私たちは彼の研究室で撮影を行うことを可能にするためシトリンの魚のラインとビル·ジャックマン：著者は、寛大にαカテニンを提供するための博士ルトリン博士とトービンに感謝。著者は、資金源国立衛生研究所（助成5P20RR016463、8P20GM103423とR15AI094406）とUSDAを認める（プロジェクト＃ME0-H-1-00517-13）。この原稿は、メイン農林試験場公開番号3371として公開されている。

注：すべてのゼブラフィッシュケアプロトコルおよび実験は施設内動物管理使用委員会（IACUC）プロトコルA2012-11-03下のNIHガイドラインに従って行った。 4日後に受精1.ゼブラフィッシュ飼育<ol><li>別の映像34に示すように、最初の3時間後に受精内、ABゼブラフィッシュ、または任意の他のトランスジェニック系統を収集する。 </li><li> （; 0.17ミリモルのKCl、0.33のCaCl 2、0.33のMgCl 2、2mMのHEPES、pH6.8の5 mMのNaCl）をメチレンブルー（0.3 / mlの最終E3培地150 mlを含む15センチメートルペトリ皿に120の卵をインキュベート12/12の明/暗光周期で33℃のインキュベーター中の濃度）。 </li><li> E3 + PTU（1-フェニル-2-チオ尿素、10μg/ mlの最終濃度）と6時間後にメディアを交換して、死んだ卵を取り除く。 </li><li> 2日後に新鮮なE3 + PTUと交換媒体、33℃で4日間インキュベートする。 </li></ol> 2.でjectionマイクロニードルの準備<ol><li>次の設定で針プラーを使用したマイクロニードルに（110時間550ヒート; 0プル; 130ベロシティ）;（ID 0.69ミリメートル外径1.2ミリメートル）ホウケイ酸キャピラリーを引き出します。 NOTE：設定は、同様の形状のマイクロニードルを得るために、フィラメントからフィラメントに変化するであろう（ 図1参照）、新たなフィラメントがインストールされるたびに再調整する必要がある。 </li><li> 0.4μmのフィルタリン酸緩衝生理食塩水の3μlのマイクロニードルを埋める（; 137のNaCl、2.7のKCl; 10のNa 2 HPO 4; PBS 1.8 mMのKH 2 PO 4; pH7.4）を20μlのmicroloaderピペットを用いて、先端。 </li><li>高圧噴射システムに接続されているマイクロマニピュレータにマイクロピペットホルダー上のマイクロニードルを設定します。 30 PSIへの射出圧力と30ミリ秒のパルス持続時間を設定します。 </li><li>針の1/5が水になるまで蒸留水でペトリ皿を使用して、マイクロニードルを下げる。マイクロニードルのWiクリップちょうど水位以下に目細かいピンセット。水の中からマイクロニードルを持参し、ボーラスが表示されるまで、ペダルを数回押してください。 </li><li>タイプの一滴浸漬油でレイヤード血球計数器上のマイクロニードルを下げてボーラスの直径を測定します。所望の容積を得るために、パルス持続時間を調整する（ 表1参照）。 </li><li>油で安定した状態を保つ（ボーラスは体積が増加した場合、圧力を下げ、ボーラスボリュームが減少した場合背圧を増やす）するボーラスのための背圧を設定します。各マイクロニードルのためのパルス持続時間を記録します。 </li><li> microloaderピペットチップを使用してそれを吸引することによって、微小針からPBSを削除し、インジェクタに戻ってそれを配置し、連続パルススイッチを切り替えることで、左オーバーPBSを追放。各マイクロニードルを予約。 </li></ol> 3. カンジダ準備<ol><li>コドン最適化dTomato、GFP、BFP、EOSや極東で形質転換ストリークカンジダ·アルビカンス酵母peptineデキストロース（YPD）寒天プレート（10g / Lの酵母エキスが20g / Lペプトン、20グラム/ Lのデキストロースに滅菌木製のダボを用いて凍結ストック（25％グリセロール中で-80℃のストック）から赤、が20g / L寒天;オートクレーブし、ペトリ皿中を25ml注ぎ）、30℃で一晩インキュベートする。 </li><li>滅菌木製のダボを用いてつのコロニーを選択し、YPD液体（10g / Lの酵母エキスが20g / Lペプトン、20グラム/ Lのデキストロース、オートクレーブし、無菌的に16×150mmのガラス培養において5mlのアリコートを5 mlに植菌管）。 </li><li> 60rpmでローラードラムで30℃で一晩インキュベートする。 </li><li> Cの 1ミリリットルを収集1.7ミリリットル滅菌遠心管にアルビカンス文化と転送。 </li><li>秒のカップルのための5000×gで遠心分離する。上清を空にし、徹底的に滅菌PBS、渦の1ミリリットルを追加します。これを2回繰り返します。 </li><li>滅菌PBS 1,000：1ミリリットル株式1に希釈することにより、血球計数器を使用してコロニーを数える。 </li></ol> 4にゼブラフィッシュを注入する浮袋<ol><li> 33℃のインキュベーター中で30分間注入皿（2％アガロース）を温める。 </li><li>所望の時間に、すべてのゼブラフィッシュを吸引することなく、25ミリリットルピペットを用いて注入するために、魚を含む15センチメートルペトリ皿からE3 + PTUの150ミリリットルの100を削除します。 </li><li> （最終濃度は200μg/ ml）を、残りの50ml培地に4 mg / mlの緩衝化トリカインメタンスルホン酸塩ストック（TR）2 mlを加えることにより、ゼブラフィッシュのdpf 4を麻酔し、15分間待つ。 </li><li>解剖顕微鏡下では、膨張した浮袋で魚を選択します。魚はまた、MPOにおける好中球分布として、均質な表現型のために、その時点でスクリーニングすることができる：解剖顕微鏡落射蛍光を用いて、GFPライン 。 </li><li> C.を希釈PBS中1ml当たり形成単位1.5×10 7コロニー（CFU / ml）を基準にした元濃度（ ステップ3.8）からアルビカンス株式を。 </li><li>プラスチック製の移送管を用いて射出皿30ゼブラフィッシュを転送するTTEとは余分なメディアを取り出します。 </li><li>釣りワイヤツールを使用すると、（0.012インチ径釣り糸ホウケイ酸キャピラリー内にスーパー接着）、垂直方向に注入ディッシュを保持し、垂直方向に魚を方向付けることで、10匹の魚の3行を作る。 </li><li>余分なメディアを取り出します。 </li><li>徹底的に1.5×10 7 CFU / mlのCでチューブをボルテックスアルビカンス 。 </li><li> Cの 3μlの1のマイクロニードルを埋めるアルビカンスが新しいmicroloaderピペットチップを使用して、適切な設定にパルス持続時間を設定する（ ステップ2.9参照 ）。 </li><li>浮袋（ 図3A）の背面に向かって目指して、マイクロニードルと魚の頭の間に20°の角度を作るために、注入の皿を回します。 </li><li>針の穴がルーメン内にあることを確認しながら、浮袋にマイクロニードルを押し、一度ペダルを押してください。 </li><li>各魚を繰り返し、E3で料理をあふれさせることで回復皿（25ミリリットルE3 + PTU）に移転Dリカバリー皿にそれを空に。 </li><li>注射皿に別の30魚を転送します。 </li><li>徹底的にC.ボルテックスで満たされた新しいマイクロ針で繰り返し注射アルビカンス 。 </li><li>必要に応じて、汚染を避けるため、別の回復皿（ ステップ4.10）に転送するために異なる注入の皿を使用して、PBS対照を注入して終了。 </li></ol> 5.目的の接種のために魚のスクリーニング<ol><li>溶解するまでマイクロ波処理し、37℃に冷却し、沸騰、E3 40mlのアガロース低溶融物160mgを加えることにより、0.4％低融点アガロース溶液（LMA）を40mlを準備する。一旦冷却TR（最終濃度200μg/ ml）を400μlのを追加します。 </li><li> （25 mLのE3 + PTU、最終濃度を200μg/ mlのにTRの唯一の1ミリリットルを使用してステップ4.3）に記載されているようで30分の回復後、魚を麻酔し。 </li><li>体重ボートでLMAの2ミリリットルに転送（できるだけメディアとの）30魚。 </li><li>トランスファーピペットで吸引し、個々の魚とのみ10×6中央井戸を使用して、96ウェルイメージングプレートにLMAの1滴の魚プレート。 </li><li>画面にすべての魚は、イメージングプレートにロードされるまで繰り返します。 </li><li>媒体を5分間室温で固化しましょう​​。 </li><li>彼らはガラスの底に接触していることを確認しながら、彼らの側に魚を置きます。 </li><li>倒立落射蛍光/共焦点顕微鏡および適切なフィルターで20X対物レンズを用い、C.数を記録する各魚の浮袋でアルビカンス酵母細胞。 </li><li> 、浮袋で15-25酵母細胞魚（または所望の接種材料）を選択して安楽死させる非選択魚（E3におけるTRの800μgの/ mlで）によってE3 + PTU 50mlの深いペトリ皿に選択された魚を戻すイメージングプレート選択したウェルにE3の3滴を追加し、プラ​​スチック製のトランスファーピペットを用いて魚を吸引する。 </li><li>所望の期間のために、33℃でインキュベートする。 </li></ol> 6.魚ポストスクリーニングイメージング<ol><li>所望の時間に、イメージに魚を含む深いペトリ皿からE3 + PTUメディアの50ミリリットルの25を削除します。 </li><li> （25ミリリットルE3 + PTU残り、最終濃度を200μg/ mlのにTRの唯一の1ミリリットルを使用してステップ4.3）に記載されているような魚を麻酔し。 </li><li>適切96ウェルイメージングプレート及び位置に魚プレート（ - 5.7 5.3ステップ ）。 </li><li>適切なレーザーおよび発光フィルターを使用して共焦点顕微鏡を走査して画像。微分干渉コントラスト（DIC）の下で4倍対物レンズを用いて魚に第1焦点と第2マイクロ秒/ピクセル速度および1024×600ピクセルのアスペクト比を有する走査モードで共焦点レーザーで20X対物レンズを用いて関心領域の画像を取得する。 3フレームのカルマン·フィルタモードを適用し、1μmのステップサイズでのZスタックを取得する。 </li><li> 50ミリリットルE3 + PTUまたはindividuaに深くシャーレに戻るリットルウェル（24ウェル培養皿を3ml E3 + PTU）と33℃でインキュベートする。 </li></ol> 7.浮袋を解剖<ol><li>高真空グリースで10ミリリットル注射器を埋める。 </li><li> 2％のLMA（アガロースE3の8ミリリットル中の低融点の160 mgのと歩調5.3）を準備します。 </li><li>所望の時間に、魚（ ステップ5.2）を麻酔し。 </li><li>転送10 E3 1mlの1.7 mlの遠心管に魚や遠心管に4 mg / mlのトリカイン（最終濃度800μg/ ml）を200μlを添加し、室温で15分間インキュベートすることによって安楽死させる。 </li><li>マイクロスライド（75×25ミリメートル、 図2）に1センチメートル離れて、広場に真空グリースの4滴を配置することにより、画像化スライドガラスを準備します。 </li><li>広場の真ん中に2％のLMAの2滴を置きます。 </li><li>解剖顕微鏡下で独立したスライドガラス上に1魚を置き、心臓が鼓動を停止していることを確認して、余分な水分を除去する。 </li><l細かいピンセットを使用してI&gt;は左ピンセットで固定された位置に頭を維持し、右のピンセット（ 図4A）で、前腸を下に引っ張って浮袋を分析。 </li><li>消化管からそれを分離し、左ピンセットで空気圧ダクトによる浮袋をピックアップし、それが固化する前に、2％のLMAの中心に配置します。 </li><li>イメージングスライドガラスの上にカバースリップ（18×18 mm）を置き、真空グリースなどLMA（ 図2）に触れるまで押し込みます。 </li><li>切開の10分以内に画像がステップ6.4で説明したように。 手順を繰り返し7.7から7.11他の魚と。 </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

浮袋のマイクロインジェクション疾患モデルの進歩と限界ここで紹介するモデルは、Gratacap らに記載粘膜カンジダ症浸漬モデルの拡張である（2013）。それは、制御された感染時間、再現性の高い感染量、したがって、改善された効率の利点が追加されます。ここでは、非侵襲非常に詳細に感染動態の時間的なドキュメントだけでなく、より高解像度浮袋のe...

Mucosal infections can lead to life threatening bloodstream infections due to the damage of the epithelial barrier, which allows pathogens access to the systemic environment1,2. In addition, mucosal infections can also cause significant immunopathology even when contained externally3-5. The commensal unicellular fungus Candida albicans is present in the majority of the population in the oral cavity and other mucosal sites6-9. Although normally contained by innate and adaptive immune responses, innate immune defects and medical interventions can lead to severe mucosal candidiasis. The assault on the epithelial barrier results in an increased risk of life threatening disseminated disease as well as immunopathology, as in the case of vulvo-vaginal candidiasis, additionally C. albicans colonization has been linked with lung immune homeostasis10,11. Disseminated candidiasis is now the fourth most common bloodstream infection in intensive care units12 and mortality as high as 40% makes it a major concern. Due to the increase in immunomodulatory treatments for patients with autoimmune diseases, cancer or organ transplants, it is imperative to understand the interaction between this pathogen and the mucosal immune compartment.
The majority of cell biological advances regarding C. albicans-cell interactions at the mucosal level come from in vitro13-15 and murine models16-18. Both these approaches have distinct advantages, but the ability to image live cells at high resolution in an intact host has limited the temporal and spatial characterization of the infection. For these studies, there is the need for an in vivo model where the interaction of pathogen, innate immune and epithelial cells can be visualized in an intact vertebrate host.
The zebrafish has emerged as an invaluable tool for the understanding of human disease, mainly due to its transparency and amenability to genetic manipulation. Cell and organ development have been imaged in exquisite detail, which has led to the description of novel immune cell behaviors, such as T cell behavior in the developing thymus19 or the battle between intracellular mycobacteria and phagocytes20-22. Recent work has described intestinal microbe-host interactions in zebrafish and shown that microbial colonization of the intestinal tract affects host intestinal physiology and resistance to other infections23,24. Furthermore, infection through the gut epithelium has been described for several pathogens.
In contrast to the intestinal tract, the swimbladder represents a more isolated and complementary mucosal model. This organ is an extension of the developing gut tube and forms anteriorly to the liver and pancreas25,26. It produces surfactant, mucus and antimicrobial peptides27,28 and anatomically, as well as ontogenetically, this organ is considered a homologue of the mammalian lung29,30. Since the pneumatic duct remains connected to the gut in the zebrafish, this allows for immersion infection to occur naturally. Remarkably, the only known naturally occurring infections of fish with Candida species are C. albicans infections in the swimbladder31. We recently described an experimental immersion infection model where C. albicans infects the swimbladder, and found that this infection recapitulates some of the hallmarks of C. albicans-epithelial interaction in vitro32,33. 
In the method presented here, the original immersion infection model is improved by directly injecting C. albicans into the swimbladder of 4 days post fertilization (dpf) zebrafish. This allows for precise temporal control of infection as well as a highly reproducible inoculum. It permits detailed intravital imaging, coupled with the versatility of the zebrafish model. As an example of what can be done with this method, we present the spatio-temporal dynamics of C. albicans growth along with neutrophil recruitment to the site of infection. Because zebrafish swimbladder tissue is challenging to image intravitally, we also present a rapid swimbladder dissection technique that improves fluorescence signal and microscopic resolution. These methods expand the toolbox for fungal, immunological, and aquaculture research as well as describing a novel infection route that may be translated to model other fungal, bacterial or viral infections of mucosal surfaces.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="784">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Name</td>
			<td style="width:259px;">Company</td>
			<td style="width:176px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:88px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.7 mL tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-175-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Deep Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>89107-632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-711-7M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast Extract</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>90000-726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Peptone</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>90000-264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D16-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agar</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>90000-760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine tweezers (Dumont Dumoxel #5)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wooden Dowels</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>10805-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Low Melt Agarose</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>12001-722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flaming Brown Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Borosilicate capillary</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>BF120-69-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MPPI-3 Injection system</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>MPPI-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Back Pressure Unit</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>BPU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micropipette Holder kit</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>MPIP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Foot Switch</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>FSW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>MM33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnetic Base</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>Magnetic Base</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tricaine methane sulfonate</td>
			<td>Western Chemical Inc.</td>
			<td>MS-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Scope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td colspan="2">SZ61 top SZX-ILLB2-100 base</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td colspan="2">IX-81 with FV-1000 laser scanning confocal system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20x microscope objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UPlanSApo 20x/0.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Roller drum</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>TC-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microloader pipette tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>930001007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass culture tubes (16 x 150 mm)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>60825-435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH4534-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH4532-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH0246-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (Corning)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH4520-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Children clay (Play-Doh)</td>
			<td>Hasbro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C69-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methylene Blue</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>VW6276-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PTU</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemocytometer (Hausser scientific)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>15170-172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Type A immersion oil</td>
			<td>Blue Marble Products</td>
			<td>51935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vortex Genie</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>14216-184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose (Lonza)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>12001-870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S374-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KH2PO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P285-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fishing wire</td>
			<td>Stren</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 well imaging plate (Sensoplate)</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>655892</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">High vacuum grease (Dow Corning)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>59344-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microslide (25 x 75 mm)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>48300-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover slips (18 x 18 mm), No 1.5</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>48366-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 cm Petri dish (Olympus plastics)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol (EMD chemicals)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>EMGX0185-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well culture dish (Olympus plastics)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Weight boats (8.9 cm)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>89106-766</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling mucosal candidiasis in larval zebrafish by swimbladder injection

粘膜病原体に対する初期の防衛は上皮バリアと自然免疫細胞の両方で構成されています。両方の免疫適格、と彼らの相互通信は、感染症に対する保護のための最も重要である。病原体上皮および自然免疫細胞の相互作用は最高の複雑な挙動は、時間と空間に繰り広げられる、生体内 、 で調査されている。しかし、既存のモデルは、粘膜レベルでの病原体との戦いの容易な時空間的イメージングを可能にしない。 ここで開発されたモデルは、少年ゼブラフィッシュの浮袋に、真菌病原体、 カンジダ·アルビカンスの直接注射により粘膜感染が作成されます。得られた感染は、上皮および粘膜疾患の発生を通じて自然免疫細胞の挙動の高分解能イメージングを可能にする。この方法の汎用性は、pHをもたらす免疫イベントの詳細なシーケンスをプローブするホストの尋問が可能にagocyte動員および保護において、特定の細胞タイプおよび分子経路の役割を検討する。また、免疫攻撃の関数としての病原体の挙動は、蛍光タンパク質を発現するC.で同時に撮像することができるアルビカンス 。宿主 - 病原体相互作用の増大した空間分解能について迅速浮袋切開技術を用いても可能である。 ここで説明粘膜感染モデルは、粘膜カンジダ症の研究のための貴重なツール作り、簡単な再現性の高いです。このシステムはまた、マイコバクテリア、正常上皮表面を介して感染する細菌またはウイルス、微生物などの他の粘膜病原体に広く翻訳可能であってもよい。

後部浮袋でマイクロインジェクションここに提示された実験方法はC.一貫した用量の注射を記載ゼブラフィッシュのDPF 4の浮袋でアルビカンス酵母細胞。イマージョンモデルと以前の研究は、Cに浮袋免疫応答を示唆しているアルビカンスは、哺乳類の粘膜カンジダ症32と同様である。ここでは、より多くの、簡単な再現性があり、迅速であ...

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Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

In vivo spatio-temporal interactions of pathogen and immune defenses at the mucosal level are not easily imaged in existing vertebrate hosts. The method presented here describes a versatile platform to study mucosal candidiasis in live vertebrates using the swimbladder of the juvenile zebrafish as an infection site.

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

10.1K ビュー.  University of Maine. In vivo spatio-temporal interactions of pathogen and immune defenses at the mucosal level are not easily imaged in existing vertebrate hosts. The method presented here describes a versatile platform to study mucosal candidiasis in live vertebrates using the swimbladder of the juvenile zebrafish as an infection site.