我々はIvan Laermans、Rosita Kinart、Ann Lissens（外科技術センター、KU Leuven、Leuven、Belgium）に感謝します。 Jo VerbinnenおよびKristof Reyniers（ベルサールの解剖学、医学部、KU Leuven、Leuven、ベルギー）は、実験中に技術的支援を提供した。データと原稿管理の助けを借りて、Leen Mortierに感謝します。プロトタイプのメッシュを製造し、殺菌し、無条件で研究に寄付するFEG Textiltechnikenに感謝します。

この実験の倫理的承認は、KUルーベンの動物実験倫理委員会（P065 / 2013）から得られたものです。動物は、現在の動物福祉に関する全国ガイドラインに従って治療された。 材料と実験動物<ol><li> 手術準備 <ol><li>外科手術用劇場では、滅菌ドレープを備えたテーブルを覆い、1つの滅菌湾曲したトロカール（ 図1 、パネルA）、滅菌手術器具、縫合糸、および無菌ガーゼを準備する。実験にフォローアップが含まれている場合は、無菌状態で全手術を実施してください。手術中に使用できるように、テーブル上のすべての器具を準備します。 </li><li>無菌長方形インプラントおよび/または固定アームを有するインプラントを無菌パッケージから取り出し、無菌ドレープで覆われたテーブル上に置く（ 図1B 、 CおよびD ）。 </li></ol></li></ol> 図1：トロカールとインプラント （ A ）トロカールの模式図。 （ B ）H型のポリフッ化ビニリデン（PVDF）インプラント、中央部の詳細（パネルC ）。その形状は、経膣膣脱毛修復のために現在利用可能な4つの腕のメッシュによって鼓舞された。長方形の本体（30×40mm 2 ）は、4本の伸長アーム（150×10mm 2 ）によって側方に伸長される。アームの寸法は、以前の解剖学的研究に基づいて、関連するサスペンション構造を穿孔するのに十分長いように設計されている17 。 （ D ）長方形インプラント（30×40mm 2 ）。両方のインプラントはポリフッ化ビニリデンでできていた。繊維特性および特性を表1に示す 。 <ol start="2"><li> 実験動物（Ewe、45~60kg） <ol><li>手術手技の30分前に15mg / mLの硫酸アトロピンおよび1mL / 50kgのキシラジンHClの1mLを筋肉内（筋肉内）に前投与する。 </li><li> 30分後、前投薬によって羊が眠気となり、眠気になることを確認します。 </li><li>静脈内カテーテルを頸静脈に挿入し、0.075mL / kgのケタミン100mg / mL HClを投与する。痛みを伴う刺激に対する反応の欠如を観察することにより、深い麻酔を確認する。 </li><li>動物を手術台に移動し、挿管によって気道を確保する。 5L /分の酸素で2.5％のイソフルランで麻酔を維持する。 </li><li>静脈ラインを頸静脈に挿入し、150mL / hの流速で生理食塩水500mLを供給する。 </li><li>局所プロトコールに従って、予防的抗生物質（アモキシシリンクラブラン酸塩、7mg / kg）および術後鎮痛剤（ブプレノルフィンおよびクロロクレゾール、1mL）または同等物を投与する。 </li><li>動物を点灯させる断熱テーブルの端に断熱的な位置を決め、ヒープを過屈曲状態にして肢をロープを用いて固定する（ 図2 、パネルA）。 </li><li>経膣的に膀胱および直腸を押すことによって、手動で空にする。 </li><li>会陰部、大腿部の内側部分、および尾部のひだを剃り、7.5％のポリビドンで消毒する（ 図2 、パネルBおよびC）。 </li></ol></li></ol><img alt="図2" src="/files/ftp_upload/55706/55706fig2.jpg" /> 図2：動物の手術。 （ A ）羊は仰臥位に置かれ、下肢を固定することによって股関節が過度に屈曲される。 （ B ）トロカールの挿入のための外部入口点は、腹側（空の矢印）にあり、側方の尾のひだ（全矢印）上にある。 （ C ）腹側挿入点の位置;中央の破線は、動物の中緯度面。 （ D ）解剖された直腸膣中隔。 （ E ）大腿内側、閉鎖孔、および膣腔内の筋肉を通して腹側トロカールを挿入する。穿刺トロカールの軌道は指で制御されます。 （ FおよびG ）トロカールが所定の位置に置かれると、ワイヤースリング（開いた矢印）が前進し、膣メッシュの腕で装填される。 （ H ）腹側（全矢印）および背側（空の矢印）の腕の最終位置。 （ I ）中央部分は、膣壁と直腸外膜の間に緊張のない状態で配置される。 <ol start="10" style="margin-left: 40px;"><li>無菌状態で手術のための人員を準備する。外科用キャップと口マスクを着用し、手術のために手を洗い、手術用ガウンと無菌手袋を着用する。 </li><li>動物を滅菌ドレープで覆い、生殖器の上に開口部を作ります中断。 </li></ol> 2.外科手術<ol><li> 直腸膣中隔の調製 <ol><li> Allisの鉗子を使用して、hymenealリングに頭蓋骨3cm背部の膣壁をつかむ。 </li><li> 10mLの生理食塩水を入れ、22Gの針を装着したシリンジを取る。それを膣上皮（約3〜4mmの深さ）および直腸膣中隔に挿入し、1.5cmの頭蓋骨を腎臓リングに挿入する。 </li><li>直腸膣中隔11に生理食塩水を注入することにより、「アクア解剖」を行う。 </li><li> Allisの鉗子（ステップ2.1.1）の尾を始め、メスを使用してhymenealリングで終わる、膣上皮上の3センチメートルの正中線の切開を行います。この切開を通して膣 - 膣のスペースに入る。 </li><li>会陰の上に自己保持型リトラクター（ 表の表を参照）を置​​き、4つの鋭いステーフックを膣切開部に置き、開いたままにします。 </&gt; <li>あなたの指で、鈍的に膣の筋膜を膣壁から側方に骨盤の側壁に向かって鋭く切開し、頭蓋骨上で盲嚢の尾側の面まで鋭く切開する。メッシュの30 x 40 mm 2中央部分に適切なスペースを作成します（ 図2 、パネルD）。 </li><li>必要に応じて、止血鉗子または十字止血結紮で止血を行う。 注：小さなブリーダーは、止血鉗子で締め付けることができます。これにより血管が圧壊され、自然凝固カスケードが開始される。より強い出血のために、出血血管を鉗子で把握し、十字結紮で十字結紮糸を固定する。この時点で、長方形のインプラントを挿入する（ステップ2.2）か、アンカリングアームをインプラントに挿入するために切開を続けることができる（ステップ2.3）。 </li></ol></li><li> フラットメッシュ挿入 <ol><li>膣切開部に膣リトラクターを挿入して、解剖された領域の頭蓋部分。 </li><li>切開直腸膣腔の最も頭蓋側の側面の左右に単純な中断3/0ポリプロピレン縫合糸を用いて、インプラントの左右頭頂部を縫合する。残留縫合材料を切断する。縫合糸を膣内腔から遠ざける（ すなわち、膣壁を貫通させない）。 注：インプラントは、常に、直腸 - 膣中隔を構成する結合組織に縫合される。膣内に縫合材料が見えない場合、膣壁は貫通されない。 </li><li>インプラントの頭蓋骨様相に沿って途中でさらに1つの追加の単純な中断縫合糸を追加します。 </li><li>インプラントの中間の縁を包囲している3/0ポリプロピレンで周りの結合組織に縫合します。可能であれば、インプラントは平らな状態に保ち、テンションフリーにしてください</li><li>左右のシンプルな中断3/0ポリプロピレン縫合糸で左右の尾側隅を縫合する直腸膣腔の最も尾側の側面の側面。 </li><li>インプラントの尾側の面に沿って途中で途切れた縫合糸を追加してください。 </li><li>実行中の3/0ポリグラクチン縫合糸で膣切開部を閉じる。 </li></ol></li><li> インプラントの腕への挿入と固定（トロカールガイド技術）。 <ol><li>ステップ2.1で作成した直腸 - 膣腔の解剖を頭蓋 - 腹側に継続して、容易に触診することができる閉鎖孔の内側面に到達させる。 </li><li>嚢胞性靱帯および尾側に位置する尾骨筋の尾側に達するように、尾側 - 側方に空間を解剖する。 </li><li>いいえ。 24枚の刃で外陰部に1cm幅の切開部を4つ作り、皮膚と表在筋肉筋膜を切開する（ 図2 、パネルBおよびC）。 </li><li>太ももの内側の部分に2つの「腹部」切開部を形成し、坐骨弓（ すなわち 、交配の下縁）および正中線から3cmの側方（ 図2 、パネルC）。 </li><li>簡単に触診することができる塊茎のischiadicum（ 図2 、パネルB）に内側の2cm、尾のひだの挿入のレベルで2つの &quot;背面&quot;切開を行います。 </li><li>湾曲したトロカールを腹側切開部の1つに配置する（ 図2 、パネルE）。 </li><li>トロカールを内転筋、外部閉鎖具、および閉鎖孔の内側孔に通す。 </li><li>膣切開を通して挿入された指で套管針の進行を制御する。その先端を肛門挙筋の腱弓にガイドする（ 図2 、パネルE）。 </li><li>ガイドワイヤーを膣壁切開部に露出させ、対応する同側の頭蓋メッシュアーム（ 図2 、パネルF）でそれを負荷する。 </li><li> mでロードされたトロカールを引っ張りなさい上記の構造を介してeshの腕。アームを緊張させないでください。 </li><li>動物の反対側の腹側切開を通して第2の頭蓋腕を用いてこのプロセスを繰り返す。 </li><li>背側の切開部の1つを通して、甲状腺筋を通って甲状腺靱帯の遠位に套管針を通す（ 図2 、パネルG）。 </li><li>ガイドワイヤーを膣切開を通して露出させ、メッシュの背側の腕をつかみ、引き出します。腕を緊張のない状態に保ち、反対側で繰り返します。 </li><li>平らにし、アームに張力をかけることでメッシュの位置を調整しますが、メッシュにはテンションフリーを保ちます （ 図2、パネルI、 図3 ）。 </li><li>尾骨の境界の中央にある簡単な中断3/0ポリプロピレン縫合糸でメッシュ本体を固定し、それを周囲の結合組織に固定する。 </li><li>簡単な中断3/0 polyglで皮膚のレベルで腕をカットし、すべての皮膚切開を閉じるエカプロン縫合（ 図2 、パネルH）。 </li><li>実行中の3/0 polyglecaprone縫合で膣切開を閉じる。 </li></ol></li></ol><img alt="図3" src="/files/ftp_upload/55706/55706fig3.jpg" /> 図3：卵管骨盤の模式図。卵管穿孔器を通過する頭蓋腕および尾襞を通る尾枝を含む。幅広い仙骨靱帯は青色である。より小さいパネルは、過剰量の物質を短くする直前に、横臥位にある動物の腕の位置を示す。メインパネルには同じことが示されていますが、皮膚と筋肉が除去されています。

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ヒツジモデルに関するこの研究プログラムは、MedriとBlasingame、Burch、GarrardとAshley（Atlanta GA、USA）の無条件補助金によって支えられました。契約は、ルーベン研究開発譲渡拠点を通じて処理されます。スポンサーは、この実験の計画、実行、または報告に干渉したり、結果を所有したりしていませんでした。 NSとLHは、FP7-フレームワーク（Bip-Upyプロジェクト; NMP3-LA-2012-310389）のECからの助成金の受領者です。 AFは、産学協同プログラム（251356）でECからの助成金によって支援された。

ここでは、アンカーアームの有無にかかわらずインプラントの膣切開および経膣メッシュ挿入を模倣することを目的としたヒツジの実験手順について説明します。その後の工程及び器具はPOPおよび腹圧性尿失禁15、16、19、20に対して行う外科的処置に触発されました。最初の解剖解剖の後、実験?...

骨盤臓器脱は、少なくとも1回の膣分娩を経験した女性の半分で臨床的に診断されるが、主観的には、女性全体の半分が煩わしい1 。治療の主力は、天然の組織またはインプラント材料のいずれかを使用して外科的再建であり、これらの方法のそれぞれは、再発または局所合併症2、3、4を含むその限界を有します。理想的なインプラントはまだ同定されていません。したがって、新製品および技術が市場に導入される前に、製品革新および前臨床実験のための適切なパイプラインの開発が継続的に求められています。このトラックのステップの一つは、適切な動物モデル5,6に実験的評価です。理想的には、解剖学的、生体力学的、および生物学的環境を模倣すべきである。それはthになると新規インプラントの実験的評価では、生体適合性のために、または腹壁欠陥の再構築のために、より小さいモデルで最初に試験される。そのタイプの実験は、インプラントが関心のある領域（ すなわち、膣）に挿入されないために批判されている7 。膣手術モデルは、実験の目的が外植片の生体力学的特徴を記録することである場合は確かに、より希少である。このため、ウサギから羊への移動がありました8 。大人の雌は、合理的な大きさと接近可能な膣を有する大動物モデルである。彼らは、新規なインプラントの中間評価のために使用することができ、特定の材料9、10、11、12、13を膣露光を再現することが可能です。寸法と解剖学だけでなく卵の膣および骨盤底のレベルは、ヒトのレベルに匹敵するだけでなく、卵の15％に生じる脱出の自発的発生もある。脱出の危険因子が重なっている6、14（ すなわち、multiparity、POPの既往歴は、より高い体重ときや丘に放牧、及び（フィト）エストロゲンの同等の効果によって誘導される腹腔内圧を増加させました）。ヨーロッパでは、非ヒト霊長類に関する研究がほぼ完全に禁止されているため、羊は唯一の合理的な選択肢です。ここでは、モデルは、トロカールとガイドを使用してインプラントの経膣挿入を模倣することによってさらに一歩踏み出され、メッシュが直腸 - 膣中隔に配置される。これは、臨床実践15、16に等しいと考えることができる筋肉の靭帯を介して腕を固定使用してインプラントを固定することにより追跡しました。これまでのところ、この技術これらのより長いストリップの使用および/または解剖学的構造の貫通に起因して、特定の合併症が起こると多くは信じているが、研究されていない。 以前の詳細な解剖学的研究では、ヒツジ骨盤底を女性骨盤17と比較した。インプラントを固定することに関しては、ヒツジは仙棘靭帯を持たないが、非常によく発達した広範な仙棘靱帯を有する。陰部神経は胸骨の上を通っており、このランドマークを吊り点として使用することは危険です。逆に、尾骨筋およびその筋膜ならびに閉鎖膜は、直腸膣腔からアクセス可能である。ここでは、アンカーアームの固定のための解剖学的構造のアクセスおよび位置が提案される。メッシュの配置に使用できる器具について説明します。最後に、血管または神経などの隣接する解剖学的構造に対する腕またはトロカールの関係潜在的な術中合併症と同様に、記載されている。

<table><tbody><tr><td>Animals:&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>parous female sheep (45 - 65 kg)</td><td>Zo&amp;ouml;technical Institute of the KU Leuven</td><td>NA</td><td>experimetnal animal</td></tr><tr><td>Sterile clothing:&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterile drape 45 x 75 cm</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher, Regensdorf, Germany</td><td>33002</td><td>other material</td></tr><tr><td>sterile OR drape 150 x 180 cm</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher, Regensdorf, Germany</td><td>33009</td><td>other material</td></tr><tr><td>sterile glowes 2x</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher, Regensdorf, Germany</td><td>16652</td><td>other material</td></tr><tr><td>sterile surgical gown 2x</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher, Regensdorf, Germany</td><td>19342</td><td>other material</td></tr><tr><td>surgical head cap 2x</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher, Regensdorf, Germany</td><td>17427</td><td>other material</td></tr><tr><td>surgical face mask 2x</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher, Regensdorf, Germany</td><td>11983</td><td>other material</td></tr><tr><td>Other surgical material</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>implant</td><td>FEG Textiltechnik GmbH, Aachen, Germany</td><td>NA</td><td>purposely designed implant</td></tr><tr><td>3/0 polypropylene suture</td><td>Prolene, Ethicon, Diegem, Belgium</td><td>8762H</td><td>suture material</td></tr><tr><td>3/0 polygecaprone suture</td><td>Vicryl, Ethicon</td><td>J311H</td><td>suture material</td></tr><tr><td>gauze swabs 10 x 10 cm 10x, 12-ply</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher, Regensdorf, Germany</td><td>11574</td><td>other material</td></tr><tr><td>syringe 10 mL</td><td>Becton Dickinsosn S.A., Madrid, Spain</td><td>300613</td><td>aqua-dissection</td></tr><tr><td>needle 16 gauge</td><td>Terumo, Leuven, Belgium</td><td>NN-2238R</td><td>aqua-dissection</td></tr><tr><td>Surgical equipment:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>blade no.22</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>10022-00</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Allis tissue forceps 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>11091-15</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Standart pattern forceps 1 x 2 theeth 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>11023-14</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Standart pattern forceps straight serrated 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>11000-14</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Scalpel handle 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>10004-13</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Halstead-Mosquito forceps 2x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>13008-12</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Standart pattern scissors 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>14001-14</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>14016-18</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Crile Wood needle holder 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>12003-15</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Kell forceps 1x</td><td>Fine science isntruments, Heidelberg, Germany</td><td>13018-14</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Long Starr Self-Retaining Retractor with eight 5 mm sharp stay hooks</td><td>Cooper Surgical, Tumbull, USA</td><td>3704</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Heaney Simon Vaginal Retractor</td><td>Medical supplies &amp;amp; equipments co., Katy, Texas, USA</td><td>403-129FSI</td><td>surgical instruments</td></tr><tr><td>Trocar (Insnare)</td><td>Bard, West Sussex, United Kingdom</td><td>NA</td><td>any trocar on market for transvaginal mesh implantation</td></tr><tr><td>Medication:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>amoxilicilline clavulanate 1000 mg / 300 mL (Ampiciline)</td><td>GSK, Wavre, Belgium</td><td>NA</td><td>antibiotics</td></tr><tr><td>buprenorfin 0.3 mg/mL + chlorocresol 1.35 mg/mL (Vetregesic)</td><td>Ecuphar, Oostkamp, Belgium</td><td>NA</td><td>analgesia</td></tr><tr><td>ketamin HCL 100 mg/mL (Ketamine 1000)</td><td>Ceva Sante Animale, Brussels, Belgium</td><td>NA</td><td>anesthesia</td></tr><tr><td>isoflurane (IsoFlo)</td><td>Abbott Laboratories Ltd, Maidenhead, Berkshire, UK</td><td>NA</td><td>anesthesia</td></tr><tr><td>polyvidone iodium 7.5% (Braunol)</td><td>B. Braun Medical, Machelen, Belgium</td><td>NA</td><td>local desinfection</td></tr><tr><td>saline solution 500 mL</td><td>B. Braun Medical, Machelen, Belgium</td><td>NA</td><td>aqua-dissection</td></tr><tr><td>Xxylazine HCl , 1 mL/50 kg&amp;nbsp;</td><td>Vexylan, Ceva Sante Animale, Belgium</td><td>NA</td><td>premedication</td></tr><tr><td>atropine Sulfate 15 mg/mL (),</td><td>Viatris, Belgium</td><td>NA</td><td>premedication</td></tr></tbody></table>

transvaginal mesh insertion in the ovine model

このプロトコルは、単一の膣切開技術を用いて、固定アームのトロカール誘導挿入の有無にかかわらず、ヒツジの直腸膣中隔へのメッシュ挿入を記述する。羊の羊は、直腸膣中隔の切開を行い、続いて、両方とも卵の解剖学的構造に適合するように設計された4つのアンカーアームの有無にかかわらずインプラントを挿入した。アンカーアームは、トロカールおよび「外部イン」技術を用いて適所に置かれた。頭蓋腕は、閉鎖具、グラシリス、および内転筋の筋肉を通過した。尾側腕は、尾骨筋を介して、仙骨靭帯の近くに固定された。この技術は、骨盤臓器脱を患っている女性で行われる外科手術の模倣を可能にする。解剖学的空間および要素は容易に識別される。処置の最も重要な部分は、腹腔または周囲の骨盤臓器に容易に浸透することができる頭蓋トロカールの挿入である。ティより広範な後腹膜切開およびトロカールをより横方向に誘導することによって避けることができる。このアプローチは、トロカールガイド挿入が現在臨床的に使用されていないため、大きな動物モデルにおける新規インプラントの実験的試験のためにのみ設計されている。

より長い観測設定での管理 外科的処置の後、膣のパッキング（手術直後に膣内に挿入された生理食塩水浸されたガーゼパッケージ）を24時間挿入して、インプラントの位置を固定することができる。ヒツジは回復ケージに入れ、呼吸機能は回復するまで続きます。その後、羊を安定した場所に置くことができ...

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Transvaginal Mesh Insertion in the Ovine Model

このプロトコルは、固定アームのトロカール誘導挿入の有無にかかわらず、単一の膣切開技術を使用して、ヒツジの直腸膣中隔のメッシュ移植を記述する。

ヒツジモデルにおける経膣メッシュの挿入

This protocol describes mesh insertion into the rectovaginal septum in sheep using a single vaginal incision technique, with and without the trocar-guided ...

transvaginal-mesh-insertion-in-the-ovine-model

Research

JoVE Journal

Medicine

16.0K ビュー.  Clinical Specialties Research Groups, Faculty of Medicine, KU Leuven. このプロトコルは、固定アームのトロカール誘導挿入の有無にかかわらず、単一の膣切開技術を使用して、ヒツジの直腸膣中隔のメッシュ移植を記述する。 

ビデオ: Transvaginal Mesh Insertion in the Ovine Model

An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells

Endometrial cancer is the most common gynecologic malignancy in North America and the incidence is rising worldwide. Treatment consists of surgery with or without adjuvant therapy depending on lymph node involvement as determined by lymphadenectomy. Lymphadenectomy is a morbid procedure, which has not been shown to have a therapeutic benefit in many patients, and thus a new method to diagnose lymph node metastases is required. To test novel imaging agents, a reliable model of endometrial cancer with retroperitoneal lymph node metastases is needed. The VX2 endometrial cancer model has been described frequently in the literature; however, significant variation exists with respect to the method of model establishment. Furthermore, no studies have reported on the use of cultured VX2 cells to create this model as only cells propagated in vivo have been previously used. Herein, we present a standardized surgical method and post-operative monitoring method for the establishment of the VX2 endometrial cancer model and report on the first use of cultured VX2 cells to create this model.

This protocol presents a standardized method to grow VX2 cells in culture and to create an orthotopic VX2 model of endometrial cancer with retroperitoneal lymph node metastases in rabbits. Orthotopic endometrial cancer models are important for the pre-clinical study of novel imaging modalities for the diagnosis of lymph node metastases.

生体内伝播および培養VX2細胞から作られた後腹部リンパ管リンパデノパシーを有するオルトトピック子宮内膜癌モデル

Endometrial cancer is the most common gynecologic malignancy in North America and the incidence is rising worldwide. Treatment consists of surgery with or ...

がん研究

Anterior Cervical Discectomy and Fusion in the Ovine Model

Anterior cervical discectomy and fusion (ACDF) is the most common surgical operation for cervical radiculopathy and/or myelopathy in patients who have failed conservative treatment1,5. Since the operation was first described by Cloward2 and Smith and Robinson6 in 1958, a variety refinements in technique, graft material and implants have been made3. In particular, there is a need for safe osteoinductive agents that could benefit selected patients. The ovine model has been shown to have anatomical, biomechanical, bone density and radiological properties that are similar to the human counterpart, the most similar level being C3/44. It is therefore an ideal model in which preclinical studies can be performed. In particular this methodology may be useful to researchers interested in evaluating different devices and biologics, including stem cells, for potential application in human spinal surgery.

This video demonstrates the technique of anterior cervical discectomy and fusion in the ovine model.

羊モデルにおける前頸部椎間板切除術および融合

Anterior cervical discectomy and fusion (ACDF) is the most common surgical operation for cervical radiculopathy and/or myelopathy in patients who have ...

生物学

Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation and placenta formation and enable ongoing pregnancy. The limitations to pregnancy success caused by embryonic defects are well known and have been largely overcome in recent decades with the rise of in vitro fertilization (IVF) and assisted reproductive technologies. As yet, however, the field has not overcome the limitations caused by an inadequately receptive endometrium, thus resulting in stagnating IVF success rates. Ovarian and endometrial functions are closely intertwined, as hormones produced by the ovary are responsible for the endometrium's menstrual cyclicity. As such, when using rodent models of pregnancy, it can be difficult to ascertain whether an observed result is due to an ovarian or uterine deficit. To overcome this, an ovariectomized mouse model was developed with embryo transfer or artificial decidualization to allow the study of uterine-specific contributions to pregnancy. This article will provide instructions on how to perform ovariectomy and offer insights into various techniques for supplying exogenous hormones to support successful artificial decidualization or pregnancy following embryo transfer from healthy donors. These techniques include subcutaneous injection, slow-release pellets, and osmotic mini pumps. The key advantages and disadvantages of each method will be discussed, enabling researchers to choose the best study design for their specific research question.

Pregnancy establishment is a dynamic process involving complex embryo and uterine crosstalk. The precise contributions of the maternal uterine environment to these processes remain an active area of investigation. Here, detailed protocols are provided to aid in designing in vivo animal models to address these research questions.

卵巣摘出マウスモデルにおける妊娠確立への子宮寄与の研究方法

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation ...

発生生物学

In Vivo Real-Time Study of Drug Effects on Carotid Blood Flow in the Ovine Fetus

The ability of an organism to maintain a constant blood flow to the brain in response to sudden surges in systemic blood pressure (BP) is known as cerebral autoregulation (CAR), which occurs in the carotid artery. In contrast to full-term neonates, preterm neonates are unable to reduce the cerebral blood flow (CBF) in response to increased systemic BP. In preterm neonates, this exposes the fragile cerebral vessels to high perfusion pressures, leading to their rupture and brain damage. Ex vivo studies using wire myography have demonstrated that carotid arteries from near-term fetuses constrict in response to the activation of adrenergic alpha1 receptors. This response is blunted in the preterm fetus. Thus, to examine the role of alpha1-AR in vivo, presented here is an innovative approach to determine the effects of drugs on a carotid arterial segment in vivo in an ovine fetus during the developmental progression of gestation. The presented data demonstrate the simultaneous measurement of fetal blood flow and blood pressure. The perivascular delivery system can be used to conduct a long-term study over several days. Additional applications for this method could include viral delivery systems to alter the expression of genes in a segment of the carotid artery. These methods could be applied to other blood vessels in the growing organism in utero as well as in adult organisms.

In Vivo Real-Time Study of Drug Effects on Carotid Blood Flow in the Ovine Fetus

The present protocol describes a method to deliver drugs and gene expression-modifying agents perivascularly in an in utero developing fetus. Importantly, the effect of drugs/agents on blood flow can be measured with the progression of pregnancy.

生体内 ヒツジ胎児の頸動脈血流に対する薬物効果のリアルタイム研究

The ability of an organism to maintain a constant blood flow to the brain in response to sudden surges in systemic blood pressure (BP) is known as ...

Ovine Lumbar Intervertebral Disc Degeneration Model Utilizing a Lateral Retroperitoneal Drill Bit Injury

Intervertebral disc degeneration is a significant contributor to the development of back pain and the leading cause of disability worldwide. Numerous animal models of intervertebral disc degeneration have been developed. The ideal animal model should closely mimic the human intervertebral disc with regard to morphology, biomechanical properties and the absence of notochordal cells. The sheep lumbar intervertebral disc model fulfils these criteria. We present an ovine model of intervertebral disc degeneration utilizing a drill bit injury through a lateral retroperitoneal approach. The lateral approach significantly reduces the incision and potential morbidity associated with the traditional anterior approach to the ovine spine. Utilization of a drill-bit method of injury affords the ability to produce a consistent and reproducible injury, of precise dimensions, that initiates a consistent degree of intervertebral disc degeneration. The focal nature of the annular and nucleus pulposus defect more closely mimics the clinical condition of focal intervertebral disc herniation. Sheep recover rapidly following this procedure and are typically mobile and eating within the hour. Intervertebral disc degeneration ensues and sheep undergo necropsy and subsequent analysis at periods from eight weeks. We believe that the drill bit injury model of intervertebral disc degeneration offers advantages over more conventional annular injury models.

Intervertebral disc degeneration is a significant contributor to back pain and a leading cause of disability worldwide. Numerous animal models of intervertebral disc degeneration exist. We demonstrate an ovine model of intervertebral disc degeneration, utilizing a drill bit, which achieves a consistent disc injury and reproducible level of disc degeneration.

側方腹腔ドリルビット傷害を利用した羊の腰椎椎間板変性モデル

Intervertebral disc degeneration is a significant contributor to the development of back pain and the leading cause of disability worldwide. Numerous ...

医学

Intravitreal Injections in the Ovine Eye

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or topical administration. IVT drug delivery involves an injection into the vitreous humor of the eye, a gelatinous substance that fills the posterior chamber of the eye and maintains the shape of the eye globe. Although the IVT route is less specifically targeted than subretinal delivery, it is much less invasive and is widely used in clinical settings for a range of ocular diseases. 
We previously demonstrated the efficacy of intravitreal delivery of an adeno-associated virus (AAV)-mediated gene therapy product (AAV9.CLN5) in sheep with a naturally occurring CLN5 form of neuronal ceroid lipofuscinosis (NCL). Affected sheep received IVT gene therapy in one eye, with the other untreated eye serving as an internal control. Retinal structure and function were maintained in the treated eye up to 15 months after treatment, while the untreated eye displayed progressively declining function and severe atrophy during postmortem examination. Based on the sheep studies, the CLN5 gene therapy product was cleared as a candidate investigational new drug (IND) by the United States Food and Drug Administration in September 2021. This paper details the surgical protocol for IVT delivery of a therapeutic viral vector to the ovine eye.

Intravitreal injections were performed in the sheep eye with the aim of delivering viral-mediated gene therapy to the retina.

ヒツジの目の硝子体内注射

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or ...

Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately 10%-20% of women undergo pelvic floor repair surgery to treat prolapse in the United States. PFD cases result in an overall $26.3 billion annual cost in the United States alone. This multifactorial condition has a negative impact on the quality of life and yet the treatment options have only dwindled in the recent past. One common surgical option is uterosacral ligament suspension (USLS), which is typically performed by affixing the vaginal vault to the uterosacral ligament in the pelvis. This repair has a lower incidence of complications compared to those with mesh augmentation, but is notable for a relatively high failure rate of up to 40%. Considering the lack of standard animal models to study pelvic floor dysfunction, there is an urgent clinical need for innovation in this field with a focus on developing cost-effective and accessible animal models. In this manuscript, we describe a rat model of USLS involving a complete hysterectomy followed by fixation of the remaining vaginal vault to the uterosacral ligament. The goal of this model is to mimic the procedure performed on women to be able to use the model to then investigate reparative strategies that improve the mechanical integrity of the ligament attachment. Importantly, we also describe the development of an in situ tensile testing procedure to characterize interface integrity at chosen time points following surgical intervention. Overall, this model will be a useful tool for future studies that investigate treatment options for POP repair via USLS.

Pelvic organ prolapse affects millions of women worldwide and yet some common surgical interventions have failure rates as high as 40%. The lack of standard animal models to investigate this condition impedes progress. We propose the following protocol as a model for uterosacral ligament suspension and in vivo tensile testing.

子宮仙靭帯サスペンションラットモデルの開発

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Chronic Ovine Model of Right Ventricular Failure and Functional Tricuspid Regurgitation

The pathophysiology of severe functional tricuspid regurgitation (FTR) associated with right ventricular dysfunction is poorly understood, leading to suboptimal clinical results. We set out to establish a chronic ovine model of FTR and right heart failure to investigate the mechanisms of FTR. Twenty adult male sheep (6-12 months old, 62 &#177; 7 kg) underwent a left thoracotomy and baseline echocardiography. A pulmonary artery band (PAB) was placed and cinched around the main pulmonary artery (PA) to at least double the systolic pulmonary artery pressure (SPAP), inducing right ventricular (RV) pressure overload and signs of RV dilatation. PAB acutely increased the SPAP from 21 &#177; 2 mmHg to 62 &#177; 2 mmHg. The animals were followed for 8 weeks, symptoms of heart failure were treated with diuretics, and surveillance echocardiography was used to assess for pleural and abdominal fluid collection. Three animals died during the follow-up period due to stroke, hemorrhage, and acute heart failure. After 2 months, a median sternotomy and epicardial echocardiography were performed. Of the surviving 17 animals, 3 developed mild tricuspid regurgitation, 3 developed moderate tricuspid regurgitation, and 11 developed severe tricuspid regurgitation. Eight weeks of pulmonary artery banding resulted in a stable chronic ovine model of right ventricular dysfunction and significant FTR. This large animal platform can be used to further investigate the structural and molecular basis of RV failure and functional tricuspid regurgitation.

Right ventricular failure and functional tricuspid regurgitation are associated with left-sided heart disease and pulmonary hypertension, which contribute significantly to morbidity and mortality in patients. Establishing a chronic ovine model to study right ventricular failure and functional tricuspid regurgitation will help in understanding their mechanisms, progression, and possible treatments.

右室不全と機能性三尖弁逆流の慢性ヒツジモデル

The pathophysiology of severe functional tricuspid regurgitation (FTR) associated with right ventricular dysfunction is poorly understood, leading to ...

<meta charset="utf8"></head><body>クローンブタにおける卵管胚移植の最適化

Embryo Transfer Surgery via Laparotomy in Gilts

This protocol aims to demonstrate the surgical technique for transferring cloned pig embryos to the oviduct, a method widely used in the production of genetically modified pigs for biomedical research. Nine gilts underwent hormonal synchronization and laparotomy for the transfer of cloned embryos produced by somatic cell nuclear transfer (SCNT) at stages of up to 4 cells on day 2 to the oviduct. Gestational diagnosis was conducted via ultrasound examination 30 days post-transfer surgery. Six out of the nine operated gilts exhibited signs of pregnancy on ultrasound examination. However, as there was no progression in fetal development as assessed by echography, the gilts underwent necropsy at 60 days for the collection of biological material and assessment of the reproductive system. Adhesions were observed in the uterine horns, ovaries, and oviducts. From the uterine lumen of two of the euthanized gilts, one and four embryonic structures with gestational ages ranging between 12 to 20 days were obtained. Despite the absence of live piglets, likely attributed to the low-efficiency rate of transferring cloned pig embryos, which is influenced by various factors, including the number and quality of transferred embryos, the presented surgical technique proved to be rapid and safe.

<meta charset="utf8"></head><body>著者スポットライト:卵管クローンブタ胚移植における外科的方法と結果

This protocol describes the application of the surgical technique used to transfer cloned pig embryos via laparotomy in gilts.

雌豚の開腹術による胚移植手術

This protocol aims to demonstrate the surgical technique for transferring cloned pig embryos to the oviduct, a method widely used in the production of ...

ヒツジモデルにおける経膣メッシュの挿入

要約

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生体内伝播および培養VX2細胞から作られた後腹部リンパ管リンパデノパシーを有するオルトトピック子宮内膜癌モデル

羊モデルにおける前頸部椎間板切除術および融合

卵巣摘出マウスモデルにおける妊娠確立への子宮寄与の研究方法

生体内ヒツジ胎児の頸動脈血流に対する薬物効果のリアルタイム研究

側方腹腔ドリルビット傷害を利用した羊の腰椎椎間板変性モデル

ヒツジの目の硝子体内注射

子宮仙靭帯サスペンションラットモデルの開発

右室不全と機能性三尖弁逆流の慢性ヒツジモデル

雌豚の開腹術による胚移植手術

雌豚の開腹術による胚移植手術

ヒツジモデルにおける経膣メッシュの挿入

要約

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生体内伝播および培養VX2細胞から作られた後腹部リンパ管リンパデノパシーを有するオルトトピック子宮内膜癌モデル

羊モデルにおける前頸部椎間板切除術および融合

卵巣摘出マウスモデルにおける妊娠確立への子宮寄与の研究方法

生体内 ヒツジ胎児の頸動脈血流に対する薬物効果のリアルタイム研究

側方腹腔ドリルビット傷害を利用した羊の腰椎椎間板変性モデル

ヒツジの目の硝子体内注射

子宮仙靭帯サスペンションラットモデルの開発

右室不全と機能性三尖弁逆流の慢性ヒツジモデル

雌豚の開腹術による胚移植手術

雌豚の開腹術による胚移植手術

生体内ヒツジ胎児の頸動脈血流に対する薬物効果のリアルタイム研究