちます。針のベベルを上に向けて、最小限の角度で静脈に針〜2ミリメートルを注入する。静脈を穿孔しないように注意してください。少しシリンジに引くと針が正常に静脈に挿入されたことを示す針ハブ、への血流の痕跡を探します。 </li><li>ゆっくり静脈にICGを注入する。注入する際、最小の抵抗があるはずです。針を外して、任意の出血を止めるために〜5月10日秒間注入部位に直接アルコール綿を適用します。マウスは、撮影のための準備ができる。初期段階（注入後0-4分）をキャッチするためには、ESSEですすぐにイメージにマウスをntial。 </li></ol> 注：マウスの眼は、簡単に乾燥得ることができますし、麻酔下で白内障を開発することができます。これは、手術中の滅菌PBSを適用することにより、しっとり目を離さないことが重要です。 ICGA記録する前に、滅菌綿棒で過剰のPBSを拭き取る。他のラボは、角膜17から20の脱水を避けるために、コンタクトレンズを使用している。 3。 ICG血管造影<ol><li>網膜と脈絡膜の循環が最大輝度（0-4分）であるまで、イメージを脈絡膜の充填の初期段階の捕獲を許可するICG注入後30〜40秒を取るために開始します。網膜血管は、最良の焦点〜35〜45ジオプトリーで可視化され、脈絡膜血管系10〜15ジオプトリーで可視化される。 注意：動物モデルの最初の検査中に、それはすべての可能なABNOを識別するために、全ての角度（鼻、時間的、背側と腹側）から画像をキャプチャすることをお勧めします血管系におけるrmalities。初期段階で、中規模および大規模脈絡膜動脈と静脈の両方がよく可視化する。このプロトコルで使用される動物モデルにおいて、脈絡膜病変（ 例えば、polypoidalの拡張部分）は初期段階中に1分間現れ始めることができる。 </li><li>血管系の画像のフォーカスを設定します。明るさ制御と、それぞれ、制御モジュールおよびフォーカスノブを使用して焦点を合わせる。これらの値は、デジタル的に調整可能であり、容易に一定に保たれる。画像品質は、以下の技術を用いて再現可能であることを保証するためにカメラのレンズ定数にマウスの眼からの距離を保つ。 注：デバイスは、イメージ後部の目の部分を、我々は、フォーカス、明るさを維持しようとすると、カメラのレンズと我々の画像を異なる角度からの全体の後部の目のような一定のマウスの眼の間の距離ができるからである。このための鍵は、VIEの分野で目ICGにより放出された円形の発光を揃えることですカメラのW。これは、全体のイメージは、暗い領域を有しなくなるまで、左から右、上下、及びカメラ位置の調整·アンド·アウトすることによって達成される。発光とカメラの視野が並んでいる場合には、レンズの眼からの距離は、次の画像の集合だけでなく、品質の画像のための最適な距離でのための再現可能になります。 </li><li>脈管構造に焦点が合っていると、取得モジュールに丸い黒ボタンを押すことによって画像フレームをキャプチャする。黒い丸ボタンも最高の画像品質のためのICGの信号を低減または増強するために使用することができる。 </li><li>画像脈絡膜病変に対する最適な画角や焦点深度を決定します。それは、目の位置、焦点深度、全体の経時ICGA固定他のデバイスの設定を維持することが重要である。画像が取得モジュールのタッチスクリーンパネルの[取得]ボタンを押すと、保存されます。 </li><li> 6月15日分の後方で中間相での画像を取得ER注入。 注意：脈絡膜および網膜血管の両方があまり明確ななる。脈絡膜血管系は、拡散蛍光として表示されます。 hyperfluorescenceを示す脈絡膜病変は、通常のバックグラウンド蛍光を取り囲むフェージングとは対照的に現れる。 </li><li>注射後の17〜25分で後期相での画像を取得する。 注意：Hyperfluorescenceはフェード。脈絡膜および網膜血管の両方が表示されなくなり。視神経頭が黒くなります。 Hyperfluorescent脈絡膜病変は、フェージング背景に最大限のコントラストを持っています。 </li><li>画像の取得が終了した後、マウスの眼に明確な潤滑アイジェルを適用し、回復のための加熱パッド上でマウスを残す。 </li><li>ケージや保持領域にマウスを返します。さらに分析するために、TIFFやJPEGファイルとして書き出す画像。 </li></ol> 注：各フェーズのタイミングが絶対的なものではない。我々が発見したEAのタイミングCh相は、注入されたICGの量に応じて変更される可能性があります。より多くのICGは、各相を延長する傾向がある。位相を定義するための最良の方法は、上記の各フェーズの主な機能に応じてある。

<ol>
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YFは本研究で使用したAMDのマウスモデルに関連する2出願中の特許の発明者である。 SK、ZB、及びADJは、開示することは何もありません。

本研究では、HTRA1トランスジェニックマウスにおける画像脈絡膜病変ICGAの使用を実証した。私達のマウスモデルにおける初期、中期、及びICGAの後期相の特徴は、ヒトの研究1でよく時間経過と一致する。これは、AMDのような脈絡膜に関連する症状の病態生理学的メカニズムと治療戦略の研究に貴重であるヒト病理と動物の表現型の間のよりよい比較を行うことが重要です。 <p class="...

インドシアニングリーン血管造影（ICGA）は、目の血管に関連した画像の問題の診断テストです。発光スペクトルは835 nmの1にピークを有する発光770-880 nmの範囲でありながら、ICGの吸収スペクトルは790-805 nmの範囲である。これは、そのスペクトルが可視範囲内にある他の一般的な染料、フルオレセインナトリウム、異なる。赤外スペクトルは簡単に​​ナトリウム - フルオレセインベースのフルオレセイン血管造影（FA）で可視化をブロックすることができますすべてが網膜色素上皮（RPE）、漿液血液状流体、および脂質滲出液、貫通するICGを可能にします。 ICGは脈絡膜血管や脈絡膜病変の1,2の強化された画像化を可能にする98％のタンパク質結合少なく溢出、その結果、血管系である。 ICGAはほとんどRPEに後方で脈絡膜血管系を可視化するための唯一の選択肢となります。 図1は、マウスの眼の撮像血管系におけるICGAとFAの比較を示す。 FAはできるBイメージに網膜血管系井戸ではなく、脈絡膜血管系を使用した電子。対照的に、ICGAは、網膜および脈絡膜血管系の両方の画像に使用することができる。 ICGAを一緒に我々はこの研究で使用する赤外線感受性ビデオカメラ、高解像度のデジタル画像化システムまたは走査レーザー検眼鏡（SLO）を用いて行われる。 診療所では、ICGAはPolypoidal脈絡膜血管障害（PCV）、網膜血管腫増殖（RAP）、網膜色素線条、卵黄様黄斑ジストロフィー、中心性漿液性網脈絡膜、脈絡膜血管腫、出血、網膜などの脈絡膜血管系が関与する網脈絡膜疾患の数を診断する際に推奨されている細動脈macroaneurysms、脈絡膜腫瘍、および後部ブドウ膜炎1,3の特定の形態。 FAと光コヒーレンストモグラフィー（OCT）とICGAの組み合わせは、滲出性加齢黄斑の診断および管理における臨床医のための強力なツールを提供変性（AMD）4月10日 。 ICGAは脈絡膜を含む状態を診断するために特に有用である。実際、ICGAはPCV、滲出性AMD 11月13日のバリアントを診断するためのゴールドスタンダードと考えられている。 PCVは、脈絡膜血管系11-13に、端末polypoidal拡張部分で血管の分岐ネットワークによって特徴づけられる。 PCVが頻繁に漏れやpolypoidalコンポーネント11,14,15からの出血とRPEと網膜の再発漿液血液状分遣と関連している。我々は最近、トランスジェニックマウスの網膜色素上皮（RPE）16で、ヒトHTRA1、多官能性セリンプロテアーゼを発現することによって第PCV動物モデルの作製を報告した。我々は、増加HTRA1は、PCVの特徴、 例えば polypoidal病変を誘発することが示された。 ここでは、私たちのHTRA1のマウスモデルを用いて、AMD研究の尾静脈注射による経時ICGAの使用を実証した。我々のデータは示唆しているIV-ICGAは現在、脈絡膜病変を特徴づけるためのフィールド17,18に使用されるIP（又は皮下（SC））ICGAよりも優れている。 動物研究に関する声明動物実験は、施設内動物管理使用委員会（IACUC）によって承認されたプロトコールに従って実施され、眼科と視覚研究における動物の使用に関するARVO声明に従って行った。

<table><tbody><tr><td>Spectralis Multi-Modality Imaging System</td><td>Heidelberg Engineering, Germany</td><td>SPECTRALIS HRA+OCT</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide ophthalmic solution (1%)</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>NDC 24208-585-64</td><td>for dilation of pupils</td></tr><tr><td>GenTeal Gel</td><td>Genteal</td><td>NDC 58768-791-15</td><td>&amp;nbsp;clear lubricant eye gel&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Vedco Inc</td><td>NDC 50989-996-06</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>NADA 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine</td><td>Vedco Inc</td><td>NDC 50989-160-11</td><td></td></tr><tr><td>32-G Needle</td><td>Steriject</td><td>PRE-32013</td><td></td></tr><tr><td>1-ml syringe</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Indocyanine Green</td><td>Pfaltz &amp;amp; Bauer</td><td>I01250</td><td></td></tr></tbody></table>

detecting abnormalities in choroidal vasculature in a mouse model of age-related macular degeneration by time-course indocyanine green angiography

インドシアニングリーン血管造影（またはICGA）は脈絡膜や、加齢性黄斑変性症（AMD）のような種々の眼疾患の網膜血管系の異常を診断するために眼科医によって実行される手法である。 ICGAは赤外線スペクトルで着色層を貫通するその能力に起因する眼の後脈絡膜血管系の画像に特に便利です。 ICGAの時間経過は、初期、中期、後期の段階に分けることができます。 3相目の問題の病態に関する貴重な情報を提供しています。静脈内（IV）による経時ICGAが注射が広く脈絡問題の診断および管理のために臨床で使用されているが、腹腔内注射によりICGA（IP）は、一般に、動物研究において使用される。ここでは、尾静脈注射し、共焦点走査型レーザー検眼鏡検査によってマウスにおいて高解像度ICGAの経時的画像を得るための技術を実証した。私たちは、脈絡膜ルイメージにこのテクニックを使用加齢性黄斑変性症のマウスモデルにおける排出。それはIPによるマウス脈管構造へのICGを導入することがはるかに簡単であるが、我々のデータは、それがIP-ICGAによって再現可能なICGA経時画像を得ることが困難であることを示している。対照的に、尾静脈注射を介してICGAはヒトでの研究に匹敵する高品質ICGA経時画像を提供する。加えて、我々はICGAは着色されたマウスで行っ比べ脈絡膜血管の鮮明画像を提供しますアルビノマウスで行っていることを示した。私たちは、時間経過IV-ICGAは、動物モデルに基づいてAMDの研究における標準的になってなければならないことを示唆している。

私たちは、CD1の背景が、どちらも、HTRA1トランスジェニックマウスと対照WT同腹仔でICGAタイムコースを実施した。アルビノのCD1背景がインドシアニングリーン血管造影（ICGA）イメージング（説明を参照）を容易にするように選択した。拡張部分のようないくつかの動脈瘤がHTRA1マウスにおける初期段階で表示されるようになった（ 図2、赤い矢印は、容器の先端に拡張を示し、赤?...

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Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

尾静脈注射によって行われるインドシアニングリーン血管造影（またはICGA）は、マウス脈絡膜の異常を特徴付けるために、高品質のICGA経時画像を提供する。

経時インドシアニングリーン血管造影による加齢黄斑変性症のマウスモデルにおける脈絡膜血管系の異常を検出する

Indocyanine Green&#160;Angiography (or ICGA) is a technique performed by ophthalmologists to diagnose abnormalities of the choroidal and retinal ...

detecting-abnormalities-choroidal-vasculature-mouse-model-age-related

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K ビュー.  University of Utah Health Sciences Center. 尾静脈注射によって行われるインドシアニングリーン血管造影（またはICGA）は、マウス脈絡膜の異常を特徴付けるために、高品質のICGA経時画像を提供する。 

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In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with distinct functions and gene expression profiles. The roles of microglial activation in health, injury and disease remain incompletely understood due to their dynamic and complex regulation in response to changes in their microenvironment. Thus, it is critical to non-invasively monitor and analyze changes in microglial activation over time in the intact organism. In vivo studies of microglial activation have been delayed by technical limitations to tracking microglial behavior without altering the CNS environment. This has been particularly challenging during chronic neurodegeneration, where long-term changes must be tracked. The retina, a CNS organ amenable to non-invasive live imaging, offers a powerful system to visualize and characterize the dynamics of microglia activation during chronic disorders.
This protocol outlines methods for long-term, in vivo imaging of retinal microglia, using confocal ophthalmoscopy (cSLO) and CX3CR1GFP/+ reporter mice, to visualize microglia with cellular resolution. Also, we describe methods to quantify monthly changes in cell activation and density in large cell subsets (200-300 cells per retina). We confirm the use of somal area as a useful metric for live tracking of microglial activation in the retina by applying automated threshold-based morphometric analysis of in vivo images. We use these live image acquisition and analyses strategies to monitor the dynamic changes in microglial activation and microgliosis during early stages of retinal neurodegeneration in a mouse model of chronic glaucoma. This approach should be useful to investigate the contributions of microglia to neuronal and axonal decline in chronic CNS disorders that affect the retina and optic nerve.

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia activation and microgliosis are key responses to chronic neurodegeneration. Here, we present methods for in vivo, long-term visualization of retinal CX3CR1-GFP+ microglial cells by confocal ophthalmoscopy, and for threshold and morphometric analyses to identify and quantify their activation. We monitor microglial changes during early stages of age-related glaucoma.

共焦点検眼鏡イメージングとマウス緑内障における細胞の形態計測：神経変性中に網膜ミクログリアの活性化のインビボダイナミクス

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with ...

医学

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this protocol, we aim to guide the reader not simply through the technical considerations of generating laser-induced lesions to trigger neovascular processes, but rather focus on the powerful information that can be obtained from multimodal longitudinal in vivo imaging throughout the follow-up period.
The laser-induced mouse CNV model was generated by a diode laser administration. Multimodal in vivo imaging techniques were used to monitor CNV induction, progression and regression. First, spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) was performed immediately after the lasering to verify a break of Bruch&#39;s membrane. Subsequent in vivo imaging using fluorescein angiography (FA) confirmed successful damage of Bruch&#39;s membrane from serial images acquired at the choroidal level. Longitudinal follow-up of CNV proliferation and regression on days 5, 10, and 14 after the lasering was performed using both SD-OCT and FA. Simple and reliable grading of leaky CNV leasions from FA images is&#160;presented. Automated segmentation for measurement of total retinal thickness, combined with manual caliber application for measurement of retinal thickness at CNV sites, allow unbiased evaluation of the presence of edema. Finally, histological verification of CNV is performed using isolectin GS-IB4 staining on choroidal flatmounts. The staining is thresholded, and the isolectin-positive area is calculated with ImageJ.
This protocol is especially useful in therapeutics studies requiring high-throughput-like screening of CNV pathology as it allows fast, multimodal, and reliable classification of CNV pathology and retinal edema. In addition, high resolution SD-OCT enables the recording of other pathological hallmarks, such as the accumulation of subretinal or intraretinal fluid. However, this method does not provide a possibility to automate CNV volume analysis from SD-OCT images, which has to be performed manually.

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Here, we present the usefulness of longitudinal in vivo imaging in the follow-up of morphological changes of laser-induced choroidal neovascularization in mice.

生体内でマルチ モーダル イメージングとマウス レーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

神経科学

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the present protocol, mice expressing green fluorescent protein (gfp) under the promoter of Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) were used to image microglia cells in vivo in the retina. Microglia are resident macrophages of the retina and have been implicated in several retinal diseases1,2,3,4,5,6. This protocol provides a detailed approach for generation of retinal B-scans, with SD-OCT, and imaging of microglia cell distribution in Cx3cr1gfp/gfp mice with SLO in vivo, using an ophthalmic imaging platform system. The protocol can be used in several reporter mouse lines. However, there are some limitations to the protocol presented here. First, both SLO and SD-OCT, when used in the high-resolution mode, collect data with high axial resolution but the lateral resolution is lower (3.5 &#181;m and 6 &#181;m, respectively). Moreover, the focus and saturation level in SLO is highly dependent on parameter selection and correct alignment of the eye. Additionally, using devices designed for human patients in mice is challenging due to the higher total optical power of the mouse eye compared to the human eye; this can lead to lateral magnification inaccuracies7, which are also dependent on the magnification by the mouse lens among others. However, despite that the axial scan position is dependent upon lateral magnification, the axial SD-OCT measurements are accurate8.

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

This protocol describes how high-resolution imaging techniques such as spectral domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy can be utilized in small rodents, using an ophthalmic imaging platform system, to obtain information on retinal thickness and microglial cell distribution, respectively.

生体内でスペクトル領域光干渉断層法と走査レーザー眼底Cx3cr1gfp/gfpレポーター マウスの画像

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To properly leverage this greater translatability, there is a need to devise reproducible methods of drawing quantitative data from these images. Optical coherence tomography (OCT) imaging can resolve retinal histology at micrometer resolution and reveal functional differences in vascular blood flow. Here, we delineate noninvasive vascular readouts that we use to characterize pathological damage post vascular insult in an optimized mouse model of retinal vein occlusion (RVO). These readouts include live imaging analysis of retinal morphology, disorganization of retinal inner layers (DRIL) measure of capillary ischemia, and fluorescein angiography measures of retinal edema and vascular density. These techniques correspond directly to those used to examine patients with retinal disease in the clinic. Standardizing these methods enables direct and reproducible comparison of animal models with clinical phenotypes of ophthalmic disease, increasing the translational power of vascular injury models.

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Here, we present three data analysis protocols for fluorescein angiography (FA) and optical coherence tomography (OCT) images in the study of Retinal Vein Occlusion (RVO).

生体内 再現性を促進するためのマウス網膜における血管損傷の読み出し

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images from which the retinal thickness can be calculated. Although OCT is widely used in clinical practice, its application in basic research is not as prevalent, especially in small animals such as mice. Because of the small size of their eyeballs, it is challenging to conduct fundus imaging examinations in mice. Therefore, a specialized retinal imaging system is required to accommodate OCT imaging on small animals. This article demonstrates a small-animal-specific system for OCT examination procedures and a detailed method for image analysis. The results of retinal OCT examination of very-low-density lipoprotein receptor (Vldlr) knockout mice and C57BL/6J mice are presented. The OCT images of C57BL/6J mice showed retinal layers, while those of Vldlr knockout mice showed subretinal neovascularization and retinal thinning. In summary, OCT examination could facilitate the noninvasive detection and measurement of retinopathy in mouse models.

Here, we describe an in vivo imaging technique using optical coherence tomography to facilitate the diagnosis and quantitative measurement of retinopathy in mice.

光干渉断層撮影法の網膜症モデルマウスへの応用

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...

Image-Guided Optical Coherence Tomography to Assess Structural Changes in Rodent Retinas

Ocular diseases, such as age-related macular degeneration, glaucoma, retinitis pigmentosa, and uveitis, are always accompanied by retinal structural changes. These diseases affecting the fundus always exhibit typical abnormalities in certain cell types in the retina, including photoreceptor cells, retinal ganglion cells, cells in the retinal blood vessels, and cells in the choroidal vascular cells. Noninvasive, highly efficient, and adaptable imaging techniques are required for both clinical practice and basic research. Image-guided optical coherence tomography (OCT) satisfies these requirements because it combines fundus photography and high-resolution OCT, providing an accurate diagnosis of tiny lesions as well as important changes in the retinal architecture. This study details the procedures of data collection and data analysis for image-guided OCT and demonstrates its application in rodent models of choroidal neovascularization (CNV), optic nerve crush (ONC), light-induced retinal degeneration, and experimental autoimmune uveitis (EAU). This technique helps researchers in the eye field to identify rodent retinal structural changes conveniently, reliably, and tractably.

The protocol presented here details the procedures of data collection and data analysis for image-guided optical coherence tomography (OCT) and demonstrates its application in multiple rodent models of ocular diseases.

Ocular diseases, such as age-related macular degeneration, glaucoma, retinitis pigmentosa, and uveitis, are always accompanied by retinal structural ...

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. Mutations in the microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene show hypopigmentation, microphthalmia, retinal degeneration, and in some cases, blindness. In vivo imaging of the mouse retina by noninvasive means is vital for eye research. However, given its small size, mouse fundus imaging is difficult and might require specialized tools, maintenance, and training. In this study, we have developed a unique software enabling analysis of the retinal vessel diameter in mice with an automated program written in MATLAB. Fundus photographs were obtained with a commercial fundus camera system following an intraperitoneal injection of a fluorescein salt solution. Images were altered to enhance contrast, and the MATLAB program permitted extracting the mean vascular diameter automatically at a predefined distance from the optic disk. The vascular changes were examined in wild-type mice and mice with various mutations in the Mitf gene by analyzing the retinal vessel diameter. The custom-written MATLAB program developed here is practical, easy to use, and allows researchers to analyze the mean diameter and mean total diameter, as well as the number of vessels from the mouse retinal vasculature, conveniently and reliably.

Mouse retinal vasculature is particularly interesting in understanding the mechanisms of vascular pattern formation. This protocol automatically measures the diameter of mouse retinal vessels from fluorescent angiography fundus images at a fixed distance from the optic disk.

マウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径の測定

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

マウスにおけるレーザー誘起CNVのさまざまな病変タイプの特性評価

Characterization of Vascular Morphology of Neovascular Age-Related Macular Degeneration by Indocyanine Green Angiography

Age-related macular degeneration (AMD) is a leading cause of blindness among older individuals, and its prevalence is rapidly increasing due to the aging population. Choroidal neovascularization (CNV) or wet AMD, which accounts for 10%-20% of all AMD cases, is responsible for an alarming 80%-90% of AMD-related blindness. Current anti-VEGF therapies show suboptimal responses in approximately 50% of patients. Resistance to anti-VEGF treatment in CNV patients is often associated with arteriolar CNV, while responders tend to have capillary CNV. While fluorescein angiography (FA) is commonly used to assess leakage patterns in wet AMD patients and animal models, it does not provide information about CNV vascular morphology (arteriolar CNV vs. capillary CNV). This protocol introduces the use of indocyanine green angiography (ICGA) to characterize lesion types in laser-induced CNV mouse models. This method is crucial for investigating the mechanisms and treatment strategies for anti-VEGF resistance in wet AMD. It is recommended to incorporate ICGA alongside FA for comprehensive assessment of both leakage and vascular features of CNV in mechanistic and therapeutic studies.

著者スポットライト:脈絡膜新生血管における高度な血管形態評価による抗VEGF耐性の克服

Currently, fluorescein angiography (FA) is the preferred method for identifying leakage patterns in animal models of choroidal neovascularization (CNV). However, FA does not provide information about vascular morphology. This protocol outlines the use of indocyanine green angiography (ICGA) to characterize different lesion types of laser-induced CNV in mouse models.

インドシアニングリーン血管造影による新生血管加齢黄斑変性症の血管形態の特性評価

Age-related macular degeneration (AMD) is a leading cause of blindness among older individuals, and its prevalence is rapidly increasing due to the aging ...

経時インドシアニングリーン血管造影による加齢黄斑変性症のマウスモデルにおける脈絡膜血管系の異常を検出する

要約

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共焦点検眼鏡イメージングとマウス緑内障における細胞の形態計測：神経変性中に網膜ミクログリアの活性化のインビボダイナミクス

レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

生体内でマルチモーダルイメージングとマウスレーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

生体内でスペクトル領域光干渉断層法と走査レーザー眼底Cx3cr1^gfp/gfpレポーターマウスの画像

生体内再現性を促進するためのマウス網膜における血管損傷の読み出し

光干渉断層撮影法の網膜症モデルマウスへの応用

Image-Guided Optical Coherence Tomography to Assess Structural Changes in Rodent Retinas

マウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径の測定

インドシアニングリーン血管造影による新生血管加齢黄斑変性症の血管形態の特性評価

インドシアニングリーン血管造影による新生血管加齢黄斑変性症の血管形態の特性評価

経時インドシアニングリーン血管造影による加齢黄斑変性症のマウスモデルにおける脈絡膜血管系の異常を検出する

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レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

生体内でマルチ モーダル イメージングとマウス レーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

生体内でスペクトル領域光干渉断層法と走査レーザー眼底Cx3cr1gfp/gfpレポーター マウスの画像

生体内 再現性を促進するためのマウス網膜における血管損傷の読み出し

光干渉断層撮影法の網膜症モデルマウスへの応用

Image-Guided Optical Coherence Tomography to Assess Structural Changes in Rodent Retinas

マウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径の測定

インドシアニングリーン血管造影による新生血管加齢黄斑変性症の血管形態の特性評価

インドシアニングリーン血管造影による新生血管加齢黄斑変性症の血管形態の特性評価

生体内でマルチモーダルイメージングとマウスレーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

生体内でスペクトル領域光干渉断層法と走査レーザー眼底Cx3cr1^gfp/gfpレポーターマウスの画像

生体内再現性を促進するためのマウス網膜における血管損傷の読み出し