Isolement de intact Globe oculaire pour obtenir le tissu de surface oculaire intégral pour l'examen histologique et l'immunohistochimie

Notre laboratoire se concentre sur le développement oculaire et les maladies. Ce protocole décrit une méthode pour enlever le crâne et les os orbitaux séquentiellement de la tête de souris disséquée. Laissant les paupières, la surface oculaire, la lentille et la rétine tous ensemble en un seul morceau. Le protocole bénéficiera aux ophtalmologistes qui s’intéressent à la didactique oculaire de surface. Je suis Dianlel Guo, pour dire la technique avec une lutte probable en essayant d’éviter l’endommagement du globe oculaire, tout en disséquant les os du visage. Le principal avantage de cette matière de dissection est que l’intégrité de la feuille épithéliale de surface oculaire est bien préservée et les différentes parties de la surface oculaire peuvent être examinées par histologie ou immunostaining dans une seule section. Assurez-vous de couper tous les petits os et débris des tissus mous. Raison, il causera des marques de cicatrices sur la section des tissus autrement. Après avoir euthanasié la souris, utilisez une paire de ciseaux droits pour couper la tête et la couper en deux le long de la ligne médiane sagittale à partir de l’os intrapariétal rostrally au nasal. Placer chaque moitié de la tête coupée en deux dans une boîte de Pétri propre et utiliser des ciseaux pointus pour couper la mâchoire et la langue. Libérez le nerf optique en le coupant du cerveau avant l’emplacement optique du chiasm. Et enlever tous les tissus cérébraux, y compris l’ampoule olfactive, qui est attaché à la paroi du crâne. Maintenant, tous les tissus restants auront tout le crâne et les os orbitaux associés au globe oculaire. Laver les parties restantes avec PBS pour nettoyer le sang et les débris de cheveux. Pré-fixer les tissus en les plaçant dans un tube de 50 millilitres contenant 4% de paraformaldéhyde et en les tournant à température ambiante. Une fois la préfixation terminée, lavez rapidement la tête disséquée en PBS trois fois pour éliminer davantage les poils cassés et les fixatifs. Placez le tissu dans une boîte de Pétri de 10 centimètres et coupez le crâne en trois parties le long des plans indiqués dans la figure un du protocole de texte. Le globe oculaire et la douille sont cachés dans la partie centrale du crâne sous les os éthmoid, frontaux et maxillaires. Utilisez deux paires de forceps droits numéro quatre pour décoller l’os éthhoïde et exposer complètement les os frontaux et maxillaires. Ensuite, divisez géographiquement la surface du crâne en quatre zones. Insérez la pointe des forceps incurvés horizontalement dans chaque zone pour enlever les os maxillaires et frontaux séquentiellement. Après cela, les os lacrimaux et juridiques sous-jacents seront exposés. Enlevez les deux os et les muscles et graisses sous-cutanés associés entourant le globe oculaire. Couper le globe oculaire avec les paupières attachées et la peau dans un petit bloc carré pour réduire le volume des tissus et faciliter l’orientation du tissu lors de l’intégration. Placez le globe oculaire et les tissus associés dans 4% de paraformaldéhyde et continuer à fixer pendant la nuit à 4