この作品は、R01 GM088156およびT32 HL007713-18でサポートされていました。私たちは、立ち直り反射装置を組み立てる際の彼らの助けのためにペンシルベニア研究計装ショップ大学ビル·ペニーとマイケルカーマンに感謝したいと思います。

本明細書に概説動物に関わるすべての手順は、ペンシルベニア州の機関動物実験委員会の大学によって承認されている。 1。試験装置の概要<ol><li>試験装置24は、透明なアクリル製円筒チャンバ長さ10cmおよび直径5cm（合計200ml容量）から構成されている。このサイズは、一般的な25グラムの成体マウスに適しています。チャンバは、ガス入口及び出口のための各端部にポートを有する。動物がチャンバ内に容易に装填することができるように出口端部は、取り外し可能である。ゴム製のOリングガスケットは、円筒状チャンバの取り外し可能な端部をシールするために使用されている間、ガスポート開口部を慎重に、テフロンテープで封止されている。 </li><li>各チャンバは、水浴の内部に着座ラックに取り付けられている。 （ガス入口以下）チャンバの下部のみが浸漬されるように、ラックが嵌合されている。安定性のために、チャンバーのバックエンドは、支持体上に載るように全体CHAMBERは、水平方向に位置しています。これはバス付きのチャンバ全体のさえ接触を保証する。 </li><li>ポリエチレン管は、麻酔剤気化器に酸素タンクを接続し、次いで、10 L /分の流量計を通過する。チューブは等しい流れがチャンバ24の各々に、エージェント·アナライザに配信されていることを確認する等しい長さの25小径抵抗に分かれる。 </li><li>真空ラインは、ガス入口の反対側の端部に各チャンバを出る。これは呼気の二酸化炭素の再呼吸を排除一方向の流れを促進する。真空ラインは、社​​内吸引ラインに接続するためのマニホールドに結合します。主真空ラインに沿ってポップアップ遮断弁は、各チャンバ内の気圧条件を確実にする。 </li><li>浴は、完全に各チャンバの底部に接触するように十分な水で満たされている。水は、ポンプ37により一定°Cの浴に通って循環され、維持される。 </li></ol> 2。露光前のシステムをチェックしてください<ol><li> C言語一体これは水浴の温度が浴を通して37 度Cである。 </li><li> 5 L /分（チャンバ+エージェント·アナライザあたり200 ml /分）の速度で酸素を流す。リークを示すもので、どちらも、水の下に各チャンバ水没し、気泡や室内への水の浸入を探します。実験を開始する前に、任意の漏れをシールする。 </li><li>各室には、フローは25ガスラインのそれぞれを渡ってバランスをとられていることを確認するために、チャンバの後の行に500ミリリットル/分の流量計を接続します。これは、各チャンバが200ml /分の流れを受け取るように入力5 L /分の流れが均等に分散されることを確実にする。予想される流れを受けていない任意のチャンバーは、その流入および流出管は障害物がないかチェックしている必要があります。 </li><li> 100％酸素が流れているときに0.00％のイソフルランの読み取りを保証するために、エージェント·アナライザを較正する。 </li></ol> 3。インプラント温度トランスポンダー<ol><li>馴化の前に一週間、2％イソフルランで各マウスを麻酔。 </li><li>ベタジンと背側首エリアを殺菌。 </li><li>滅菌されたパッケージ化された注射器の針を用いて肩甲骨の間の温度トランスポンダ皮下に注射する。 </li><li>感染およびトランスポンダの移行のための毎日の注射部位を監視します。 </li></ol> 4。試験室に動物を慣らす<ol><li>四日間最初の評価の前に、100％の酸素を流しながら2時間、個々の室にすべてのマウスを置く。 </li><li>により新しい環境にストレスの交絡の影響を避けるために、事前評価に4日間毎日、手順4.1。 </li></ol> 5。あなたは麻酔感度に対する効果についてテストする薬理学的介入を行う<ol><li>この介入は、脳24、静脈内または腹腔内注射25、またはカニューレ26を介して特定の脳領域への薬物の送達の特定の部分に定位注入することがあります。 </li><li>これらの手順自体は、ナイーブ動物に比べて麻酔感度を変更する場合がありますので、適切な対照群は、ビヒクル注射と同様の手順を経る必要があります。 </li><li>あなたは、以下の手順6に示すように増加させること、および/または麻酔薬感受性の決定を減少段階的に行うことを計画している場合は薬理学的介入は、アクションの適切長い持続時間を持っていることを確認し、そうでない場合は、手順7に進みます。 </li></ol> 6。段階的なEC 50誘導の判定と創発を使用して麻酔感度を評価<ol><li> 100％の酸素が流れると、個々の室にそれぞれの動物を配置します。 </li><li> 15分間0.4％*にイソフルラン濃度を設定します。マウスは、その背中に配置されるまで、この期間の最後の2分の間に、そっとチャンバーを圧延することにより、各動物の正向反射を評価する。正向反射、マウスは、すべてを復元することがある場合に限り、無傷であると考えられている2分以内室の床に、その足の。 <ol><li> * 0.4％イソフルランをC57BL/6Jマウスにおけるsubhypnotic用量であることに注意してください。任意のマウスは、最初のステップで、その立ち直り反射を紛失した場合、初期投与量が大きすぎ、後続の日に減少させなければならない。 </li></ol></li><li>各マウスについて正向反射の状態を記録し、温度データのために、各マウスをスキャンします。テンプレートレコードを表1に示す。 </li><li> 15分間〜0.05％でイソフルラン濃度を増加させ、ステップ7.2を繰り返します。すべての動物が彼らの立ち直り反射を失ったまで、これを実行し続ける。 </li><li>オプション：すべての動物は彼らの立ち直り反射を取り戻しれるまで（ステップ6.3参照）を段階的にイソフルラン投与量を減少させるための同じ手順を繰り返します。 </li><li> 、実験を終了し、イソフルランをオフにして、15分間100％酸素で、システム全体をフラッシュする。マウスは彼らのホームケージに戻す前に回復し、experimeを保護しますので、これは低酸素症を防ぐことができますいずれの麻酔薬の曝露からNTER。 </li><li>オプション：動物や麻酔薬の濃度の数の数が原因で、リソースや時間の制約に制限されている場合には、カーブフィットパラメータ推定値、特にはヒル勾配-は過小評価、不当に低い誤差推定している。このような場合には、十分に真のヒル勾配のパラメータとそれに対応する誤差推定を得るために最大2つの追加の実験日に6.1から6.6に記載の手順麻酔感度測定を繰り返す必要があり得る。 </li></ol> 7。出現に時間とともに麻酔感度の短期変化を評価<ol><li> 100％の酸素が流れると、個々の室にそれぞれの動物を配置します。 </li><li>野生型C57BL/6Jマウス20用の誘導のED 99に対応して1.2％のイソフルラン濃度を設定します。急性介入の作用の予想される期間に応じて、30〜60分間維持する。 </li><li> LORRを確認で静かにマウスまで、各チャンバーを圧延することにより、全ての動物を背中に配置されます。 </li><li>イソフルランをオフにして、100％酸素を流す。各動物がその立ち直り反射を取り戻すまでの時間を測定します。これは、チャンバの床にすべての4つの足の配置によって定義され、無傷の立ち直り反射を有する3つの連続した​​試験の存在によって確認される。 </li></ol>

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著者らは、開示することは何もありません。

シングルマウスLORRの評価は、一見単純な作業ですが、それは動物の群から信頼性の高いデータを収集するために、対象者との間で同一の生理学的条件を維持するためにもかかわらず、必要不可欠である。ここで紹介する厳密に調整、大容量のLORR装置は、実験を標準化し、効率を最大化する方法を提供しています。体温調節と同等の流量分布の基本的な教義に従うことによって、このシステ?...

全身麻酔薬は、薬のような多様なクラスがすべて単数形エンドポイントが分かりにくいままで誘発することができる方法についての種の多種多様な、まだ説明で催眠の可逆的な状態を引き起こす能力によって定義されています。理論の数は、催眠、1,2の基礎としての一般的なメンブレンの混乱を示唆した麻酔薬の効力および脂溶性の間マイヤー·オーバートン相関、で始まる、年間で断定されています。より最近の証拠は、神経細胞のシグナル伝達に影響を与えるタンパク質標的は麻酔効果に寄与することを示唆している。マウスが原因マウスおよびヒトの麻酔応答間の相同性のこれらの理論を探索するのに不可欠なモデルであることが証明されている。マウスは全身麻酔下で主観的な意識について質問することができませんが、ある種の原始反射はげっ歯類の催眠の有用な代理尺度として役立つ。出産後の最初の数日で、マウスは反射的復原RESPを開発受動的に仰臥位3に配置されるのを防ぎますオンセ。マウスは、その立ち直り反射を失うれる麻酔の投与量は、人間の催眠用量4とよく相関する。 正向反射（LORR）の損失の評価は、マウスにおける麻酔薬の感度をテストするだけでなく、ラット、モルモット、ウサギ、フェレット、ヒツジ、犬5-8を含む他の種の様々な広く使用されている実験室の標準となっている。 LORRの種のメンバーのために行うために、所与の麻酔剤の用量は非常に一貫しているが、それは環境因子によって有意にシフトさせることができる。例えば、睡眠不足のラットは、高い有酸素容量の揮発性および静脈麻酔薬9およびラットの両方に対してより敏感であるイソフルラン10にあまり敏感である。低体温はまた、11〜14種の大スペクトルにおいて催眠ために必要な多数の麻酔薬の投与量を減少させることが示されている。順番に確実にLORR実験動物の群において発生する麻酔薬の投与量を同定するために、評価環境は注意深く、応力を最小限euthermiaを維持し、全ての被験者への薬剤の等量を送達するように制御することが重要である。驚くことではないが、遺伝的因子もまた麻酔15-18感度を変えることが知られている。そのため、慎重に検討し、また遺伝的背景19をコントロールに与えられるべきである。 我々は一定の37°Cの環境を維持しながら、24匹のマウスのそれぞれに同一の気体の麻酔薬の配信を保証する装置を開発した。エクスポージャー室の透明の円筒形デザインは、高速LORR評価と遠隔測定生理学的測定を容易に統合することができます。このシステムは、正確に、野生型マウス20で出現にイソフルラン、ハロタン、セボフルラン及び誘導EC 50および時間を測定することが示されている。また、使用している遺伝的変異を持つマウスでは麻酔薬の感度の変化を観察し、21〜23視床下部の病変を対象とするこのシステム。ここでは、麻酔薬の感度が私達の制御された環境装置を用いて、薬理学的介入の後に評価することができる2つの方法について説明します。揮発性麻酔導入及び出現感度の定常状態の表現型は、8〜10時間を必要とし、結果的に最高の​​慢性または長時間作用薬理学的介入のような実験条件が変化しないような研究のために調整されています。しかし、その効果が時間の経過とともに大幅に放散する短時間作用型の治療のために我々はまた、定位的に標的とするマイクロインジェクションまたは大幅に麻酔薬の出現に影響を​​静脈内薬物処置後立ち直り反射の変化を評価するための簡単​​な手順を紹介します。これらの試験は、首題の任意の数に適合させることができるこの制御された環境システムのための潜在的な用途の小さなサブセットを表す様々な種のクトは、吸入治療のいずれかのタイプを受信する。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="461">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of the Reagent</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:115px;">Oxygen</td>
			<td style="width:88px;">Airgas</td>
			<td style="width:88px;">OX300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:88px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:171px;">Any volatile anesthetic of interest may be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of Material</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 10 SLPM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2309</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 500 SCCM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2305</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:115px;">Anesthetic agent analyzer/gas indicator</td>
			<td style="width:88px;">AM Bickford</td>
			<td style="width:88px;">FI-21 Riken</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Heating water pump</td>
			<td style="width:88px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">13-874-175</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Temperature transponders</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">IPTT-300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">RF temperature reader</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">DAS-6007</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing changes in volatile general anesthetic sensitivity of mice after local or systemic pharmacological intervention

全身麻酔の一つの望ましいエンドポイントはまた、催眠として知られ、無意識の状態です。動物で催眠状態を定義すると、それは人間の患者には投与しないほど簡単です。げっ歯類での催眠のための広く使用されている行動の代用には反射（ロア）、あるいは動物がもはや背側横臥位の脆弱性を回避するために、自分の生来の本能に応答する点を立ち直りの損失である。我々は慎重に、温度変動を含むとガスの流れを変える可能性のある交絡のために制御しながら、同時に24匹のマウスでLORRを評価するシステムを開発した。これらのチャンバは、固定麻酔曝露後の立ち直り反射（RORR）を返すために、待ち時間によって測定された麻酔薬感受性の信頼性の評価を可能にする。代替的に、麻酔薬濃度を段階的に増加する（または減少）を用いて、チャンバはまた、誘導（又は発生）に集団の感受性の決定を可能にすることによって測定されるようEC 50およびヒル勾配。最後に、ここで説明する制御された環境チャンバーは他の薬物、毒物学研究、及びバイタルサインの同時リアルタイムモニタリングの吸入送達を含む代替的な用途、様々に適合させることができる。

図1に、薬理学的介入の長期的影響を決定するための段階的なLORRアッセイの有用性を実証している。イボテン酸（IBA）は、多くの場合、永久的な神経損傷を引き起こす興奮毒として使用されるグルタミン酸N-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）受容体のアゴニストである。ここでは、試験前に両側性C57BL/6Jマウスの腹外側視索前野（VLPO）1週に1％のIBAの10 ​​NLを注入された。この核?...

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Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

立ち直り反射の消失は、長い実験動物でも催眠呼ばれる、意識不明のための標準的な行動の代理を務めています。薬理学的介入によって引き起こされる揮発性麻酔薬感受性における変化は、任意の吸入治療剤の送達のために適合させることができる注意深く制御されたハイスループット評価システムを用いて検出することができる。

局所または全身薬理学的介入後のマウスの揮発性全身麻酔の感度変化を評価する

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

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Unit 1

Local Anesthetics

Drugs for Pain Management: Opioid Analgesics and General Anesthetics

SCIENTISTS IN ACTION

13.5K ビュー.  Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania. 立ち直り反射の消失は、長い実験動物でも催眠呼ばれる、意識不明のための標準的な行動の代理を務めています。薬理学的介入によって引き起こされる揮発性麻酔薬感受性における変化は、任意の吸入治療剤の送達のために適合させることができる注意深く制御されたハイスループット評価システムを用いて検出することができる。 

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Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

胎児性アルコール暴露のゼブラフィッシュモデルの催奇形性変化を評価する

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

医学

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. However, due to the small size of the mouse, technical details of the intraoperative monitoring procedure suitable for the mouse were rarely described. Previously we have reported a monitoring procedure to obtain hemodynamic parameters for rats. Now, we adapted the procedure to acquire systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice, a species ten-fold smaller than rats. This film demonstrates the instrumentation of the animals as well as the data acquisition process needed to assess systemic and hepatic hemodynamics in mice. Vital parameters, including body temperature, respiratory&#160;rate&#160;and heart&#160;rate were recorded throughout the whole procedure. Systemic hemodynamic parameters consist of carotid artery pressure (CAP) and central venous pressure (CVP). Hepatic perfusion parameters include portal vein pressure (PVP), portal flow rate as well as the flow rate of the common hepatic artery (table 1). Instrumentation and data acquisition to record the normal values was completed within 1.5 h. Systemic and hepatic hemodynamic parameters remained within normal ranges during this procedure.
This procedure is challenging but feasible. We have already applied this procedure to assess hepatic hemodynamics in normal mice as well as during 70% partial hepatectomy and in liver lobe clamping experiments. Mean PVP after resection (n= 20), was 11.41&#177;2.94 cmH2O which was significantly higher (P&#60;0.05) than before resection (6.87&#177;2.39 cmH2O). The results of liver lobe clamping experiment indicated that this monitoring procedure is sensitive and suitable for detecting small changes in portal pressure and portal flow rate. In conclusion, this procedure is reliable in the hands of an experienced micro-surgeon but should be limited to experiments where mice are absolutely needed.

This film demonstrates how to acquire systemic and hepatic hemodynamics in mice. The whole monitoring includes acquisition of vital parameters, systemic blood pressure, central venous pressure, common hepatic artery flow rate, and portal vein pressure as well as the portal flow rate in mice.

マウスにおける全身および肝血行動態パラメータの監視

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

C57BL / 6マウスにおける全身性エリテマトーデス（SLE）のBM12誘導モデル

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

正常マウスで70％肝切除後の血管と実質再生の可視化

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological conditions. Partial hepatectomy also facilitates the increased engraftment and proliferation of transplanted cells by accelerating neovascularization and cell migration towards the liver. Here, we describe a simple protocol for performing 30% hepatectomy and transplantation of cells in the spleen of a non-obese diabetic/severe combined immunodeficient NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mouse. 
In this procedure, two small incisions are made. The first incision is to expose and resect the left lobe of the liver, and another small incision is made to expose the spleen for the intrasplenic transplantation of cells. This procedure does not require any specialized surgical skills, and it can be completed in 5-7 minutes with less stress and pain, faster recovery, and better survival. We have demonstrated the transplantation of hepatocytes isolated from a green fluorescent protein (GFP) expressing mouse (Transgenic C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), as well as hepatocyte like cells of human origin (NeoHep) in partially hepatectomized NOD.SCID mice.

We have described a protocol for performing partial hepatectomy (PHx) and cell transplantation via spleen in NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mice. In this protocol, an incision is made to expose and resect the left lobe of the liver followed by another incision for the intrasplenic transplantation of cells.

うなずくにおける肝切除後肝脾内移植。SCID マウス

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Isolation of Regenerating Hepatocytes after Partial Hepatectomy in Mice

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream single-cell applications is challenging. A marked accumulation of lipids within regenerating hepatocytes is observed during the first 2 days of normal liver regeneration in mice. This so-called transient regeneration-associated steatosis (TRAS) is temporary but partially overlaps the major proliferative phase. Density-gradient purification is the backbone of most existing protocols for the isolation of primary hepatocytes. As gradient purification relies on the density and size of cells, it separates non-steatotic from steatotic hepatocyte populations. Therefore, fatty hepatocytes often are lost, yielding non-representative hepatocyte fractions. 
The presented protocol describes an easy and reliable method for the in vivo isolation of regenerating hepatocytes regardless of their lipid content. Hepatocytes from male C57BL/6 mice are isolated 24-48 h after hepatectomy by a classic two-step collagenase perfusion approach. A standard peristaltic pump drives the warmed solutions via the catheterized inferior vena cava into the remnant, using a retrograde perfusion technique with outflow through the portal vein. Hepatocytes are dissociated by collagenase for their release from the Glisson's capsule. After washing and careful centrifugation, the hepatocytes can be used for any downstream analyses. In conclusion, this paper describes a straightforward and reproducible technique for the isolation of a representative population of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. The method may also aid the study of fatty liver disease.

Lipid-laden hepatocytes are inherent to liver regeneration but are usually lost upon density-gradient centrifugation. Here, we present an optimized cell isolation protocol that retains steatotic hepatocytes, yielding representative populations of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice.

マウスにおける肝部分切除後の再生肝細胞の単離

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream ...

サリドロシドのMCF-7細胞の遊走・増殖抑制機構

Exploring the Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Salidroside in Inhibiting MCF-7 Cell Proliferation and Migration

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer mechanisms have been only incompletely elucidated. Hence, this protocol intended to decode the potential of Sal in regulating the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway in the malignant proliferation of human breast cancer MCF-7 cells. First, the pharmacological activity of Sal against MCF-7 was evaluated by CCK-8 and cell scratch assays. Moreover, the resistance of MCF-7 cells was measured by migration and Matrigel invasion assays. For cell apoptosis and cycle assays, MCF-7 cells were processed in steps with annexin V-FITC/PI and cell cycle-staining detection kits for flow cytometry analyses, respectively. The levels of reactive oxygen species (ROS) and Ca2+ were examined by DCFH-DA and Fluo-4 AM immunofluorescence staining. The activities of Na+-K+-ATPase and Ca2+-ATPase were determined using the corresponding commercial kits. The protein and gene expression levels in apoptosis and the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway were further determined using western blot and qRT-PCR analyses, respectively. We found that Sal treatment significantly restricted the proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells with dose-dependent effects. Meanwhile, Sal administration also dramatically forced MCF-7 cells to undergo apoptosis and cell cycle arrest. The immunofluorescence tests showed that Sal observably stimulated ROS and Ca2+ production in MCF-7 cells. Further data confirmed that Sal promoted the expression levels of pro-apoptotic proteins, Bax, Bim, cleaved caspase-9/7/3, and their corresponding genes. Consistently, Sal intervention prominently reduced the expression of the Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1&#945;, and FoxO1 proteins and their corresponding genes. In conclusion, Sal can be used as a potential herb-derived compound for treating breast cancer, as it may reduce the malignant proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells by inhibiting the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway.

著者スポットライト:乳がん治療におけるサリドロシドの分子メカニズムの探索 

The present protocol describesa comprehensive strategy for evaluating the pharmacological action and mechanism of salidroside in inhibiting MCF-7 cell proliferation and migration.

MCF-7細胞の増殖と遊走を阻害するサリドロシドの薬理作用と分子機構の探索

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer ...

関節リウマチ患者のための運動プログラムの開発

Evaluation of Changes in Hydration and Body Cell Mass with Bioelectrical Impedance Analysis after Exercise Program for Rheumatoid Arthritis Patients

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown benefits for RA patients, its impact on hydration and body cell mass remains uncertain. The presence of pain, inflammation, and joint changes often restrict activity and make traditional body composition assessments unreliable due to altered hydration levels. Bioelectrical impedance is a commonly used method for estimating body composition, but it has limitations since it was primarily developed for the general population and does not consider changes in body composition. On the other hand, bioelectrical impedance vectorial analysis (BIVA) offers a more comprehensive approach. BIVA involves graphically interpreting resistance (R) and reactance (Xc), adjusted for height, to provide valuable information about hydration status and the integrity of the cell mass.
Twelve women with RA were included in this study. At the beginning of the study, hydration and body cell mass measurements were obtained using the BIVA method. Subsequently, the patients participated in a six-month dynamic exercise program encompassing cardiovascular capacity, strength, and coordination training. To evaluate changes in hydration and body cell mass, the differences in the R and Xc parameters, adjusted for height, were compared using BIVA confidence software. The results showed notable changes: resistance decreased after the exercise program, while reactance increased. BIVA, as a classification method, can effectively categorize patients into dehydration, overhydration, normal, athlete, thin, cachectic, and obese categories. This makes it a valuable tool for assessing RA patients, as it provides information independent of body weight or prediction equations. Overall, the implementation of BIVA in this study shed light on the effects of the exercise program on hydration and body cell mass in RA patients. Its advantages lie in its ability to provide comprehensive information and overcome the limitations of traditional body composition assessment methods.

著者スポットライト:低体細胞量患者の疾患危険因子を分析するためのBIVAの実施 

This protocol assesses alterations in hydration and body cell mass status using bioelectrical impedance vectorial analysis following a dynamic exercise program designed for patients with rheumatoid arthritis. The dynamic exercise program itself is detailed, highlighting its components focused on cardiovascular capacity, strength, and coordination. The protocol details steps, instruments, and limitations.

関節リウマチ患者に対する運動プログラム後の生体電気インピーダンス分析による水分補給と体細胞量の変化の評価

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown ...