免疫療法と化学療法を組み合わせることは、がんにおける効率的な治療法を開発するための革新的なアプローチを表しています。主な目的は、相乗的な治療効果、用量および毒性の低減を達成し、薬剤耐性の誘導を最小限に抑えるか遅らせることである。しかし、実用的かつ倫理的な理由から、患者の相乗効果を決定することはできません。したがって、臨床試験で直接組み合わせする前に、プレニカプター併用試験、インビトロ、および/または動物において、臨床試験の根拠を得るために実施されるべきである。このビデオに示すように、薬物間の相乗効果の定量化のための単純な堅牢な方法は、Shouan Talaleが開発した組み合わせインデックス方程式に基づいています。この方法とコンピュータ化されたシミュレーションを用いて、O-アセチルGD2神経芽細胞抗原に特異的なモノクローナル抗体8B6と、神経芽細胞細胞上の化学療法薬トポテカンとの相乗作用をここで証明する。簡単に言えば、ヒトIMOにおける各化合物の有効用量50値を決定した後、5つの神経芽細胞腫細胞株、これらの細胞を2つの化合物の公平な比率で挿管し、そして組み合わせ指数値を自動計算機シミュレーションを用いて計算した。次に、IMOの5腫瘍異種モデルで、Vivoでこれらの結果を確認した。私たちは、T75フラスコでIMR-5細胞を増殖させ、顕微鏡で観察し、細胞の合流をチェックしました。フラスコから細胞培地をアスペレートし、5mLのPBSで洗浄する。0.05%EDTA/PBS溶液の3 mLを加えます。フラスコをインキュベーターに3分間戻します。細胞分離のための顕微鏡下で細胞培養を調べる。フラスコに完全な細胞媒体の10 mLを加え、生殖不能、15 mL円錐形の管に細胞懸濁液を移す。遠心分離機は300gで5分間、ヘモサイトメーターを用いた細胞をカウントする。上清を取り除き、捨てます。完全増殖培地中の細胞を再中断する.培地容量を調整して、100,000個の細胞/mL.Seed 84ウェルの最終濃度を得るために、それぞれ10,000個の細胞を持つ96ウェル培養プレート、すなわち細胞懸濁液の100マイクロリットルである。完全成長培地の500マイクロリットルの細胞インキュベーター.希薄モノクローナル抗体で細胞を18時間インキュベートし、モノクローナル抗体濃度240マイクログラム/mLで抗体作業溶液を得る。完全成長培地の500マイクロリットルで薬物を希釈し、最終濃度120ナノモルで薬物作動溶液を得る。プロトコルに示されているように、5、2倍のシリアル妄想を実行します。薬物とモノクローナルアニボディ溶液と同じ方法で希釈します。最終的な濃度に到達するには、この実験レイアウトに示すように、対応するウェル内の各薬剤溶液の50マイクロリットルを移す。培養器で細胞を72時間インキュベートします。各ウェルに10マイクロリットルのMTT試薬溶液を加えます。摂氏37度で4時間インキュベートします。マルチチャンネルピペットを使用して各ウェルに100マイクロリットルのリシン溶液を加え、ピペットで十分に混ぜます。加湿チャンバーで4時間摂氏37度でインキュベート。分光光度計を使用して570および620ナノメートルで吸収剤を取り除きます。セルの生存率を次のように計算します。次の式を使用して、影響を受ける小数の値を計算します。シミュレーションソフトウェアを実行し、新しい実験ボタンをクリックしてメインウィンドウを取得します。実験の名前を入力します。新しい単一の薬をクリックします。名前を入力します。省略形を入力します。薬物濃度単位を入力します。データ1線量およびFA値を入力する。Enter キーを押して、すべてのデータ ポイントが入力されるまでこの手順を繰り返します。[Finished]をクリックします。同じ手順に従って、モノクローナル抗体データポイントを入力します。[新薬コンボ]をクリックします。[定数比率]を選択します。名前を入力します。省略形を入力します。薬物モノクローナル抗体比を入力します。データを1回入力します。プログラムは自動的にモノクローナル抗体8B6とコンボの用量を計算します。データ 1 FA 値を入力します。Enter キーを押して、すべてのデータ ポイントが入力されるまでこの手順を繰り返します。[完了] をクリックし、[レポートの生成] をクリックします。コンボを選択し、[OK] をクリックします。[ヘッダー]、[CI テーブル]、[集計テーブル] を選択し、[OK] をクリックします。ファイル名と分析を入力し、[保存] をクリックしてレポートを生成します。レポートは自動的にデフォルトの Web ブラウザーで開きます。このレポートには、タイトル、日付、最終名、記述ノート、m、Dm、およびrパラメータ、単剤または組み合わせで使用される薬剤の有効用量50、および有効用量50、75、90、および95.Aの組み合わせ指数値が1より小さい組み合わせインデックス表を含む要約表セクションが含まれています。値が 1 に等しい場合は、加算性を示します。1 より大きい値は、拮抗を示します。使用前に4°Cの冷蔵庫でバイアルを氷に浸すことによって、基質膜マトリックスを一晩解凍する。すべての培養摩耗、または地下膜メトリックに接触する培地は、プレチルする必要があります。培養IMR5を収穫する。細胞を15 mLの円錐形チューブに移し、遠心分離機を300gで5分間移動させます。上清を捨てます。15 mLの氷冷PBSで細胞を2回洗浄します。氷冷PBSでmL当たり500万細胞の細胞懸濁液を調製する。細胞懸濁液を1.5 mLマイクロチューブに移します。旋回基膜マトリックスバイアル。1体積の基部膜マトリックス試薬を加え、ピペット処理により混合し、mL当たり250万個の細胞懸濁液を得る。注射が行われる場所の側面を剃ります。細胞を混ぜ合わせ、21g針を取り付けた1mLシリンジに細胞懸濁液を慎重に引き出します。シリンジに気泡がないことを確認してください。マウスの接種領域を消毒液で消毒する。注射部位で指の間の側面のマウスの皮膚を静かに絞ります。針をスキンフォールドに正確に挿入します。皮下注射を保証するために、針を組織の奥深くに入れないでください。皮下に100マイクロリットルのIMR5細胞懸濁液を注入する。液体の拡散を防ぐために注射器を回し、針を引き出します。体重と腫瘍の成長のためにマウスを監視します。口径で腫瘍の長さと幅を測定します。この式を使用して腫瘍体積を計算します。腫瘍が50〜60ミリメートルの平均体積に達したときに治療を開始
