関節炎の前臨床モデルにおける疼痛の測定は困難であるが、再生および鎮痛治療の両方の評価に不可欠である。私たちのプロトコルは、誘発された痛みの挙動と自発的な痛みの挙動の両方の測定のために敏感で再現可能です。そして、それは簡単で比較的安価です。
関節炎は障害の最大の要因であり、痛みは障害の主な原因です。関節炎の治療は現在不十分です。前臨床モデルは、治療開発の重要な部分です。
この手順を実証するには、技術者のクリストファー・ドーマンと、私の研究室のスタッフサイエンティスト、サンドラ・フリゼルです。針が深く挿入されすぎて関節を後から出るのを防ぐために、針のわずか2.5ミリメートルが鞘から突き出るまで、ポリエチレンチューブの鞘でポイント5インチの針を覆います。次に、注射する麻酔マウスの膝から毛皮を剃り、露出した皮膚をポビドーネスクラブで殺菌する。
その後、膝蓋腱を通して中線の関節にシーザ針を挿入し、膝蓋骨の下端より劣るだけで、目的の物質を注入します。誘発された関節痛を評価する前に、高度計レベル4を使用して、一貫した堅固な圧力の平方メートルあたり700グラムの力を適用する練習をしてください。適切なレベルの圧力が加えられると、デバイスは4ビープ音を発します。
適切な圧力を確実に加えることができる場合は、目差し指と親指でマウスを首にしっかりと擦り付けて、カジュアルな動きを防ぎます。そして、尾を拘束するために4番目と5番目の指を使用してください。マウスは、努力と刺激を受けて離散的な、短い動きを行うことができるはずですが、自由に、または継続的に移動することはできません。
各膝の左右側および内側側に、フリーハンドの親指と人差し指を、ほぼ1秒間に1回、1秒に1回、関節線で同時に繰り返ししっかりした触診を行う。そして、観察者は、この1分間の圧力塗布期間中に拘束を逃れるために動物が発声し、戦う回数を数えます。咬傷と発声の合計は、呼び起こされる痛みのスコアと考えられています。
高度な動的体重負荷ソフトウェアプログラムを開き、センサータイプとしてMiceを選択します。各実験の前に、キャリブレーションメニューの下で「完全なキャリブレーション」を選択してください。そして、tare 値にゼロ」を入力します。
そして、フォームパッドの重量は、中密度繊維ボード、プラスチックビーカー、及び水を較正重量として用いた。「次」と「」を選択し、センサーパッドを泡パッド、中密度ファイバーボード、水のプラスチックビーカーで覆います。すべての材料がセンサーパッドに配置されたら、ゲインプレビューを選択し、キャリブレーションの重量を個々のセンサーに均等に分配するまで調整します。
キャリブレーションインジケーターの値が95を超える場合は、ゲイン定義を選択して、個々のセンサの正規化平均を生成し、センサの完全性を確認します。次に、「次へ」を選択し、キャリブレーションファイルをキャリブレーションフォルダに保存します。「新規」を選択し、最初にテストするマウスのプロジェクト名と動物名を入力します。
「参照」を選択し、プロジェクト用に作成されたキャリブレーションファイルを開きます。次に、「ビデオキャプチャを有効にする」を選択し、「OK」を選択し、動物の重量を量ります。「キャプチャ」を選択し、ソフトウェアに重量を記録します。
OKを選択した後、「5分間チャンバーにマウスを置きます。そして、起動を選択する"ソフトウェアは、動物の活動を記録し、ビデオをキャプチャし、センサーデータと同期し、自動的に分析可能なセグメントと分析不可能なセグメントにビデオを分割します。アッセイ期間の終わりに、簡単なスコアリングを選択し、独立した一時停止設定"と最初の分析可能なセグメントに移動する早送り"を選択します。
安定したゾーンで正しい足が識別されていない場合は、そのゾーンの上にカーソルを置き、適切なボディ部分に対応する適切なショートカットキーを押します。高度な動的体重負荷ソフトウェアは、自動的に分析された時間の割合と4つの手足のそれぞれに配置された体重の割合を計算します。次に、結果"export"を選択し、はい"を選択して、最初の5つの要約データを適切なスプレッドシートプログラムにエクスポートします。
同じグループ内の追加の動物ごとに、new"を選択し、プロジェクト名を変更せずに一意の動物名を入力します。その後、ちょうど実証したようにチャンバー内の各動物の活動をキャプチャします。急性炎症性ケア-遺伝子-a誘発関節炎、慢性炎症性完全なf-roy-nes add-jav-ent誘発関節炎、および慢性非炎症性コール-ag-インア関節炎の誘発疼痛スコアは、3種類の関節痛すべてについてナイーブ非注射動物に対して観察されたものよりも増加する。
女性は、慢性変性関節痛を有する男性ではないが、急性および慢性炎症性関節痛におけるナイーブマウスと比較して、事前に動的体重負荷対策において同様の減少を示す。急性炎症性関節痛を有する雄は、ナイーブ動物よりも4つの手足に体重を移す。4つの手足に対する体重負担は、ナイーブ動物と比較して雌マウスでは増加するが、慢性変性関節痛を有する雄では増加しない。
慢性変性関節痛を有するオスとメスの両方で、ナイーブ動物と比較して左後肢に費やす時間に違いはありません。そして、慢性変性関節痛を有する女性は、非注射マウスと比較して、非関節右後肢に多くの時間を費やします。最後に、急性炎症性関節痛を有する雄マウスと慢性変性関節痛を有する雌は、ナイーブ動物よりも4つの手足に有意に多くの時間を費やす。
体に関連して動物の足の後部を正しく識別することは非常に重要です。頭ではなく、動物の後部に焦点を当てます。この方法により、新しい関節間鎮痛薬の情動性をテストすることができます。
