歩行分析を用いたプロトコルは、運動障害のマウスモーターが歩行障害を有する患者の症状を模倣しているかどうかを判断するのに非常に有用である。したがって、ストレスローディング試験における歩行解析は、マウスの特定の運動型を検出するために、簡単に、かつ高価な機器なしで、自発的な効果を伴わずに行うことができます。動作テストを開始する前に、各マウスのウェイトを記録し、マーキング ペンを使用して各尾にラベルを付けます。
すべての動物の体重を量ってマークしたら、マウスを実験室に少なくとも30分間置き、回転可能なメッシュ蓋付きの25%40センチメートルの吊り下げボックスをラボベンチにクリアに設定します。マウスが順応したら、マウスをメッシュ蓋の中央に置き、蓋を慎重に逆さまにします。次に、マウスをホームケージに戻す前に、メッシュ蓋からマウスの落下遅延を測定します。
すべてのマウスをテストしたら、9.9から42センチメートルの白い紙をラボベンチに置き、紙の遠位端に暗いゴールボックスを置きます。他のボックスは、紙とほぼ同じ長さで、滑走路の両側に置き、脱出を防ぎます。そして、35ミリリットルのペトリ料理を分離するために黒と赤のインクを追加します。
分析のためにマウスをトレーニングするには、マウスを用紙の近位端に置き、ゴールボックスに面し、マウスを用紙の近位端からゴールボックスまで歩きます。マウスが箱に届くと、親指のボールと他の指の間に背中と尾を挟んで後肢の動きを制限し、動物をそっと擦り傷します。そして、前肢の底を赤いインクに浸し、後肢の底を黒いインクに浸します。
次に、マウスを用紙の近位端に戻し、ゴールボックスに面し、マウスを近位端からゴールボックスまで歩かせる。足を印刷した用紙を空気乾燥させた後、足のプリントの同じ部分間の距離を測定することによって、ストライド長さの3つの測定値を得るために定規を使用します。前方ベース幅のうち、連続した、同一面、前部フットプリント間の線を描き、前部フットプリントのパッドから垂直線の長さを測定することにより、フットプリント間に引かれた線にする。
後部のベース幅の、連続した右後方フットプリント間に線を引くことによって、左後ろ足のパッドから垂直線の長さを測定して、他の右フットプリント間に引かれた線にする。オーバーラップの場合は、前面と後ろのフットプリントのパッド間の距離を測定します。拘束管を準備するには、正方形のドリルを使用して、スケールマークに沿って50ミリリットルのチューブに16の2ミリメートルの穴を作り、各スケールマークの裏側を作ります。
チューブの先端を切り取って5ミリメートルの穴を作り、呼吸のために、尾のためにチューブキャップに4ミリメートルの穴を作ります。ストレスローディングテストでは、マウスを擦りかけ、前肢を軽く閉じ込めて、動物を最初に拘束チューブヘッドに入れる。チューブをキャップする前に、キャップの穴を通して尾を通します。
そして、室温で2時間ベンチトップにマウスを置きます。ストレスローディング期間の終わりに、チューブからマウスを取り出し、動物を自宅のケージに戻します。これらの代表的な数字で観察されるように、ヘテロ接合急速発症ジストニアパーキンソニズムモデルマウスは、生後4週で野生型のごみの仲間を行うよりも、有意に短い前部および後肢ストライドの長さを示す。
ストレスヘテロ接合急速発症ジストニアパーキンソニズムモデルマウスは、また、生後8週でストレスを受けた野生型のごみの仲間のものよりも両肢の歩幅が有意に短いストライド長を示す。両肢の歩幅の長さの非対称性は、マウスのどのグループにおいても、どの年齢でも有意に異なっていない。両肢の前部および重なりは、すべての年齢層において、すべての年齢層において類似している。
後方ベースは、これらのストレスを受けたヘテロ接合性急速発症ジストニアモデルマウスにおいて有意に広く、生後10週のストレス野生型動物で観察されたものよりも、ストレスがヘテロ接合急速発症ジストニアモデルマウスの運動障害を引き起こすことを示している。4~10週齢の動物では、野生型と変異型の間に、吊り時間に有意な差は認められない。しかし、12週齢で、ストレス野生型マウスの吊り時間は他の動物よりも著しく長く、ヘテロ接合急速発症ジストニアパーキンソニズムモデルマウスにおける運動障害は、古い動物における拘束試験によって野生型マウスと区別できることを示唆している。
マウスがインクの手足の底を垂れ下がった直後に紙の上に置き、歩行テストの前にインクが乾燥するのを避けます。オープンフィールド、上昇したプラス迷路、全体の水泳テストなどの感情的な特性のための追加のテストは、歩行異常が運動障害のみから生じるかどうかを答えるために行うことができます。このプロトコルは、応力負荷の数と持続時間を変更し、さまざまな負荷条件間でモーターのフェノタイプを比較することによって、ストレスに対する感受性を探るために使用することができます。
このプロトコルは、応力荷重の数と持続時間を変更し、さまざまな負荷条件間でモーターのフェノタイプを比較することによって、応力に対する感受性を探るために使用できます。
