マウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径の測定

このプロトコルは、遺伝子変異または網膜疾患による麻酔マウスの網膜血管の直径を自動的に測定するための簡単で信頼性の高い方法を提供します。この手法の主な利点は、ここでカスタム作成されたMATLABプログラムが実用的で、使いやすく、便利で信頼性が高いことです。網膜血管の直径の変化は、RPやその他の網膜血管の状態などの変性疾患で一般的に発生します。

マウスモデルは、治療効果と網膜血管への影響に関する洞察を提供します。この方法は、眼の血管障害の進行に続く定量化可能な臨床マーカーとして、また潜在的な治療法のモニタリングに潜在的に有用である可能性があります。まず、フルオレセイン作業溶液を含む注射器を調製し、麻酔をかけた動物に腹腔内に投与し、角膜表面に2%メチルセルロースゲルを一滴塗布します。

次に、動物をイメージングシステムの位置決めステージに置きます。網膜イメージング眼底カメラのレンズをマウスの角膜に直接優しく触れるように配置し、視神経乳頭が視野の中央に配置されるように位置合わせを少し調整します。次に、眼底カメラの緑色の蛍光チャネルに切り替え、網膜血管に焦点を合わせて画像を撮影します。

フルオレセイン注入後の所望の時点で画像を撮影し、理想的な時点を決定し、フルオレセイン眼底画像を可視化します。まず、MATLABプログラムを開きます。次に、眼底直径をダウンロードして保存します。

FFA 画像を画像分析フォルダーにドラッグ アンド ドロップします。MATLAB プログラムで、コード ファイルを 2 回クリックしてアクティブにします。[実行] オプションを選択します。

画像を選択するポップアップメニューが表示されます。画像を選択すると、分析パラメータのポップアップメニューが画面に表示されます。ポップアップメニューで解析パラメータを設定し、OKを押します。光ディスクの中心を選択し、次に光ディスクの端を選択します。

解析はバックグラウンドで行われ、解析結果が画面に表示されます。この表には、各容器の平均値、標準偏差、および標準誤差の値が含まれています。テーブルを保存します。

次に、平均厚さを設定した図を保存します。保存したファイルのある解析フォルダを開き、保存した図を開きます。保存したテーブルを開き、値をコピーして Excel ファイルに貼り付けます。

フルオレセイン注入後、コントロールマウスとMITFMI-VGA9/変異マウスの画像を取得し、視神経乳頭の中心から血管の終点までの距離を時計回りに最短距離を測定しました。平均血管径は、野生型マウスおよび変異型マウスの血管数の関数として求められました。覚えておくべき最も重要なことは、眼底カメラの位置と眼底画像内の視神経乳頭の中央揃えです。

この技術に加えて、新薬を探索し、眼のさまざまな血管状態を診断し、網膜血管系の機能をよりよく理解するために、分子技術を実行することができます。