著者らは、分子遺伝学のコア（眼科およびVisual科学科）の医学のセントルイス校のワシントン大学でマウス遺伝学コアの形態とイメージングコアのスタッフに、感謝します。作者は、携帯用のマクドネルセンター分子神経生物学、神経疾患のためのホープセンターから小規模助成プログラムでサポートされている、国立眼研究所（DHへ＃R01EY022632）、国立眼研究所センターコアグラント（＃1 P30EY002687）と眼科およびVisual科学科に失明を防止するための研究から無制限の助成金。

倫理声明：動物を対象とする手順は、セントルイスにあるワシントン大学の施設内動物管理使用委員会（IACUC）によって承認されました。 1.マウスの繁殖とジェノタイピング<ol><li> （PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2）19,20のTgを生成するためのTg（CAG-LacZを/ EGFP-KASH2）Tgを有するマウス（PCP2-CRE）マウスを飼育。注：このプロトコルの残りは小脳内のプルキンエ細胞にEGFP-KASH2発現を制限するためのTg（PCP2-CRE）マウス系統の使用に焦点を当てているが、同様の手順は、他のTg（CRE）マウスで追跡することができます（ 図2A）。 </li><li>以前に19を説明したように、両方のEGFPとのCre導入遺伝子を保有する子犬を識別するために、遺伝子型判定を行います。 </li></ol>解剖および組織収集のための材料の作製<ol><li> -20℃で30％のPBS中のスクロース（1×PBS、30gのスクロース/ 100ミリリットル）と店の100ミリリットルを準備します。組織Hの日transcardial灌流35 mlシリンジにarvesting、解凍およびショ糖液の負荷〜30〜35ミリリットル。 </li><li> PBS中の4％PFA（10ミリリットル、16％パラホルムアルデヒド、30 mlのPBS）の40ミリリットルを準備します。 transcardial灌流35 mlシリンジにロード〜30〜35ミリリットルの4％PFA。 </li><li>組織切開のためにPBS 10mlで10cmの組織培養プレートを埋めます。 </li><li> 16 mg / mlのケタミンおよび3 mg / mlのキシラジンから成るケタミン/キシラジンのカクテルを用意します。 </li><li>解剖のための70％エタノール溶液を調製します。 </li></ol> 3.解剖と組織収集<ol><li> 1mlシリンジを使用して、体重25グラムあたりのケタミン/キシラジンのカクテルの500μLを注入し、15分〜を待ちます。あるいは、目的の生物学的システムに適した別の制度承認鎮静メソッドを使用します。 </li><li>鎮静時に、そっとの背側と発泡スチロールのトレイ上のすべての足をピン、疼痛応答の欠如を確認するために、後部足を挟まマウスを下に向けて。 </li><li> 70％エタノールで腹部をスプレーし、心臓へのアクセスを得るために胸郭の上に下腹部から切開を行います。 </li><li>心臓の右心房に小さな切開を行い、心臓の左心室に30％ショ糖溶液を含む注射器を挿入します。 </li><li> 〜2〜5ミリリットルあたり分の速度で溶液を灌流。ときに空のシリンジを除去し、4％PFA溶液で繰り返します。 </li><li>発泡スチロールのトレイからマウスの固定を解除し、脳にアクセスするために首を切ります。 </li><li>ピンセットやハサミを用いて動物の頭の周りの皮膚を削除します。針で頭蓋骨の後部の穴を突く、慎重にはさみや解剖鉗子で頭蓋骨を削除します。 </li><li>脳は明らかにアクセス可能になると、小脳を除去し、PBS中でそれを置くために鉗子を使用しています。メスで矢状面で小脳を二等分し、4℃で一晩、30％スクロース溶液に移します。注：準備へパラフィン切片は、組織が埋め込み、切片の前に4％PFA中で4℃で一晩小脳を修正しています。 </li></ol> 4.組織処理とセクショニング<ol><li>ドライアイスのスラリーと2-メチルブタンを準備します。浴の温度を5分間平衡化させます。 </li><li> OCT化合物でcryomoldを記入し、金型に二分小脳の半分を置きます。 </li><li>解剖顕微鏡とピンセット位置のペア（小脳の正中線に近い）二等分面が上を向いているように、小脳を使用。 </li><li> OCT化合物は、組織標本の周りの白色の固体マトリックスを形成されるまで5分間ドライアイススラリーにcryomoldを転送します。注：必要に応じて凍結標本は現在、-20℃で保存することができます。 </li><li>組織切片を収集するために前処理されたポリリジンスライドにラベルを付け、Cereの15ミクロン切片を収集するために、製造業者の指示に従ってクライオスタットを準備bellum。セクションを収集するには、慎重にスライドのポリリジンコーティングした側を10月セクションにお問い合わせください。セクションの向きを維持するために、このステップの間にスライドを回転させないでください。 </li><li> -20℃で保存組織切片染色およびイメージングに進むまで。 </li></ol> 5.染色および小脳切片のイメージング<ol><li>組織染色の前に、以下のソリューションを準備します。 PBSの〜50ミリリットル 〜PBS中の4％PFA 5〜10mlの 〜PBS中0.5％トリトンX-100、10％ロバ血清の10-20 mlの</li><li>小脳のセクションを解凍します。重要なことは、EGFPの退色を防止するために、連続した強い光の任意のソースへの露出を最小限に抑えることができます。 </li><li>疎水性バリアペンを使用して、組織切片の周囲に四角形を描画します。 </li><li> 5分間、4％PFAでセクションをポスト修正。疎水性バリア（通常〜500μL）で区切ら領域全体をカバーするのに十分な液体を使用してください。真空またはピペットを使用して、再組織切片を乱さないように特に注意しながら固定液を移動します。 </li><li>ピペットを用いて、やさしく組織切片を乱すことなく、スライド上のPBSを適用します。 5分後、慎重に液体を除去するために真空またはピペットを使用しています。 PBSを繰り返して合計3回すすいでください。 </li><li>ピペットを使用して、慎重にPBS中0.5％トリトンX-100、10％ロバ血清中（溶液の900μLあたり3μlのカルビンジンおよび/またはNesprin2抗体）は、適切な一次抗体の希釈物を適用します。暗所で室温で1時間インキュベートします。 注：EGFP-KASH2は、凍結切片上の直接蛍光顕微鏡によって見えるようになり、それは抗EGFP抗体を利用する必要はありません。パラフィン切片を調製している場合は、EGFP-KASH2のイメージングは​​、抗EGFP抗体を用いた免疫検出を必要とします。 </li><li>抗体溶液を除去し、PBSで3回すすいでください。 </li><li> 、0.5％トリトンX-100でアレクサ・フルーア二次抗体の希釈液千：1を準備します10％ロバ血清、PBS中、暗所で保管してください。 </li><li>静かに最後のPBSリンスを削除し、暗所で1時間、二次抗体の希釈を適用します。 </li><li>二次抗体溶液を除去し、セクションを3回洗浄し、洗浄してください。必要であれば、最初のPBS適用中に、このようなDAPI​​などの核染色、（〜300nmの）を適用します。 </li><li>完全組織と組織切片上でメディアをマウントする場所〜5-7μlの周りからのPBS溶液を除去。組織切片の上にカバーガラスを置き、暗所で室温〜15〜30分間のために確保さ。 </li><li> EGFPおよびステップ5.8 / 5.9で使用される二次抗体のための適切な任意の他の波長を可視化するために、適切なフィルターを備えた蛍光顕微鏡を使用してください。小脳切片では、EGFP-KASH2核リムを表示するには、20Xの対物レンズを使用しています。 </li></ol>

<ol>
	<li>Hutchison, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamins:+building+blocks+or+regulators+of+gene+expression?+Nature+reviews.">Lamins: building blocks or regulators of gene expression? Nature reviews.</a> Molecular cell biology. 3, 848-858 (2002).</li><li>Stuurman, N., Heins, S., Aebi, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+lamins:+their+structure,+assembly,+and+interactions.">Nuclear lamins: their structure, assembly, and interactions.</a> Journal of structural biology. 122, 42-66 (1998).</li><li>Crisp, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupling+of+the+nucleus+and+cytoplasm:+role+of+the+LINC+complex.">Coupling of the nucleus and cytoplasm: role of the LINC complex.</a> The Journal of cell biology. 172, 41-53 (2006).</li><li>Haque, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUN1+interacts+with+nuclear+lamin+A+and+cytoplasmic+nesprins+to+provide+a+physical+connection+between+the+nuclear+lamina+and+the+cytoskeleton.">SUN1 interacts with nuclear lamin A and cytoplasmic nesprins to provide a physical connection between the nuclear lamina and the cytoskeleton.</a> Molecular and cellular biology. 26, 3738-3751 (2006).</li><li>Hodzic, D. M., Yeater, D. B., Bengtsson, L., Otto, H., Stahl, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sun2+is+a+novel+mammalian+inner+nuclear+membrane+protein.">Sun2 is a novel mammalian inner nuclear membrane protein.</a> The Journal of biological chemistry. 279, 25805-25812 (2004).</li><li>Starr, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KASH+and+SUN+proteins.">KASH and SUN proteins.</a> Current biology : CB. 21, R414-R415 (2011).</li><li>Mellad, J. A., Warren, D. T., Shanahan, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nesprins+LINC+the+nucleus+and+cytoskeleton.">Nesprins LINC the nucleus and cytoskeleton.</a> Current opinion in cell biology. 23, 47-54 (2011).</li><li>Fridolfsson, H. N., Starr, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin-1+and+dynein+at+the+nuclear+envelope+mediate+the+bidirectional+migrations+of+nuclei.">Kinesin-1 and dynein at the nuclear envelope mediate the bidirectional migrations of nuclei.</a> The Journal of cell biology. 191, 115-128 (2010).</li><li>Meyerzon, M., Fridolfsson, H. N., Ly, N., McNally, F. J., Starr, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UNC-83+is+a+nuclear-specific+cargo+adaptor+for+kinesin-1-mediated+nuclear+migration.">UNC-83 is a nuclear-specific cargo adaptor for kinesin-1-mediated nuclear migration.</a> Development. 136, 2725-2733 (2009).</li><li>Padmakumar, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enaptin,+a+giant+actin-binding+protein,+is+an+element+of+the+nuclear+membrane+and+the+actin+cytoskeleton.">Enaptin, a giant actin-binding protein, is an element of the nuclear membrane and the actin cytoskeleton.</a> Experimental cell research. 295, 330-339 (2004).</li><li>Roux, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nesprin+4+is+an+outer+nuclear+membrane+protein+that+can+induce+kinesin-mediated+cell+polarization.">Nesprin 4 is an outer nuclear membrane protein that can induce kinesin-mediated cell polarization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 2194-2199 (2009).</li><li>Wilhelmsen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+novel+outer+nuclear+membrane+protein,+associates+with+the+cytoskeletal+linker+protein+plectin.">a novel outer nuclear membrane protein, associates with the cytoskeletal linker protein plectin.</a> The Journal of cell biology. 171, 799-810 (2005).</li><li>Wilson, M. H., Holzbaur, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nesprins+anchor+kinesin-1+motors+to+the+nucleus+to+drive+nuclear+distribution+in+muscle+cells.">Nesprins anchor kinesin-1 motors to the nucleus to drive nuclear distribution in muscle cells.</a> Development. 142, 218-228 (2015).</li><li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KASH+protein+Syne-2/Nesprin-2+and+SUN+proteins+SUN1/2+mediate+nuclear+migration+during+mammalian+retinal+development.">KASH protein Syne-2/Nesprin-2 and SUN proteins SUN1/2 mediate nuclear migration during mammalian retinal development.</a> Human molecular genetics. 20, 1061-1073 (2011).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syne-1+and+Syne-2+play+crucial+roles+in+myonuclear+anchorage+and+motor+neuron+innervation.">Syne-1 and Syne-2 play crucial roles in myonuclear anchorage and motor neuron innervation.</a> Development. 134, 901-908 (2007).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nesprin+1+is+critical+for+nuclear+positioning+and+anchorage.">Nesprin 1 is critical for nuclear positioning and anchorage.</a> Human molecular genetics. 19, 329-341 (2010).</li><li>Stewart-Hutchinson, P. J., Hale, C. M., Wirtz, D., Hodzic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+requirements+for+the+assembly+of+LINC+complexes+and+their+function+in+cellular+mechanical+stiffness.">Structural requirements for the assembly of LINC complexes and their function in cellular mechanical stiffness.</a> Experimental cell research. 314, 1892-1905 (2008).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUN1/2+and+Syne/Nesprin-1/2+complexes+connect+centrosome+to+the+nucleus+during+neurogenesis+and+neuronal+migration+in+mice.">SUN1/2 and Syne/Nesprin-1/2 complexes connect centrosome to the nucleus during neurogenesis and neuronal migration in mice.</a> Neuron. 64, 173-187 (2009).</li><li>Razafsky, D., Hodzic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+and+tissue-specific+disruption+of+LINC+complexes+in+vivo.">Temporal and tissue-specific disruption of LINC complexes in vivo.</a> Genesis. 52, 359-365 (2014).</li><li>Razafsky, D., Hodzic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+variant+of+Nesprin1+giant+devoid+of+KASH+domain+underlies+the+molecular+etiology+of+autosomal+recessive+cerebellar+ataxia+type+I.">A variant of Nesprin1 giant devoid of KASH domain underlies the molecular etiology of autosomal recessive cerebellar ataxia type I.</a> Neurobiology of disease. 78, 57-67 (2015).</li><li>Razafsky, D., Blecher, N., Markov, A., Stewart-Hutchinson, P. J., Hodzic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LINC+complexes+mediate+the+positioning+of+cone+photoreceptor+nuclei+in+mouse+retina.">LINC complexes mediate the positioning of cone photoreceptor nuclei in mouse retina.</a> PloS one. 7, e47180 (2012).</li><li>Razafsky, D. S., Ward, C. L., Kolb, T., Hodzic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+linkers+of+the+nucleoskeleton+to+the+cytoskeleton+during+mouse+postnatal+retinogenesis.">Developmental regulation of linkers of the nucleoskeleton to the cytoskeleton during mouse postnatal retinogenesis.</a> Nucleus. 4, 399-409 (2013).</li></ol>

著者らは、開示することは何もありません。

正常のTg（CAG-のLacZ / EGFP-KASH2）モデルを用いてインビボで LINC複合体の役割を研究するための最も重要なステップは、適切なのCreマウス系統を同定することです。 Creが同様の経路に関与する他の細胞型で活性であれば確かに、それは結果の解釈を複雑にすることができます。小脳（ 図2B）の分子および顆粒細胞層にここに示されるように、したがって、それは、近隣...

核膜（NE）は、細胞質から核質を分離します。これは、核膜孔に接続し、内側と外側核膜（INMとそれぞれONM）で構成されています。両方の膜で区切らルーメンは核周辺領域（PNS）と呼ばれています。 ONMは、粗面小胞体（ER）を拡張したものであり、INMは核ラミナ、核A-で表さタイプ-Vの中間フィラメントおよびB型ラミン1,2の網目構造に準拠しています。細胞核の骨格と細胞骨格（LINC）複合体のリンカーは、物理的に細胞骨格フィラメントと分子モーター（ 図1A）に核の内部を接続するための全体の核エンベロープにまたがる高分子集合体です。日（SAD1 / Unc84）タンパク質とNesprins（核膜SPectRINS）：彼らは、NEの一体型膜貫通型タンパク質の2家族を特徴づける進化的に保存されたモチーフ間の相互作用で構成されています。哺乳類では、Sun1とSun2 ARN末端 ​​核質地域INMの電子の膜貫通タンパク質は、A及びB型ラミン3-5と直接対話します。 INMの反対側には、PNS内、日タンパク質は、〜150のC末端アミノ酸の進化的に保存されたストレッチを抱い日ドメインと呼ばれます。日ドメインは、進化的に保存さKASH（Klarsicht / ANC-1、あれから相同性）ドメイン、Nesprinsの分子署名と直接対話。 KASHドメインは、膜貫通ドメイン6に続いて、PNS内に突出〜30のC末端アミノ酸のストレッチで構成されています。少なくとも4つの異なるNesprin遺伝子（Nesprin1-4）は、NE 7に局在KASH含有タンパク質をコードします。サイズ〜50kDa（Nesprin4）から驚くほどの千キロダルトン（Nesprin1巨人）に変わるNesprins、の細胞質領域は、複数のスペクトリンは、アクチン、プレクチンと分子モーター8のような細胞骨格成分との相互作用を可能にするだけでなく、特定のモチーフを繰り返し含ま13。 &lt;脊椎動物と無脊椎動物のpクラス= &quot;jove_content&quot;&gt;研究は、ラミン/日/ Nesprin /分子モーターは、進化的に保存された「軸」の核移行と足場を制御を構成していることが示されています。 LINC複雑なコンポーネントのいくつかのノックアウト（KO）マウスモデルが記載され、哺乳類の発生9,14,15中のNEで太陽とNesprinタンパク質の役割を理解するためのフレームワークを提供することに尽力したされています。最も顕著なのが、本これらのモデルには、いくつかの重大な欠点、：細胞非自律的効果による表現型の解釈に1）困難、KASHレスNesprinは16アイソフォーム対KASH含有の表現型の貢献を区別するのに2）難易度、3）多数の細胞タイプで、NEで太陽とNesprinタンパク質の機能的冗長性は、両方のKASHドメインを欠損したマウス17内のすべてのSUN-KASH相互作用およびマウスの4）周産期致死性を不活性化するために、複雑な繁殖スキームが必要ですNesprins1と2は、大人の表現型18の分析を排除します。 このプロトコルは、このように上記で概説した欠点の多くをバイパスして、細胞自律的かつ発生的に調節方法で、 生体内でのすべてのSUN-KASH相互作用を破壊するように設計された新規マウスモデルを記述しています。これのCre / LOXベースのマウスモデルは、2つの重要な概念に依存している：1）任意の公知Nesprinタンパク質のKASHドメインが細胞培養系内のNEにEGFPを標的とし、2）SUNドメインがの過剰発現、従って、KASHドメインと無差別に相互作用するのに十分です任意のKASHドメインは、すべての内因性日ドメインを飽和させ、ドミナントネガティブな方法17（ 図1B）にLINC複合体を不活性化します。このプロトコルは、小脳プルキンエ細胞内のすべてのSUN-KASHの相互作用の破壊を確認するために使用される組織の収穫と処理手順について説明します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14200-075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde Solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT Compound</td>
			<td>Tissue-Tek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesion Slides</td>
			<td>StatLab</td>
			<td>M1000W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmuEdge Pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Calbindin Antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C9848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-EGFP Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab13970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Nesprin2 Antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Previously described in Ref. 21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Mounting Media</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-methyl butane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>O3551</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

validation of a mouse model to disrupt linc complexes in a cell-specific manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

このプロトコルは、Tgは（PCP2-CRE）マウスを用いた小脳プルキンエ細胞にEGFP-KASH2発現を制限するためのTg（CAG-LacZを/ EGFP-KASH2）マウスモデルの有用性を示しています。 Tgは（PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2）の子孫では、LacZを/ V5オープンリーディングフレームは、それによって特異的にプルキンエ細胞（ 図2A）を対象とし、EGFP-KASH2の発現を導くCreリコンビナーゼによってP6で切除され?...

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Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

細胞特異的にLINC複合体を破壊するマウスモデルの検証

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

validation-mouse-model-to-disrupt-linc-complexes-cell-specific

Research

JoVE Journal

Biology

7.3K ビュー.  Washington University in St. Louis School of Medicine. Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.