PDMSを用いた高スループットトラクション力顕微鏡検査は、上皮間膜遷移に対する成長因子-βの線量依存的効果を明らかにする

私の研究室では、細胞がどのように作用し、機械的な力の影響を受けるかを調べるメカノバイオロジーに興味があります。メカノバイオロジーを定量化する1つの方法は、細胞収縮性を測定する方法です。付着細胞において、収縮性は細胞基質に及ぼす牽引力に現れる。我々は、一般に牽引力顕微鏡またはTFMと呼ばれる方法論を用いてこれらの力を定量化する。TFMはさまざまな方法で実装されていますが、一般的な側面は、このような単一の料理で通常行われるかなりシリアルで遅いラボテクニックです。これは、一度に1つの人口または条件を評価することを制限します。細胞培養を通してしばらく前に改善されましたが、マルチウェル料理を作り出し、私たちは同じスループットと時間と試薬の同じ効率でTFMにできることは素晴らしいことだと思いませんか?そして、これが私たちの解決策でした。そこで、96ウェルトラクションフォースディッシュを作成しました。そして、それは従来の96ウェル組織培養皿に非常によく似ていますが、この料理では96の異なる細胞培養条件を調べるだけでなく、細胞の収縮性を定量化することができます。これは、単一の皿のアプローチよりもはるかに高いスループットソリューションを提示し、多様な細胞の状態と収縮応答を調べることができます。がん転移の間、がん細胞は原発部位から二次部位に移動し、体内に病気を広げます。癌細胞の転移性行動は、癌関連死の90%を占める。上皮癌細胞がより渡りおよび侵襲的表現型を獲得するための提案されたメカニズムの1つは、上皮間葉転移である、EMTである。EMTの間に、彼らはより多くの回遊性と侵襲的になり、彼らの物理的な行動を変える。これらの物理的挙動の変化をよりよく理解するために、ソフトシリコン基板を利用して、TGFによるEMT誘導によるマウス乳腺細胞の収縮性の変化を測定する研究では、TGF細胞の物理的挙動に対する濃度とインキュベーション時間の異なる影響を調べた。ポリジメチルシロキサンは、ヤング率が約0.6キロパスカルの最も低い非常に準拠したゴムです。この材料の剛性はまた、我々は、Rheometerを使用して、PDMSの機械的特性を測定するSYLGARDを含む架橋剤の異なる濃度を使用して調整184.Toすることができます。PDMSの部品AとB部を混合した後、1対1重量比で硬化剤を指定重量パーセントで添加し、準備したバッチをレオメータプレートにロードする。スピンドル領域を完全にカバーするためにサンプルを十分にロードしてください。スピンドルが、端に空きスペースが残っていないまま、サンプルに完全に触れないようにすることが重要です。余分なサンプルは慎重にトリミングし、プレートから拭く必要があります。0.5%ニューシャの振動剪断線で時間と周波数スイープを行うことによって、各サンプルの粘弾性の最終的な貯蔵弾性率と時間依存性を測定する]このグラフは、0.5%の適用された振動剪断線株と1000の温度を有するポリジメチルシロキサンのレオロジー挙動を測定するために行った時間セク試験の一例である