삼투압 펌프를 통해 이소프로테레놀의 만성 투여는 마우스의 고급 심부전의 변화를 재구성하는 데 널리 사용되어 왔다. 이 방법은 간단하고 LAD및 TAC와 같은 다른 모델보다 적은 외과 전문 지식이 필요합니다. 이 절차를 시연하는 것은 이빈 왕의 실험실에서 연구 과학자인 빈센트 렌 박사가 될 것입니다.
각 마우스의 체중을 계량 및 기록한 후 각 동물에 대해 적절한 양과 농도를 계산하고, 이소프로테레놀을 멸균 0.9%의 염화나트륨 120마이크로리터에 용해한다. 1분 동안 철저히 섞어 이소프로테레놀을 완전히 용해시키고, 마우스당 유동 기체와 함께 빈 삼투성 펌프 의 무게를 계량하고 기록합니다. 삼투압 펌프와 함께 제공되는 27 게이지, 무딘 팁 충전 튜브를 부착하고 마우스 당 이소 프로테레놀 용액의 120 마이크로 리터와 함께 1 밀리리터 주사기를로드합니다.
펌프를 똑바로 세워 펌프를 똑바로 세워 펌프 의 끝이 펌프 저장소 의 바닥 근처에 놓일 때까지 펌프 개구부를 통해 충전 튜브를 삽입하고, 이소프로테레놀 용액이 펌프 개구부로 채워질 때까지 주사기 플런저를 천천히 우울하게 한다. 펌프가 적재되면 충전 튜브를 조심스럽게 제거하고 과도한 용액을 닦아냅니다. 흐름 중재자를 다시 삽입하여 펌프를 닫고 과도한 솔루션을 닦아냅니다.
그런 다음 펌프의 무게에 따라 저수지 부피의 90% 이상이 채워졌는지 확인합니다. 가열 패드에 supine 위치에 마우스를 배치하고, 하부 복부에서 공기를 제거합니다. 외과 삼투질 펌프 이식의 경우 마취 된 마우스의 발가락 핀치에 대한 반응부족을 확인하고 동물의 눈에 연고를 적용하십시오.
노출된 피부를 적절한 소독제로 청소하고 1센티미터 의 중간선 피부 절개를 합니다. 무딘 말단 가위를 사용하여 기본 회막 벽에서 피부를 조심스럽게 해부하고 집게를 사용하여 기본 창자에서 간경 벽을 끌어 당깁니다. 미세 한 가위를 사용하여 복막 벽에 0.8 센티미터 구멍을 자르고 삼투성 펌프 흐름 중재자를 먼저 복막 구멍에 삽입하십시오.
펌프가 제자리에 있을 때, 5-0 흡수성 봉합사를 사용하여 각막 벽의 구멍을 닫고 6-0 비흡수성 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다. 그런 다음 동물을 홈 케이지로 되돌리기 전에 완전한 재수명까지 모니터링하여 전용 인큐베이터에 마우스를 배치합니다. 여기서, 선택한 심초음파 매개변수및 모델링할 예상 시간에 따라 주간 변경 사항에 대한 요약이 제시된다.
마우스 균주 사이에 변화가 관찰되지만, 평균적으로, 끝 디아스톨의 심실 중격 벽 두께와 첫 주에 분수 단축 증가하지만 이후 시간 포인트에 의해 감소. 마지막 디아스톨의 왼쪽 심실 내부 직경과 좌심실 질량은 3주 동안 증가합니다. 또한, 마우스 하트는 이소프로테레놀 하에서 눈에 띄게 더 큰 좌심실 챔버 치수를 보여주고, 식염수 처리 된 대조군에 비해 더 많은 양의 섬유증을 보여줍니다.
수술 후 감염 및 이환율을 최소화하기 위해 생존 수술 중 멸균 수술 환경을 유지하는 것이 중요합니다. 성공적인 모델 생성은 비대, 팽창 및 기능 장애에 대한 연쇄 에코카디그래피학뿐만 아니라 수확 된 심장 조직의 조직학적 및 분자 평가를 통해 전 생체 에 의해 생체 내에서 평가 될 수 있습니다. 우리는 만성 베타 부전 자극으로 인해 심장 리모델링 특성을 평가하기 위해 근친 마우스의 100 개 이상의 균주에이 방법을 적용했습니다.
결과는 게시되고 쉽게 사용할 수 있습니다.
