L’administration chronique de l’isoproterenol par l’intermédiaire d’une pompe osmotique a été employée couramment pour récapituler des changements dans l’insuffisance cardiaque avancée chez les souris. Cette méthode est simple et nécessite moins d’expertise chirurgicale que d’autres modèles, tels que le LAD et le TAC. Le Dr Vincent Ren, chercheur au laboratoire du Dr Yibin Wang, démontrera la procédure.
Après avoir pesé et enregistré le poids corporel de chaque souris, calculer la quantité et la concentration appropriées d’isoproterenol pour chaque animal, et dissoudre l’isoproterenol en 120 microlitres de chlorure stérile de sodium à 0,9 %. Bien mélanger pendant une minute pour solubiliser complètement l’isoproterenol, et peser et enregistrer le poids d’une pompe osmotique vide, avec et sans son modérateur de flux, par souris. Fixez un tube de remplissage à pointe émoussée de calibre 27 fourni avec les pompes osmotiques et chargez une seringue d’un millilitre avec 120 microlitres de la solution isoproterenol par souris.
Tenir une pompe en position verticale, insérer le tube de remplissage à travers l’ouverture de la pompe en haut jusqu’à ce que la pointe du tube de remplissage se trouve près du fond du réservoir de la pompe, et lentement déprimer le piston de seringue jusqu’à ce que la solution isoproterenol se remplit à l’ouverture de la pompe. Lorsque la pompe a été chargée, retirez soigneusement le tube de remplissage et essuyez l’excédent de solution. Insérez le modérateur de flux pour fermer la pompe et essuyez toute solution excédentaire.
Puis reweigh la pompe pour confirmer que plus de 90% du volume du réservoir a été rempli. Placez la souris en position supine sur un coussin chauffant et retirez l’air du bas-ventre. Pour l’implantation chirurgicale de pompe osmotique, confirmez un manque de réponse au pincement d’orteil dans une souris anesthésiée, et appliquez l’onguent aux yeux de l’animal.
Nettoyez la peau exposée avec un désinfectant approprié, et faire une incision de la peau midline d’un centimètre. Utilisez une paire de ciseaux émoussés pour disséquer soigneusement la peau des parois péritonéales sous-jacentes, et utilisez des forceps pour tirer les parois péritonéales loin de l’intestin sous-jacent. Utilisez de fines ciseaux pour couper un trou de 0,8 centimètre dans la paroi péritonéale, et insérez d’abord l’extrémité du modérateur de flux de pompe osmotique dans la cavité péritonéale.
Lorsque la pompe est en place, utilisez 5-0 sutures absorbables d’une manière interrompue pour fermer le trou dans la paroi péritonéale, et utiliser 6-0 sutures non absorbables pour fermer la peau. Placez ensuite la souris dans un incubateur dédié avec surveillance jusqu’à la pleine récumbence avant de retourner l’animal dans sa cage d’origine. Ici, un résumé des changements hebdomadaires basés sur les paramètres échocardiographiques sélectionnés et le temps prévu pour modéliser le développement sont présentés.
Bien que des variations soient observées entre les souches de souris, en moyenne, l’épaisseur de la paroi septale intertriculaire à la diastole de fin et le raccourcissement fractionnel augmentent la première semaine, mais diminuent par des points de temps ultérieurs. Le diamètre interne ventriculaire gauche au diastole d’extrémité et la masse ventriculaire gauche augmentent sur une période de trois semaines. En outre, les coeurs de souris démontrent des dimensions ventriculaires gauches visiblement plus grandes de chambre sous l’isoproterenol, aussi bien que de plus grandes quantités de fibrose par rapport aux contrôles salin-traités.
Il est essentiel de maintenir un environnement chirurgical stérile pendant la chirurgie de survie pour réduire au minimum l’infection postopératoire et la morbidité. La création réussie de modèle peut être évaluée in vivo par échocardiographie périodique pour l’hypertrophie, la dilatation, et le dysfonctionnement, aussi bien qu’ex vivo par l’évaluation histologique et moléculaire du tissu cardiaque moissé. Nous avons appliqué cette méthode à plus de 100 souches de souris consanguins pour évaluer les traits cardiaques de remodelage dus à la stimulation bêta-adrénergique chronique.
Les résultats sont publiés et facilement disponibles.
