著者らは、彼らのサポートのためにメンフィス大学の技術のフェデックス研究所に感謝そのたいと思います。著者らは、メンフィス（デビッド·バトラー、ジャッキー·カーター、ドミニククリーブランド、ヤコブシェーファー）の大学で機械工学部門のシニア·デザイン·プロジェクトグループの学生を認めるしたい、モータ制御のための大学メンフィスの技術工学部門からのダニエル·コーン細胞培養における彼らの助けのため、博士ビンテンさんとCharlean Luellen。この作品は、K01 HL120912（ER）とR01 HL123540（CMW）によってサポートされていました。

1。細胞培養培地の保持のためのウェル壁を有する膜の構築（最終製品については、図1Dを参照してください） <ol><li>コラーゲンIでコーティングされたポリジメチルシロキサン（PDMS）のシートを使用して、外科用メスまたはダイを可撓性膜の輪郭をカットします。 </li><li>ストレージのための60ミリメートルペトリ皿に各膜を配置します。 </li><li>壁の作成： <ol><li> B（硬化剤）をエラストマーにエラストマーAの1の重量比：10にPDMSを混ぜます。 </li><li> 50mlチューブに完全に混合PDMSの5ミリリットルを注ぎます。 </li><li>ハイブリダイゼーションオーブンに水平に未硬化のPDMSを用いて50 mlチューブを置きます。 </li><li>硬化時間の間に8回転で被覆するために、チューブの内壁をローター関数を使用します。 RTで、PDMSは、完全に2日間で硬化させることになります。 </li><li>滅菌細胞培養フード内管からPDMSを削除します。 </li><li>新しいカミソリの刃を使用して、セクションの高さ4ミリメートルにPDMSのシリンダーを分割。 </li><li>膜WAとなるセクションを配置壁が折り目を付けになることを可能にすることのないペトリ皿容器にLLS、。 </li></ol></li><li>ペトリ皿に2を維持しながら、一つの膜の上にPDMSの一方の壁を選択し、中央。 </li><li>接着剤として使用する壁の外側周囲に：（1比10）静かに未硬化PDMSを配置します。それは、液体を保持することがあるため、壁と膜との間のギャップの形成を防止します。 </li><li>各ペトリ皿完成膜を含有し、硬化させる24時間70℃のオーブンでカバーを置きます。 </li></ol>キャリブレーションのためのクランプ変位または放射状の成長（図2）とモータ回転2.相関<ol><li>モータを制御するソフトウェアを起動します。 </li><li>モーターソフトウェアの手動設定を使用してデバイスのクランプを移動さ。 </li><li>距離を測定し、クランプの最小値と最大変位の両方でクランプの対向間のモータカウント位置を記録。 </li><li> Dの変化率（％）を計算しますモーター·カウント（〜0-75kカウント）の関数としてのクランプ間istance。これは、膜上で達成される最大の潜在的なひずみを示します。 </li></ol>マウス肺上皮細胞株のストレッチの3.アプリケーション（MLE12） <ol><li>ウェルあたり可撓性膜上の250万細胞（ステップ1）でのシードMLE12細胞は、2日以内にコンフルエントします。播種密度は、異なる細胞タイプについて変化し得ます。 </li><li>機械式アクチュエータが完全にリラックスした位置にあることを確認します。 <ol><li>細胞培養培地を除去します。 </li><li> 6クランプのそれぞれに2つの穴を開け、1.5ミリメートルに生検パンチを使用して膜のタブ（ 図1Dを参照してください）。穴の径方向の配置は、最初にプリテンション膜経験の量を決定します。何の予備張力を希望されない場合、膜のタブで20.5ミリメートルの半径で穴を開ける。 </li><li>パンチ穴がクランプ内ピンと並んでストレッチャー上の膜の位置を調整します。代わりにトップクランプを配置します。ネジの側面を交互に一つずつを締めます。 </li><li> 1ミリリットルの細胞培養培地を追加します。 </li></ol></li><li>光路を有する膜の中央を中心に顕微鏡ステージ上には置か。 </li><li> （可能な場合）ステージにデバイスを固定するテープや磁石を使用してください。いったん固定、顕微鏡のステージコントローラと機械装置の面内（膜に平行）および垂直（Z方向）を制御します。 </li><li>手動でモータ回転20の位置や速度を制御することにより、製造業者によって提供されるソフトウェアでストレッチを適用します。 </li></ol>ミトコンドリア活性酸素種の4測定（ROS） <ol><li>細胞がコンフルエントになったら、直接細胞にミトコンドリアのスーパーオキシドインジケータ（5μM最終濃度）でRT DMEM 1〜2mlのを追加します。 </li><li> 37℃で10分間インキュベートします。 </li><li>洗浄細胞を穏やかに緩衝液で3回の水浴中で加温し37°C。 </li><li>すぐに直立共焦点顕微鏡下で既に代わりにストレッチャ（ステップ2.2）に柔軟な膜を配置します。 </li><li>フェノールレッドを含まない培地およびHEPES 25mMので1mlのDMEMを追加します。 </li><li> 580分の510 nmの励起/発光フィルターを設定します。 </li><li>画像の複数のフィールドは、15分ごとには、ミトコンドリアのスーパーオキシド産生の所望の時間経過を作成します。 </li><li>撮影された画像から、記録蛍光強度は、蛍光強度を定量化することが可能なソフトウェアを使用して、各時間間隔でヒストグラム。 </li></ol>ストレッチや原子間力顕微鏡（AFM）の5.アプリケーション注：これらの手順は、特定のAFMと光学顕微鏡の組み合わせ（ 図4および物質一覧）のために提供されます。 <ol><li>実験のAFMを準備します。 <ol><li> z方向の最大位置にAFMヘッドの高さを増やします。 </li><li> AFMの足への増量を入れてサンプルAFMカンチレバーコンタクトれるプレーンを持ち上げます。試料とAFMヘッドは機械装置の高さに対応するために持ち上げられる必要があります。 </li></ol></li><li> （利用可能な場合）、光学顕微鏡を準備します。 <ol><li> AFMスキャナプレートを取り外します。所望の目的を削除します。 </li><li>客観的にスペーサーを追加します。スペーサの高さは、客観的かつ具体的なAFMのセットアップに依存しますが、光学イメージングが所望される場合、観察面がストレッチャーとアダプター高さに等しい量だけz方向にシフト（ 図になりますので、それが必要です図5（a））。 AFMは、通常、デバイス上記光路から低倍率のイメージングを提供することに注意してください。 </li><li>バックの位置で所望の目的をマウントします。 AFMに戻すにスキャナを配置します。 </li><li> AFMソフトウェアを起動します。蛍光測定のための光源を含むすべての必要な光源を起動します。 </li><li>その片持ち梁にチップをマウントします目的の測定に適しています。生細胞の弾性率を測定するとき200 PN / nm以下剛性が好ましいです。 </li><li>レーザーの位置を合わせ、デバイスに搭載されたガラスカバースリップ上で製造者の指示に従ってカンチレバー剛性を調整します。 </li></ol></li><li>ステップ1のものが、以下のように変更して膜を準備します。 <ol><li>すぐにストレッチデバイス上に膜を取り付ける前に、高さ約1mmの壁をカット。これは、膜の壁とロードセルとの間に経験する干渉を防止します。 </li><li> 3.2.1-3.2.3に記載されているように機械装置の膜をマウントします。 </li><li>流出の場合にはAFMスキャナへの損傷を防ぐために、細胞培養培地を取り除き。 </li><li>カップルアダプタ（ 図5A）を持つデバイス。スキャナーのアダプタと機械装置を配置します。 </li><li>希望の引張ひずみレベルに膜を伸ばします。 </li></ol></li><li&gt;延伸した細胞のナノインデンテーション。 <ol><li>による流出にAFMスキャナや顕微鏡の損傷を避けるために、細胞上のメディアの限定（&lt;0.5 ml）のボリュームを追加します。 </li><li>膜と片持ち梁に係合します。 </li><li>関心領域をスキャンするために、特定のAFM装置のプロトコルに従ってください。 </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Tschumperlin, D. J., Boudreault, F., Liu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+and+new+opportunities+in+lung+mechanobiology.">Recent advances and new opportunities in lung mechanobiology.</a> J Biomech. 43, 99-107 (2010).</li><li>Waters, C. M., Roan, E., Navajas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comprehensive Physiology. , (2011).</li><li>Majkut, S., Dingal, P. C. D. P., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+Sensitivity+and+Mechanotransduction+during+Heart+Development.">Stress Sensitivity and Mechanotransduction during Heart Development.</a> Current Biology. 24, R495-R501 (2014).</li><li>Hoffman, B. D., Grashoff, C., Schwartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+molecular+processes+mediate+cellular+mechanotransduction.">Dynamic molecular processes mediate cellular mechanotransduction.</a> Nature. 475, 316-323 (2011).</li><li>Wang, N., Butler, J. P., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+across+the+cell-surface+and+through+the+cytoskeleton.">Mechanotransduction across the cell-surface and through the cytoskeleton.</a> Science. 260, 1124-1127 (1993).</li><li>Liu, M., Tanswell, A. K., Post, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+force-induced+signal+transduction+in+lung+cells.">Mechanical force-induced signal transduction in lung cells.</a> Am J Physiol. 277, L667-L683 (1999).</li><li>Janmey, P. A., McCulloch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+mechanics:+integrating+cell+responses+to+mechanical+stimuli.">Cell mechanics: integrating cell responses to mechanical stimuli.</a> Annu Rev Biomed Eng. 9, 1-34 (2007).</li><li>Waters, C. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+stress+failure+in+ventilator-injured+lungs.">Cellular stress failure in ventilator-injured lungs.</a> Am J Respir Crit Care Med. 171, 1328-1342 (2005).</li><li>Roan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+alters+the+mechanical+properties+of+alveolar+epithelial+cells.">Hyperoxia alters the mechanical properties of alveolar epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, L1235-L1241 (2012).</li><li>Gamerdinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+load+and+mechanical+integrity+of+lung+cells+-+Experimental+mechanostimulation+of+epithelial+cell-+and+fibroblast-monolayers.">Mechanical load and mechanical integrity of lung cells - Experimental mechanostimulation of epithelial cell- and fibroblast-monolayers.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 4, 201-209 (2014).</li><li>Hayashi, K., Naiki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+and+remodeling+of+vascular+wall;+biomechanical+response+to+hypertension.">Adaptation and remodeling of vascular wall; biomechanical response to hypertension.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 2, 3-19 (2009).</li><li>Villemure, I., Stokes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+plate+mechanics+and+mechanobiology.+A+survey+of+present+understanding.">Growth plate mechanics and mechanobiology. A survey of present understanding.</a> J Biomech. 42, 1793-1803 (2009).</li><li>Waters, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+system+to+impose+prescribed+homogenous+strains+on+cultured+cells.">A system to impose prescribed homogenous strains on cultured cells.</a> J Appl Physiol (1985). 91, 1600-1610 (2001).</li><li>Gerstmair, A., Fois, G., Innerbichler, S., Dietl, P., Felder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+device+for+simultaneous+live+cell+imaging+during+uni-axial+mechanical+strain+or+compression.">A device for simultaneous live cell imaging during uni-axial mechanical strain or compression.</a> J Appl Physiol (1985). 107, 613-620 (1985).</li><li>Dassow, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+measure+mechanical+properties+of+pulmonary+epithelial+cell+layers.">A method to measure mechanical properties of pulmonary epithelial cell layers.</a> J. Biomed. Mater. Res. Part B Appl. Biomater. 101, 1164-1171 (2013).</li><li>Chapman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+mechanical+strain+increases+reactive+oxygen+species+production+in+pulmonary+epithelial+cells.">Cyclic mechanical strain increases reactive oxygen species production in pulmonary epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 289, L834-L841 (2005).</li><li>Birukov, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+stretch,+reactive+oxygen+species,+and+vascular+remodeling.">Cyclic stretch, reactive oxygen species, and vascular remodeling.</a> Antioxid Redox Signal. 11, 1651-1667 (2009).</li><li>Turrens, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+formation+of+reactive+oxygen+species.">Mitochondrial formation of reactive oxygen species.</a> J Physiol. 552, 335-344 (2003).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes+in+single+mitochondria.">Superoxide flashes in single mitochondria.</a> Cell. 134, 279-290 (2008).</li><li>Pouvreau, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes+in+mouse+skeletal+muscle+are+produced+by+discrete+arrays+of+active+mitochondria+operating+coherently.">Superoxide flashes in mouse skeletal muscle are produced by discrete arrays of active mitochondria operating coherently.</a> PLoS One. 5, (2010).</li><li>Yalcin, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+cytoskeletal+structure+and+mechanics+on+epithelial+cell+injury+during+cyclic+airway+reopening.">Influence of cytoskeletal structure and mechanics on epithelial cell injury during cyclic airway reopening.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297, L881-L891 (2009).</li><li>Jacob, A. M., Gaver, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atelectrauma+disrupts+pulmonary+epithelial+barrier+integrity+and+alters+the+distribution+of+tight+junction+proteins+ZO-1+and+claudin+4.">Atelectrauma disrupts pulmonary epithelial barrier integrity and alters the distribution of tight junction proteins ZO-1 and claudin 4.</a> J Appl Physiol. 113, 1377-1387 (2012).</li><li>DiPaolo, B. C., Lenormand, G., Fredberg, J. J., Margulies, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch+magnitude+and+frequency-dependent+actin+cytoskeleton+remodeling+in+alveolar+epithelia.">Stretch magnitude and frequency-dependent actin cytoskeleton remodeling in alveolar epithelia.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 299, C345-C353 (2010).</li></ol>

著者は、彼らが競合する金融利害関係がないことを宣言します。

メカニカルストレッチ中に生細胞イメージングのためのユニークなデバイスを開発しました。このデバイスは、肺上皮細胞のメカノを研究するためのプロトコルで使用されました。予備研究では、単一の保持されたストレッチは、気管支上皮細胞におけるミトコンドリアのスーパーオキシド産生を刺激することが見出されました。また、機械的な歪みのレベルの増加は、肺胞上皮細胞の単層?...

細胞は、多くの組織における機械的負荷にさらされ、この機械的刺激は、遺伝子発現、増殖因子の放出、サイトカイン、または細胞外マトリックスと細胞骨格のリモデリング1-4のパターンの変化を促進することが示されています。このような機械的刺激から形質細胞内シグナルは、メカノ5-7のプロセスを経て起こります。呼吸器系では、メカノの一つの結果は、活性酸素種（ROS）の環状の引張歪みの存在下での肺上皮細胞における8,9およびプロ炎症性サイトカイン10の増加です。強力な証拠も過度の引張歪みがセル11-14の生化学的応答に加えて、肺胞上皮の損傷を導くにつながることを示唆しています。ここでの焦点は、機械的変形に肺細胞の応答に主であるが、メカノによって誘発される経路は、BASにおいて重要な役割を果たし血管緊張15の調節および成長板16の開発など、人体の多くの組織のIC機能。 メカノへの関心の高まりは、培養細胞や組織への生理学的に関連する機械的負荷の適用のための多数のデバイスの開発をもたらしました。具体的には、組織が ​​経験する機械的負荷の一般的な形態である引っ張り歪を適用するデバイスは、人気11,17-19あります。しかし、利用可能なデバイスの多くは、いずれかの組織工学アプリケーションのためのバイオリアクターとして設計やストレッチでリアルタイムイメージングに資するものではありません。このように、メカノの経路の調査を容易にするために、張力の細胞及び組織を視覚化することができるツールおよび方法を開発する必要があります。 ここで、面内の機械的延伸装置が設計され、プロトコルは、Mを適用するために開発されましたultiple組織への株の形態および細胞リアルタイム（ 図1A-D）における生化学的および機械的応答のイメージングを可能にします。デバイスは、可撓性膜をつかみ、約20％（ 図1B）に面内、ラジアル膨満アップを適用するために円周方向に配置された6つの等間隔のクランプを使用しています。モータ（ 図1C）がインキュベータの外 ​​部に配置され、モータ供給業者によって提供される独自のソフトウェアによって制御される作動装置は、長期間の細胞培養インキュベーターに置くことができます。モータは、緊張と弛緩中に均一6ストレッ​​チャクランプを駆動する、内部カムを回転させるリニアドライバに接続されています。 機械装置に加えて、カスタマイズされた柔軟な膜は、機械的なシステムで使用される市販の細胞培養準備膜から作成されました。およその直径そして円形壁（28ミリメートル）を作製し、細胞にのみ十分に記載ひずみプロフィールのこの領域中で培養することができるように、可撓性膜上に付着させました。作動装置内のこれらの膜の配置は、可撓性膜の中心部に均一で等方性の歪みを提供するかどうかを決定するために、有限要素解析は、市販のソフトウェア（ 図1E-F）を用いて行きました。フレキシブル膜は、対称境界条件でモデル化し、メッシュのすべての四角形要素を利用しました。 図1Fに示す最大主ひずみの等高線図に見られる同心リングは、歪みの等方性の分布を示しています。 膜によって受ける歪みがローディング（ 図2）を介してマーキングの画像を記録することによって測定した。 図2Dは ​​、半径方向及び軸方向に測定された平均膜株がほぼ直線であったことを示します適用モータに対して20％の最大線形歪みにカウントアップします。バック休止位置へ後退時に測定されたものと比較して膨張時に測定された歪みのレベルの間に有意差はなかったです。次に、カスタム可撓性膜上で培養したヒト気管支上皮細胞（16HBE）及びそれらの核の変位を測定しました。全細胞の変位は、デジタルマイクロスコープを用いて記録位相コントラスト画像を用いて測定したのに対し16HBE細胞の蛍光標識（DAPI）核は、共焦点顕微鏡下で20X対物レンズを用いて画像化しました。 図3に見られるように20％の線形歪み〜まで、核の変位によって測定ひずみは、膜上のマーキングの変位によって測定されたものと同様でした。これは、膜に加わる歪みを接着細胞に伝達されたことを確認します。従来の顕微鏡のカスタムデバイスの使用を記述プロトコルおよび原子間力microscopeは、以下のステップで提供されます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>SmartMotor NEMA 34: 3400 Series</td>
			<td>MOOG Animatics</td>
			<td>SM3416D</td>
			<td>Integrated motor, controller, amplifier, encoder and communications bus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexcell Membrane (Collagen I coated)</td>
			<td>Flexcell International Corp</td>
			<td>SM2-1010C</td>
			<td>3.5x5.25x0.020&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184&#160;</td>
			<td>Dow Corning Corporation</td>
			<td></td>
			<td>10:1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1399</td>
			<td>DAPI stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoSOX</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M36008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tiron</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D7389&#160;</td>
			<td>mitochondrial superoxide label</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>superoxide inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-443-19</td>
			<td>Any centriguge tube can be used to create an area for imaging.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization oven</td>
			<td>Bellco Glass</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLE12 Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2110</td>
			<td>Mouse Lung Epithelial Cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16HBE cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2741</td>
			<td>Human Bronchial Epithelial Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM Indentation Experiments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cantilever Beams for Nano-indentation</td>
			<td>Budget Sensors</td>
			<td>Si-Ni30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM&#160;</td>
			<td>Asylum Research</td>
			<td>MFP3D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX-71</td>
			<td>Inverted microscope with 20X and 40X objectives.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM Leg Extenders</td>
			<td>Asylum Research</td>
			<td>Not available</td>
			<td>AFM microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finite Element Analyses</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABAQUS</td>
			<td>Simulia</td>
			<td>6.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital microscope</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EVOS XL Core</td>
			<td>Initially a self standing company, now owned by Life Technologies.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 710</td>
			<td>2-photon upright microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell imaging during mechanical stretch

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in their capability for measuring responses in real time in live cells or viable tissue. A protocol was developed with the use of a cell actuator to distend live cells grown on or tissues attached to an elastic substrate while imaging with confocal and atomic force microscopy (AFM). Preliminary studies show that tonic stretching of human bronchial epithelial cells caused a significant increase in the production of mitochondrial superoxide. Moreover, using this protocol, alveolar epithelial cells were stretched and imaged, which showed direct damage to the epithelial cells by overdistention simulating one form of lung injury in vitro. A protocol to conduct AFM nano-indentation on stretched cells is also provided.

活性酸素種と変形 以前の研究は、環状のストレッチ21に応答して、気道及び肺胞上皮細胞における活性酸素種（ROS）の増加を示しました。活性酸素種は、分子及び脂質、タンパク質、多糖、および核酸22-24に対して高い反応性を有する分子酸素由来のフリーラジカルを含みます。 ROSは、一般的な細胞内のイオンチャネルの機能を調節するための信?...

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Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

A novel imaging protocol was developed using a custom motor-driven mechanical actuator to allow the measurement of real time responses to mechanical strain in live cells. Relevant to mechanobiology, the system can apply strains up to 20% while allowing near real-time imaging with confocal or atomic force microscopy.

メカニカルストレッチ中のライブセルイメージング

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

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Research

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Bioengineering

10.3K ビュー.  University of Tennessee Health Science Center. A novel imaging protocol was developed using a custom motor-driven mechanical actuator to allow the measurement of real time responses to mechanical strain in live cells. Relevant to mechanobiology, the system can apply strains up to 20% while allowing near real-time imaging with confocal or atomic force microscopy. 