ダニは、熱帯地域の家畜に大きなマイナスの経済的影響を及ぼす牛のダニとして知られている、出血性外寄生虫、リピセファルスマイクロプラスです。また、化学アカリシドの不適切な使用や伝統的な寄生虫に対するダニ集団の抵抗力の増加に起因する環境条件の低下や公衆衛生上の懸念が高まり、病原性真菌の使用などの代替制御方法に関する研究を刺激しています。これらの内因病原体は、キューティクルを通して節足動物の宿主に積極的に感染し、身体を植民地化する。
節足動物は真菌感染に対して異なる反応を示す可能性がある。節足動物の免疫システムは、体液性および細胞応答に分けられる。体液性応答は、ヘマグルチネーションプロセスと抗菌分子の産生を伴い、ヘモサイトは細胞性免疫応答を媒介する。
節足動物の免疫応答に関するほとんどの研究は昆虫を使用して報告され、ダニの応答はあまり探求されていないままです。また、病原体の接種およびダニのヘモリンフ採取は、節足動物の免疫応答をよりよく理解するために必要な広範な技術である。したがって、このビデオアドレス技術\接種、ヘモリンフの収集と処理を撮影するために使用されます。
マダニヘモサイトの採取は細胞の破壊、低血球値の取得、回収された細胞の低濃度などのいくつかの制限に直面しているため。細胞の構成と分析に直接感染する。ダニの集まりの後、魅惑的なメスを洗います。
水道水を使用し、500ミリリットルのガラスビーカーレシピエントで3分間0.5%次亜塩素酸ナトリウム溶液に浸します。キューティクルの衛生のために、それぞれ20人の女性と均質なグループで女性を分割します。各グループの3つの複製が実行されました。
メタリジウム・ロキシム・ブラストスポアを接種過程で使用した。プラスチックパラフィンフィルムの表面に5マイクロリットルメタリウムブラストスポ懸濁液の液体に追加します。接種プロセスを高速化するために、プラスチックパラフィンフィルム表面に複数の気泡を加えることができる、各気泡は5マイクロリットルに対応する。
1ミリメートルの超微細インスリン注射器と0.3ミリメートルの針を使用して、懸濁液を入れ、ダニに接種します。使用する前に、注射器からすべての空気を取り出すことを忘れないでください。5マイクロリットルの真菌懸濁液を、カタムとキャピチュラムの間のダニメスに接種する。
少量のヘモリンフが針切開後のフレーミング上に存在する可能性があります。空気を接種しないように注意してください。脚の太ももとメスの体の間に真菌懸濁液を持つ女性を、0.3ミリメートルの針に結合した1ミリリットルの超微細インスリン注射器を使用して接種する。
脚の大腿とダニの女性の体の間に接種が行われると、針の挿入後に大腿部に少量のヘモリンが存在する可能性があります。空気を接種しないように注意してください。羽毛注入のゴム部分を0.3ミリメートルの毛細管管およびフィルター先端にセットして、ヘモリンフの収集を行います。
0.3ミリメートルの針を使用して女性の手側のキューティクルを破壊します。混乱の後、ダニ体の前部に穏やかな圧力をかける。混乱部位からほとんど透明な液体プールを観察してください。
フィルターチップを通して、翼を持つ注入セットのゴム部分と0.3ミリメートルの毛管チューブに結合して液体を吸い込んで、ヘモリンフを収集します。これは、ミドガットを破壊し、ヘモリンパを汚染する可能性があるため、固定化中にダニの体をほとんど押し込まないでください。穏やかな圧力が汚染なしで液体を排出できるまで待ちます。
ダニを固定します。前脚の一部を切ります。1つ以上の脚をカットできるだけでなく、同じ脚も複数回切断することができます。
ダニの後部身体部分に穏やかな圧力をかける。カット側に透明な液体の泡が現れ、毛細管で回収します。これはミドガットを破壊し、ヘモリンパを汚染する可能性があるため、動員中にダニの体をほとんど押し付けないでください。
穏やかな圧力が汚染なしで液体を排出できるまで待ちます。ヘモリンフの収集後、以前に30マイクロリットルプロテアーゼカクテルと82マイクロリットル生理食塩水バッファーで満たされた1.5ミリリットルマイクロチューブに堆積させます。マイクロチューブは、ヘモリンパコレクション全体を通して氷の上に保管してください。
遠心分離サンプルと血球の軟質ペレットは、血中リンパ遠心分離後に形成されます。ヘモリンフ定量の場合、マイクロチューブ内の総量を数え、プロテアーゼカクテルと生理食糸バッファーの量を割引することによって得られるヘモリンフ量を定量化する。上清の無細胞のヘモリンパを慎重に取り除き、細胞を穏やかに再中断します。
ニューバウアー室に10マイクロリットルの再懸濁血血球を配置して、血球を定量化する。細胞に対して再懸濁液を用いた培養培地を用いた。ダニの前脚をカットし、ダニの後部の身体部分に穏やかな圧力をかけ、カット部位に透明な液体バブルが現れるのを観察する。
きれいな顕微鏡のスライドに直接、水リンパの滴を適用します。その後、適切な方法を使用して細胞を染色する。脚の太ももとダニの女性の体の間の接種はまた、ミドガットやマルピギ管などのダニの内臓に損傷を与える可能性があります。
ダニの中腸が後回りのヘモリンパコレクションで針によって破壊されると、得られた流体は赤く、透明ではない。これは、誤ったヘモリンパコレクションを示します。この場合、ヘモリンは汚染されたので廃棄されなければならない。
マダニが高負荷の病原体に自然に感染した場合、または接種された病原体によって引き起こされる死後の最終段階でも、浸透性汚染が観察される。後方集め後に得られる水回りの容積は、脚を通してコレクションで得られる容積よりも高い。汚染の容易さにもかかわらず、第1の採取方法では高い。
また、血球濃度は、後回りコレクションでも有意に高かった。正しい血球の収集が行われると、良好な塗抹標本が得られ、染色後に異なるヘモサイトを区別することが可能となる。このビデオは、病原体、特に病原菌のダニへの接種を行い、そのヘモリンフを収集する方法に関する情報を提供しました。
ここで提示された技術は、ダニの生理学、ダニ病理、およびダニの免疫応答に関する研究のための古典的なステップで非常に低い技術リソースを必要とします。節足動物細胞の正しい収穫、および無細胞のヘモリンパは、その後の研究のために信頼できる情報を提供するために重要である。そのため、これらの手法の実行で最も一般的な誤りに注意することも重要です。
さらに、本研究の提案は、得られた容積の差と汚染の確率を考慮して、脚の変形または切断を通じて、ヘモリンフ採取のより適切な部位を決定しなければならない。
