浸透圧ポンプを介したイソプロテレノールの慢性投与は、マウスにおける進行した心不全の変化を再現するために広く使用されてきた。この方法は簡単で、LADやTACなどの他のモデルよりも少ない外科的専門知識を必要とします。この手順のデモンストレーションは、イビン・ワン博士の研究室の研究科学者であるヴィンセント・レン博士です。
各マウスの体重を秤量して記録した後、各動物に対してイソプロテレノールの適量と濃度を計算し、イソプロテレノールを120マイクロリットルの無菌0.9%塩化ナトリウムに溶解する。イソプロテレノールを完全に可溶化するために1分間徹底的に混ぜ、マウスごとにフローモデレーターの有無にかかわらず、1つの空の浸透圧ポンプの重量を計量して記録します。浸透性ポンプを備えた27ゲージの鈍い先端の充填管を取り付け、120マイクロリットルのイソプロテレノール溶液を1本の1ミリリットルのシリンジに1本積み込みます。
ポンプを直立した位置に保持し、充填管の先端がポンプ貯蔵所の底付近に位置するまでポンプ開口部を通して充填管を挿入し、イソプロテレノール溶液がポンプ開口部に充填されるまでシリンジプランジャーをゆっくりと落ち込ませる。ポンプが積み込まれたら、充填管を慎重に取り外し、余分な溶液を拭き取ります。フローモデレータを挿入してポンプを閉じ、余分な溶液を拭き取ります。
その後、ポンプを再計量して、貯水池の体積の90%以上が満たされていることを確認します。マウスを熱いパッドの上の位置に置き、下腹部から空気を取り除きます。手術用浸透圧ポンプの移植では、麻酔をかけマウスのつまみつまみへの応答の欠如を確認し、動物の目に軟膏を塗布する。
適切な消毒剤で露出した皮膚をきれいにし、1センチメートルの中線皮膚切開を行います。鈍い終わりのはさみを使用して、下層壁から皮膚を慎重に解剖し、鉗子を使用して腹膜壁を下の腸から引き離します。細かいはさみを使用して腹壁の0.8センチメートルの穴を切断し、浸透性ポンプフローモデレータの端を最初に腹腔に挿入します。
ポンプが設置されている場合は、5-0吸収性縫合糸を中断して腹壁の穴を閉じ、6-0の非吸収性縫合糸を使用して皮膚を閉じます。その後、動物を自宅のケージに戻す前に、完全な債務まで監視する専用のインキュベーターにマウスを置きます。ここでは、選択した心エコーパラメータとモデル開発までの予想時間に基づく週次変化の概要を示す。
マウス株間の変動は観察されるが、平均して、最後の直径収縮時の脳室中隔壁厚さ、および最初の週の分数短縮の増加が、後の時点で減少する。末端の左心室内径は、左心室質量は3週間にわたって増加する。さらに、マウスの心臓は、イソプロテレノールの下で目に見えて大きな左心室の寸法を示すだけでなく、生理活性を処理したコントロールに対する線維症の量が多い。
術後の感染と罹患率を最小限に抑えるためには、生存手術中に無菌の外科環境を維持することが重要です。成功したモデル作成は、肥大、拡張、および機能不全の連続心エコー検査、ならびに収穫された心臓組織の組織学的および分子評価を介してex vivoによって生体内で評価することができる。この方法を、慢性β-アドレナリン刺激による心臓リモデリングの形質を評価するために、近血症マウスの100株以上に適用しました。
結果は公開され、すぐに入手できます。
