Mohammed R. Milad is supported by NIMH grant R01 MH097880 and institutional funds from the Department of Psychiatry at MGH.

注：このプロトコルですべての手順は、マサチューセッツ総合病院のための施設内動物管理使用委員会（IACUC）となって研究動物管理小委員会によって承認され、健康のガイドラインの国立研究所に準拠しているされています。 1.動物住宅及び取扱い手順<ol><li>木材チップの寝具3-4インチのプラスチックビンのグループで到着すると、家の大人のSprague Dawley雌ラット（200〜225グラムの重さ）、年齢の約8〜10週間。固形飼料および水に自由摂取へのアクセスの食事と12時間の明/暗サイクルでそれらを維持する。 1週間の最低住宅事情と動物施設に順応するために、ラットのままにしておきます。 注：この原稿のすべての手順は、光サイクル中に行われている。 </li><li>この順応期間の後、2〜3日間、5分ごとに、すべての動物を扱う。適切に（胴体によってませ尾でサポートされている）一度にラット1を拾う、確実に固定して保持し、この時間の間に、それらをペット。激しく揺れる、またはより長い期間のために心配して、ストレスをより多く表示された動物を扱う。このプロトコルでは、次の手順に影響を与える可能性があり、ストレスを扱う最小化するためにこれを行います。 注記：動物の取り扱い時の日数および量は、異なる研究室間で変化させることができる。しかし、これらは、同じラボ内での実験の間で一貫している必要があります。 </li></ol>膣スワブスミアと染色手順：発情周期を監視する2. <ol><li> 0.9％食塩水（塩化ナトリウムを蒸留水に溶解）を作る。この溶液中で綿棒を湿らせます。不十分なサンプル収集または細胞の喪失につながる可能性が過飽和を回避するためにペーパータオルを使用して先端ブロット。上向きに離れて膣口から尾を持ち、静かに緩い膣の細胞を捕捉するために、壁の周りの膣管とロール状に綿棒を挿入します。 </li><li>動物はベッドに排尿した場合尿汚染が相同定のために、それが困難になりますようにトンの先端は、新しいものと交換してください。ストレスへの暴露が発情周期を混乱されるため、この手順の間に動物に苦痛を与えないよう十分に注意してください。拭き取りすると、偽妊娠を誘導することができる子宮頸部への余分な刺激を最小にする深すぎないが、迅速挿抜を実現することを目指しています。 注：偽妊娠、 すなわち典型的には約12日間続く ​​非環発情周期、発情25の連続した日として同定することができる。 </li><li>慎重にアプリケータ先端部を除去し、予め標識顕微鏡スライド上にそれをロール。スライド上あまりにも多くの流体としてあまりにもハードダウン押すとドライ一度相同定を困難にすることができないようにしてください。 注：これは個人の好みに応じて行うことができるが、一つのスライドは、各動物の複数の日を含むことができる。 </li><li>スライド上のサンプルの転送を確認してください。断つためのサンプルを収集1スライド上のAl日間連続、より追跡できるようにし、毎日の発情期の変更を識別します。 注：可能な場合はサンプルを収集する人々は、すべての動物のために同じままなら、それはまた、理想的です。 </li><li>スライドが乾燥していると、位相識別のための染色プロトコルを開始する。染色キット（材料の表を参照）を使用し、固定液（水色）のスライドを10回浸す、（ピンク）染色液で10倍、と対比溶液中の5倍（紫）。流水で軽くスライドをすすぐ。顕微鏡下で表示する前にスライドを完全に空気乾燥してみましょう。 NOTE：発情（E）、発情（M）、発情間期（D）、および発情前期（P）26：一般的に4~5日長い発情周期を（この順序で）で構成されている。発情期は、青、角化細胞によって特徴付けられる白血球による発情及び角化および有核細胞の組み合わせ、それらは非常に疎である以外は、発情間期細胞型の存在下での発情と同様であり、紫色に染色された凝集によって発情さの有核細胞（ 図1）。膣スミア診のために等しく有効である上述のものに加えて、種々の染色手順は、がある。 </li><li>実験前に正確に位相を監視するために、少なくとも2つの完全なサイクル（〜8〜10日）のためにサンプルを収集する。サンプルが取られる時間帯と一致している。全体と実験の終了まで毎日の膣スメアサンプルを収集します。 </li></ol> 3.事前暴露<ol><li>実験の開始前に、チャンバーは動物がどんな行動試験の前にコンテキスト（空調室）に順応できるように調節する動物​​を事前に公開します。 <ol><li>すべての実験の前に3日間、一日あたり20〜30分に家のライトが付いている（音減衰ボックスにあります）空調室にメスを事前に公開します。彼らは研究のための彼らの室と事前にさらされているボックスを割り当てます。完全に洗浄トン彼らは行動と発情周期に影響を与えることができるので、臭いを除去するためのセッションと動物の間、彼は箱（壁やトレー）。 </li></ol></li></ol> 4. 1日目：馴化/恐怖条件付け<ol><li>動物は彼らの発情周期の発情期にあることが確認された後、3日間の実験の馴化/コンディショニングフェーズを開始。 <ol><li>実験前の各日に刺激（CS）のプレゼンテーションを条件付け最初のトーンに凍結の前トーンベースライン対策を行ってください。 CS発症前の最初のCS-単独の裁判の開始時に刺激不在の時間間隔の間に（100を掛けた裁判の期間によって不動費やし秒で除して算出、）％の凍結のスコアを取得することによってこれを行います。 注：これらの対策は、馴化、コンディショニング、消滅、およびリコール時とベースライン凍結レベルを評価し、比較することができる。 </li><li>発情後期フェーズの間に絶滅の研修を実施する、発情期の彼らの最後の日に、ラットを条件付け。綿棒と識別する発情期（ステップ2）実験プロトコル（空調/絶滅/リコール）を開始する前に、毎日。発情期は1日より長く続くことのような動物がトレーニングを開始する準備ができたら、使用サイクル履歴が決定するために、位相の長さを予測する。 </li></ol></li><li>空調室では、電気刺激発生器に足ショックグリッドの床に接続します。無条件刺激（US）として0.5〜0.6ミリアンペアの刺激レベルを使用します。条件刺激（CS）として4 kHzの、80デシベルの音を使用してください。 注：これらのパラメータは、実験室間で異なることができ、最適なコンディショニングのために修飾することができる。 <ol><li>凍結解析プログラムは、視覚的な手がかりを（一時的ではなく）が必要な場合は、トーンにLED光を共活性化する。ビデオフレーム内の、オペラントチャンバーの外側に光を置きます。各試験の開始時に、LEDライトを活性化し、それが目の終わりまで照らされ続けるEトライアル。 注：この光は動物では表示されませんとだけ開始及び（凍結挙動を測定するために使用される）を記録したビデオファイル内の試験終了のためのマーカーとして役立つ。 </li></ol></li><li>慣れの5 CS-単独の試験のための空調室に動物を置きます。すぐに慣れセッション以下、恐怖条件付けの7ペアCS-USの試験を行う。 CS音が30秒間持続し、0.5秒、米国のショックにcoterminatesていることを確認してください。 3分を平均可変試行間間隔ですべてのセッション（慣れ、エアコン、絶滅、およびリコール）で試験を実行します。 </li><li>コンディショニングセッションの最後に、次の日まで、ホームケージに及び動物施設に動物を返す。 </li></ol> 5. 2日目：エストラジオール準備<ol><li>このプロトコルの1日目を受けたすべての動物のための発情期を綿棒識別する。エストラジオールを準備します（またE2、、17β-エストラジオール、またはとして知られているビヒクルとしてゴマ油または0.9％生理食塩水を用いて15μgの/ kgの用量の皮下注射のためのベータ - エストラジオール）。 </li><li>注射の準備をそれらがこのプロトコルの1日目に調整したときに測定し、記録した全ての動物の体重を使用するエストラジオールの量を算出する。 </li><li>ラットあたりエストラジオール（ すなわち 0.2ミリリットル）の投与量を標準化するために計算を行う。エストラジオールは、その水不溶性に溶解させることは困難であり、少量のために大量の溶媒を必要とするので、溶解するまで、弱火ゴマ油中のエストラジオールを混合することにより原液を調製。次いで、溶液を汚染物質を除去するために0.22μmのフィルターを通過させることができる。例えば、動物当たり0.2ミリリットル注入量では15μg/ kgの用量を達成するために、ごま油の合計に必要な体積に3000μgのエストラジオール/ 1ミリリットルゴマ油原液の計算されたボリュームを追加する。 注：あるいは、エストロゲンTHAの他の形態を使用する<html> tは、水溶性および溶解が容易である。 </li></ol> 6. 2日目：エストラジオール管理/絶滅トレーニング<ol><li>エストラジオールを皮下投与する。穏やかなピンチに首、肩甲骨の間でたるんだ皮膚を持ち上げ、皮膚折り目によって形成される三角形に注射針を挿入します。 </li><li>エストラジオールの皮下注射後30分、再びコンディショニング室で動物を配置し、絶滅のトレーニングを始める。この絶滅セッションでは、3分の平均を可変試行間間隔で発表され、30秒、4 kHzの、80デシベルの音、からなる各試行で、20 CS-単独の試験を行う。 注：エストラジオール前絶滅の訓練にか、すぐに絶滅後に投与されたときにリコールに対するエストラジオールの効果が発生します。効果は4時間後に絶滅を観察していないので、それはトレーニングセッション15の開始または終了に時間的に近い注入することをお勧めします。 </li></ol>ル &quot;&gt; 7 3日目：絶滅リコール<ol><li>絶滅のトレーニング後24時間、1日目とこのプロトコルの2を完了した動物が綿棒。 </li><li> （1日目と2と同じ）、割り当てられた空調室に動物を置きます。ステップ6.2で説明したように絶滅の訓練のために投与20試行に似て試行間間隔を持つ唯一の3.80デシベルCS-単独の臨床試験で構成されて3 CS-単独の臨床試験（絶滅のリコールの3件の試験）を、提示することによって、絶滅リコールセッションを開始します。 </li><li>リコールセッションが完了すると、ホームケージに動物を返す。 </li></ol> 8.データ解析<ol><li>映像を通じて行動データを取得し、コンピュータソフトウェアを使用して分析する。 注：凍結スコアは手動でも各試行のCSプレゼンテーション中に凍結発作のタイミングによる薬物治療に盲目である実験者によってカウントすることができ、音の間に凍結した時間の割合として表さ。凍結がある30秒CS-USの試験中の呼吸を除いて、運動の完全な欠如によって定義される。 100を掛けた30秒（トライアルの期間）によって（不動）を凍結費やし秒で割って％の凍結を計算します。 </li></ol>

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この原稿の著者は、開示することはなく、競合する経済的利益やその他の利害関係はありません。

恐怖の絶滅は、様々な操作の下で特定され、評価され、馴化恐怖消去を仲介する神経機構と雄ラットで広く研究されてきた。比較的少数の研究は、雌ラットや恐怖消去における性腺ホルモンの役割を検討した。特に恐怖消去に対するエストロゲンの効果を研究するために、自然に循環する雌ラットは、3日間の行動パラダイムに供される。この手順では、馴化/エアコン、絶滅、絶滅リコール?...

固有性差は、ヒトとげっ歯類の両方で様々な認知行動や学習パラダイム間で観察される。例えば、男性は、良好な空間能力1-3を有し、一方、女性は、一般的に、より強力な口頭および詳細指向能力を有することが報告されている。これらの性差は、性腺ホルモンの影響に一部起因することができる。高いエストラジオールレベルは、女性がより良いである、タスクのパフォーマンスを向上させることが、男性は一般的にうまく4-6を行うタスクのパフォーマンスを悪化させる。この証拠は説得力があるが、完全にヒトでの研究で、実験環境を制御するために、限られた能力は、行動上のこれらの効果はホルモンに特異的に起因することができた場合、それが困難に決定することができる。動物実験は、対照的に、完全に制御された状況を可能にする。 恐怖消去の基本的な神経機構が同定されており、よく男性で研究されているが、かどうかは不明であるこれらのシステムは、女性またはそれらがどのように発情周期にわたって変更は同じである。恐怖条件付けと絶滅広く不安障害に関連する研究を行うために、げっ歯類およびヒトにおける行動パラダイムを使用している。女性は、不安障害のリスクが高いだけでなく、より高い症状の持続期間および重症度7~13を有することを考えれば、これらの研究において、女性を含めることが重要である。本研究では、女性の過少は、性ホルモンの行動への影響のための発情期の監視と会計の課題に起因すると考えられる。しばしば報告されていない行くか、または彼らの研究のための方法に記載されていないこの点に関して遭遇問題にメスを調べてやる研究所。 げっ歯類で証拠を新興恐怖消去における性差は生殖腺ホルモン14-18で変調されていることを示唆している。恐怖条件付けでは、動物は特定の刺激を恐れるように訓練されている。の未強化の発表数の後刺激は、動物はキュー、絶滅と呼ばれるプロセスを恐れることはない学ぶ。どれだけ動物を学習し、絶滅のトレーニングの後にいくつかの時間を与えられた吸光リコールテスト中に観察することができ、このタスクを学習するのメモリを統合します。絶滅のリコール時の少ない恐怖式が良い絶滅メモリの統合を示しています。私たちの研究室からの最近の知見は、エストロゲンは恐怖消去メモリの統合を調節し、絶滅のリコールを改善できることを示唆している。具体的には、発情前期に消滅している雌ラットは、発情周期の位相はその間エストロゲンレベルのピーク、絶滅メモリの展示強化保持を循環させる。対照的に、前または直後の吸光トレーニング15,16の後、外因性エストラジオールの投与によって改善することができ、低エストロゲン発情後期相表示比較的乏しい吸光リコールに消滅する雌。絶滅メモリの統合の神経機構（税込雌の生殖腺ホルモンの役割を）udingすることは明らかではない。 実験動物では、ホルモンの役割は、去勢および卵巣摘出などの侵襲的な外科的除去の手順を使用して調べることができる。手術からの回復に続いて、性腺ホルモンは、多くの場合、外因的行動のタスク19の実行中に操作されます。このアプローチは、性ホルモンについての重要な情報を提供し、それが20〜23（タイミングと投与量の面で）性腺ホルモンのよく制御された操作を可能にしているため便利ですしている。しかし、このアプローチは、発情周期にわたって生じる、天然に存在する変動の影響を評価せず、また、彼らは、それによってヒトの研究に並進可能性を制限する、「正常な」動物を表しています。これは、特定の発情周期の位相、及びサイクル内のエストロゲン受容体発現の変化で女性ホルモンのレベルがピークと衰退することを十分に文書化された、と卵巣摘出24の後。したがって、確実に高および低エストロゲン状態はそれらの寿命を通して、女性に与えることができるという効果を研究するために無傷の生殖腺とメスの研究を実施し、実験計画を改善する必要がある。 このプロトコルは、恐怖消去に関与神経生物学的システムでのエストロゲンの影響に焦点を当てています。 1）慎重に、発情周期を監視2）全身投与のためのエストラジオールの効果的な用量を準備し、3）恐怖条件、絶滅が含ま行動パラダイムに従っており、自然にサイクリング雌ラットをでリコール：それはどのように説明しています。このプロトコルは、より良好な消光挙動恐怖条件付けで観察された性差を理解するために研究を支援するために他の薬理学的操作および細胞および分子ツールを使用して修飾することができる。以下の手順は、私たちの研究室内で利用するものである、と私はこれらの手順の多くの変形が存在することに注意してくださいnの文学。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="613">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:135px;">Catalog number</td>
			<td style="width:199px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Fear conditioning chamber</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Graphic State</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Sound-attenuating box</td>
			<td style="width:159px;">Med Associates, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">NIR-022MD</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Estradiol</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">E1024</td>
			<td style="width:199px;">In sesame oil for subcutaneous injection</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Sesame oil</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Freezescan</td>
			<td style="width:159px;">Cleversys, Inc.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Dip quick stain</td>
			<td style="width:159px;">Jorgensen Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">J0322A1, J0322A2, J0322A3</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Cotton-tipped applicators</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">23-400-114</td>
			<td style="width:199px;">6-inch, sterile</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">0.9% saline</td>
			<td style="width:159px;">LabChem, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">LC23460-2</td>
			<td style="width:199px;">Sodium chloride w/v</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Selectfrost microscope slides</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">12-550-003</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Virex II 256</td>
			<td style="width:159px;">Diversey, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">5019317</td>
			<td style="width:199px;">Dilute 1:256 with water</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Luer-Lok Tip 1ml Syringes</td>
			<td style="width:159px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:135px;">309628</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:120px;">Hypodermic disposable needles</td>
			<td style="width:159px;">Exelint International, Co.</td>
			<td style="width:135px;">26402</td>
			<td style="width:199px;">26-gauge</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for studying extinction of conditioned fear in naturally cycling female rats

条件付け恐怖の絶滅は広範囲に男性のげっ歯類で研究されてきた。最近では、特定の行動のタスクとレスポンス行動のための神経機構は、女性と男性では異なっていることを示す研究が増えてきた。調査研究にメスを使用すると、それらの発情周期中の性腺ホルモンの変化の挑戦を表すことができます。このプロトコルは、雌ラットの恐怖絶滅メモリの統合におけるエストロゲンの役割を調査するのに有用である十分に確立された手順を説明します。発情周期と外因性エストロゲンの投与の前に消光訓練の位相が2​​4時間後に吸光リコールに影響を与えることができる。ここで説明発情相同定のための膣拭き取り技術は自然に性腺ホルモンをサイクリングの検査と操作を補助する。この基本的な齧歯動物モデルの使用は、中恐怖消去メモリを調節することができるエストロゲンメカニズムを描写することができるメス。

この恐怖消リコールプロトコルでは、パーセント凍結は恐怖の指標として測定した。よく消滅と絶滅の訓練の記憶を保持した動物は、絶滅のリコール時の行動試験の最終日に、低恐怖を示した。オスとメスのラットは大幅にエアコン、絶滅の間、条件付け恐怖の表情が異なり、相（ 図2）覚えていません。動物は高および低エストロゲン発情位相群として別々に分析されている場...

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Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

当然の雌ラットをサイクリングで馴化恐怖の消滅を研究するためのプロトコル

Extinction of conditioned fear has been extensively studied in male rodents. Recently, there have been an increasing number of studies indicating that ...

protocol-for-studying-extinction-conditioned-fear-naturally-cycling

Research

JoVE Journal

Behavior

13.1K ビュー.  Massachusetts General Hospital. Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

ビデオ: Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

コカイン条件付け場所嗜好における標的遺伝子の役割を研究するためにCreリコンビナーゼを発現するウイルスベクターの定位マイクロインジェクション

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

行動学

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

禁欲ラットで探しているヘロインに長期の食事制限の影響を研究するための手順

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association between environmental cues and aversive experiences. In this test, mice are placed into a conditioning chamber and are given parings of a conditioned stimulus (an auditory cue) and an aversive unconditioned stimulus (an electric footshock). After a delay time, the mice are exposed to the same conditioning chamber and a differently shaped chamber with presentation of the auditory cue. Freezing behavior during the test is measured as an index of fear memory. To analyze the behavior automatically, we have developed a video analyzing system using the ImageFZ application software program, which is available as a free download at http://www.mouse-phenotype.org/. Here, to show the details of our protocol, we demonstrate our procedure for the contextual and cued fear conditioning test in C57BL/6J mice using the ImageFZ system. In addition, we validated our protocol and the video analyzing system performance by comparing freezing time measured by the ImageFZ system or a photobeam-based computer measurement system with that scored by a human observer. As shown in our representative results, the data obtained by ImageFZ were similar to those analyzed by a human observer, indicating that the behavioral analysis using the ImageFZ system is highly reliable. The present movie article provides detailed information regarding the test procedures and will promote understanding of the experimental situation.

This article presents a protocol for a contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system to assess fear learning and memory in mice.

マウスにおけるビデオ解析システムを用いた文脈と手掛り恐怖条件付け試験

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Trace Fear Conditioning in Mice

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings between a neutral stimulus and an unconditioned stimulus. There is a 20 sec trace period that separates each conditioning trial. On the following day freezing is measured during presentation of the conditioned stimulus (CS) and trace period. On the third day there is an 8 min test to measure contextual memory. The representative results are from mice that were presented with the aversive unconditioned stimulus (shock) compared to mice that received the tone presentations without the unconditioned stimulus. Trace fear conditioning has been successfully used to detect subtle learning and memory deficits and enhancements in mice that are not found with other fear conditioning methods. This type of fear conditioning is believed to be dependent upon connections between the medial prefrontal cortex and the hippocampus. One current controversy is whether this method is believed to be amygdala-independent. Therefore, other fear conditioning testing is needed to examine amygdala-dependent learning and memory effects, such as through the delay fear conditioning.

In the following experiment we describe a protocol for trace fear conditioning in mice. This type of associative memory includes a trace period that separates the neutral stimulus and the unconditioned stimulus.

マウスにおける恐怖条件付けをトレース

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

ラットにおけるパブロフ付きアルコール探索行動の状況誘発性のリニューアルを観察する手順

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

A Treatment Package without Escape Extinction to Address Food Selectivity

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including autism. Behavior analytic interventions for the treatment of feeding difficulties oftentimes include escape extinction as a primary component of treatment. The use of escape extinction, while effective, may be problematic as it is also associated with the emergence of challenging behavior (e.g., extinction burst). Such challenging behavior may be an acceptable side effect in treatment cases where feeding problems are severe and chronic (e.g., failure to thrive). However, in more acute cases (e.g., selective eating), the negative side effect may be unwarranted and undesired. More recent research on the behavioral treatment of food selectivity has begun to evaluate treatments for feeding difficulties that do not include escape extinction (e.g., demand fading, behavioral momentum), with some success. However, research to date reveals individual differences in responsiveness to such treatments and no clear preferable treatment has emerged. This manuscript describes a multi-component treatment package that includes shaping, sequential presentation and simultaneous presentation, for the treatment of food selectivity in four young children with developmental delays. This treatment package extends the literature on the behavioral treatment for food selectivity and offers a multi-component treatment protocol that may be clinically applicable across a range of treatment scenarios and settings.

Feeding difficulties are a common problem for children with developmental disorders, including autism, and behavioral interventions often include escape extinction. Recent research has begun to evaluate treatments that do not include escape extinction. This manuscript describes a multicomponent treatment package that does not use escape extinction to treat feeding difficulties.

食品選択性に対処するためのエスケープ絶滅せずに治療パッケージ

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including ...

Vagus Nerve Stimulation as a Tool to Induce Plasticity in Pathways Relevant for Extinction Learning

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been maintaining the behavior. There is close correspondence between fear and human anxiety, and therefore studies of extinction learning might provide insight into the biological nature of anxiety-related disorders such as post-traumatic stress disorder, and they might help to develop strategies to treat them. Preclinical research aims to aid extinction learning and to induce targeted plasticity in extinction circuits to consolidate the newly formed memory. Vagus nerve stimulation (VNS) is a powerful approach that provides tight temporal and circuit-specific release of neurotransmitters, resulting in modulation of neuronal networks engaged in an ongoing task. VNS enhances memory consolidation in both rats and humans, and pairing VNS with exposure to conditioned cues enhances the consolidation of extinction learning in rats. Here, we provide a detailed protocol for the preparation of custom-made parts and the surgical procedures required for VNS in rats. Using this protocol we show how VNS can facilitate the extinction of conditioned fear responses in an auditory fear conditioning task. In addition, we provide evidence that VNS modulates synaptic plasticity in the pathway between the infralimbic (IL) medial prefrontal cortex and the basolateral complex of the amygdala (BLA), which is involved in the expression and modulation of extinction memory.

Vagus nerve stimulation (VNS) has emerged as a tool to induce targeted synaptic plasticity in the forebrain to modify a range of behaviors. This protocol describes how to implement VNS to facilitate the consolidation of fear extinction memory.

ツールとしての迷走神経刺激は、絶滅の学習のための関連経路の可塑性を誘導するために

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

ラットにおけるパブロフ馴化アプローチトレーニング

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

Stress-Enhanced Fear Learning, a Robust Rodent Model of Post-Traumatic Stress Disorder

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders such as post-traumatic stress disorder (PTSD). To understand the biological mechanisms of fear dysregulation in PTSD, it is important to start with a valid animal model of the disorder. This protocol describes the methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of PTSD, in both rats and mice. SEFL was developed to recapitulate critical aspects of PTSD, including long-term sensitization of fear learning caused by an acute stressor. SEFL uses aspects of Pavlovian fear conditioning but produces a distinct and robust sensitized fear response far greater than normal conditional fear responses. The trauma procedure involves placing a rodent in a conditioning chamber and administering 15 unsignaled shocks randomly distributed over 90 minutes (for rat experiments; for mouse experiments, 10 unsignaled shocks randomly distributed over 60 minutes are used). On day 2, rodents are placed in a novel conditioning context where they receive a single shock; then, on day 3 they are placed back in the same context as on day 2 and tested for changes in freezing levels. Rodents that previously received the trauma display enhanced levels of freezing on the test day compared to those that received no shocks on the first day. Thus, with this model, a single highly stressful experience (the trauma) produces extreme fear of the stimuli associated with the traumatic event.

Here we describe the detailed methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of post-traumatic stress disorder, in both rats and mice. The model utilizes aspects of Pavlovian fear conditioning and freezing as an index of enhanced fear in rodents.

恐怖のストレス強化学習、心的外傷後ストレス障害の堅牢な齧歯動物モデル

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

ラットにおける渇望のインキュベーションを測定するためエアコンの場所設定プロトコル

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...