組織学的検査と免疫組織化学のための一体的な眼表面組織を得るための無傷の眼球の単離

私たちの研究室では、眼の発達と病気に焦点を当てています。このプロトコルは、解剖されたマウスヘッドから頭蓋骨と軌道骨を順次除去する方法を記述する。まぶた、眼表面、レンズ、およびレチナを一体に残す。このプロトコルは、眼表面教訓に興味を持っている眼科医に利益をもたらす。私はディアンレル・グオです, 顔の骨を解剖しながら、眼球の損傷を避けようとするときに可能性の高い闘争で技術を伝えるために.この解剖問題の主な利点は、眼表面上皮シートの完全性が十分に保持されており、眼表面の異なる部分が1つのセクションで占体または免疫染色によって調べることができるということです。柔らかい組織のすべての小さな骨や破片を切断してください。理由は、それ以外の場合は、組織セクションに瘢痕マークを引き起こす。マウスを安楽死させた後、まっすぐハサミを使って頭を切り落とし、鼻に対して腹腔内骨から始まる矢状中線に沿って二分します。二分した頭の各半分をきれいなシャー皿に入れ、鋭いはさみを使って顎と舌を切り落とします。視神経を切断して、視神経を切断する前に、視神経を切断します。そして、頭蓋骨の壁に取り付けられている嗅球を含むすべての脳組織を取り除きます。今、残りの組織のすべては、眼球に関連付けられている頭蓋骨と軌道骨のすべてを持っている必要があります。残りの部分をPBSで洗い、血液や毛の破片を取り除きます。4%パラホルムアルデヒドを含む50ミリリットルチューブに入れ、室温で回転させることで、組織を事前に固定します。接頭辞が完了したら、PBSで解剖された頭部を3回素早く洗い、毛髪や固定剤をさらに除去します。ティッシュを10センチメートルのシャーレに入れ、図1のテキストプロトコルで示された平面に沿って頭蓋骨を3つの部分に切ります。眼球とソケットは、頭蓋骨の中央部に、エスモイド、前頭、上顎骨の下に隠されています。エスモイドの骨を剥がし、正面および上顎骨を完全に露出させるために、4つのストレート鉗子の2組を使用してください。その後、地理的に4つの領域に頭蓋骨の表面を分割します。湾曲した鉗子の先端を各領域に水平に挿入して、上顎骨と前頭骨を連続して除去します。この後、根底にある涙骨とジューガルの骨が露出します。2つの骨と関連する皮下の筋肉と眼球を取り巻く脂肪を取り除きます。取り付けられたまぶたと皮膚を小さな正方形のブロックにトリミングして、組織の体積を減らし、埋め込むときに組織の配向を容易にします。眼球と関連組織を4%パラホルムアルデヒドに戻し、4%で一晩固定し続ける