このプロトコルは、あらゆる魚集団の睡眠と活動を定量化するために使用することができ、睡眠調節を研究するために使用されるモデルシステムの数を拡大する可能性を秘めています。この手法の利点は、その柔軟性です。例えば、魚は様々なアリーナサイズで追跡したり、1人で収容された実験やグループで行われた実験で追跡することができます。
このシステムで睡眠を測定する強さは、高スループット薬または遺伝子スクリーニングのための方法の無用性である。我々は、劇的に異なる睡眠の型を示す洞窟魚の2つの異なる集団における睡眠の進化の研究にこの方法を適用した。行動イメージングのシステムを確立することは困難ですが、当社のシステムは、幼虫や成虫の魚を研究するための費用対効果の高い方法を提供します。
幼虫A.mexicanusの睡眠と概日リズムを研究するための運動運動行動を正確に追跡するシステムを構築するには、0.33センチメートルの厚さの白いサインアクリルを使用して、幼虫追跡システムのプラットフォームを構築します。行動追跡実験中に魚を含むアリーナが存在する照明付きの正方形のヒートシンクの上に記録プラットフォームを置き、動物ハウジングのライトの間にボックス内に2番目のアクリルを置き、赤外線を拡散して最適な照明とコントラストを得ます。幼虫追跡ステージ全体と照明を密閉されたプラスチックチューブ内に設置します。
回転ツールを使用して、実験的に適したウェブカメラからレンズを取り外します。カメラの背面にある小さなネジを取り外して内部ハウジングを取り外し、カメラ本体の内側にある小さなネジを取り外してレンズの残りの部分を緩めます。小さなドライバーを使用して、レンズを切断した後に残っているレンズハウジングの一部を取り外します。
充電結合装置またはCCDハウジングの上部にある青色発光ダイオードを取り外します。次に、内側ハウジングを元の方向に戻してから、2 つの外側のネジを元の位置に戻します。小型のこぎりを使用してカメラの内側をルーティングし、レンズアダプタに付属するまで余分なプラスチックを滑らかにする丸みを帯びたプラスチックルーティングビットをカメラに取り付けることができます。
カメラに直接接触することなく、CCDにできるだけ近い赤外線パスフィルタをカメラ内に取り付け、カメラの前面にある35ミリメートル固定レンズのアダプタをレンズの背面にねじ込みます。次に、ステージとライトを収容するチューブの上部の蓋にドリルされた穴にカメラとレンズを入れ、動物が記録されるコンピュータにUSBを取り付けます。成魚の睡眠システムを構築するために、まず約46センチメートル間隔で赤外線ストリップを切断する。
そして、46×0.32センチメートル9%光パス白色サインアクリルシートを各赤外線ストリップの前に直接配置し、赤外線を拡散させます。次に、リアマウント赤外線照明をサポートするラックにすべてのタンクを配置し、不透明なプラスチック仕切り機と10リットルのガラスタンクを使用して個々のアリーナを作成します。メキシコのテトラ魚の運動活動を記録するために、24ウェル組織プレートの個々の井戸に4〜6日の受精後の魚を配置し、6ウェル組織プレートの個々の井戸で20〜30日の受精後に行う。
ソーシャルセッティングハウスで大人の四面睡眠と活動を記録するには、10リットルタンクあたり最大5人の大人まで、仕切りの有無にかかわらず。この代表的な実験では、3つの独立した洞窟魚群からの幼虫魚は、表面魚と比較して睡眠の有意な減少を示した。この睡眠生産は、睡眠が表面魚と比較して大人のパション、モリーノ、ティナジャ洞窟魚でも有意に減少したため、テストされたすべての年齢にわたって一貫しています。
特に、社会的住宅は、洞窟の魚の集団の地下効果のために可能性が高いパチョ洞窟魚の睡眠に影響を与えることなく、表面魚の睡眠を堅牢に減少させた。記録するとき魚の注意は、カメラの照明が背景に対する魚の信号を強化するために最適であることを確認するために取られる必要があります。このプロトコルには、テキストに完全に記述されており、ラボの設定に適している必要がある基本的なコマンド ライン コーディングが必要です。
このプロトコルは、睡眠の進化に関する多くの質問につながり、現在、薬物スクリーンに使用され、睡眠行動を追跡し、社会的行動が睡眠にどのような影響を与えるかを理解しています。
