動脈内血圧モニタリングと気管切開による換気を用いたマウスの脳死誘導

ドナーの脳死後の寄付は固形臓器移植の主な原因であるが、脳機能の不可逆的な喪失は全身的な炎症反応につながる病態生理学的変化を誘発する。脳死誘導のこのマウスモデルは、脳死調節の経路を研究するために、多種多様な分析ツールとノックアウトモデルを使用することを可能にする。ペダル反射反応の欠如を確認し、上腹部の毛髪を除去した後の動脈カテーテル法では、露出した皮膚を70%エタノールで消毒し、解剖ハサミを使用して皮膚に中線切開を行います。

鉗子を使用して、鈍い下顎腺と首の筋肉組織を解剖し、一般的な頸動脈を露出させるために組織を分離する。3を置く 8-0右の共通頸動脈の下にシルク合字を配置し、近位合字にクランプを配置します。動脈に緊張をもたらし、流れが中断され、最も遠位の合字を閉じる。

切開の頭蓋面に小さな整形皮膚穴を通して26ゲージ動脈カテーテルを挿入する。内腔が大きすぎて逆流を減らし、3つの縫合糸でカテーテルを固定する場合は、カテーテルを鉗子で絞り、次に5-0モノフィラメントを使用して、前形成された皮膚の穴の近くの皮膚にカテーテルを固定します。気管切開術を行うために、鉗子を使用して口管前の筋肉を解剖し、2つの8-0を置く気管の下の絹の合字。

一方的な換気を避けるために2つの気管軟骨の間に換気チューブを挿入し、両方の準備された合字でチューブを固定し、6-0モノフィラメント非吸収性ランニング縫合糸で皮膚を閉じ、毎分150の周波数と200マイクロリットルの潮量でマウスを換気します。実験動物の脳死を誘発するには、マウスを起こしやすい位置に配置し、皮膚を鉗子で保持し、外科的はさみを使用して頭蓋骨から皮膚を取り除く。左頭頂皮質の上に1ミリメートル口径の穴の周りを掘削し、頭蓋骨の最終的な組織ブリッジを貫通するために鈍い鉗子を使用します。

鋭いエッジを取り除いた後、すべての空気を避難させた生理焼け目であらかじめ充填されたバルーンカテーテルを挿入します。カテーテルが完全に頭蓋腔内にある場合は、注射器ポンプを使用して、10〜15分の期間にわたって1分間に約0.1ミリメートル/分でカテーテルを膨らませます。脳死が起こったら、バルーンカテーテルの膨張を止め、低体温症を避けるためにマウスの上に加熱毛布を置きます。

脳死が確認された後、定期的に血圧を監視し、記録し、30分ごとに100マイクロリットルの生理食塩水を注入して動物の血圧を安定させる。脳死の4時間後、心臓を鼓動せずに動物を排除し、標準的なプロトコルに従って目的のマウスの器官および組織を収穫する。脳死誘導後、血圧は最初の高血圧のピークを示し、続いて長期の降圧相を示す。

もう一つの確立された観察は、脳死誘導が免疫系の活性化につながるということです。実際、このモデルにおける脳死の4時間後、免疫マーカーの器官特異的なアップレギュレーションがmRNAレベルで観察される。脳死の事前定義された期間の後、臓器は、その直接分析のため、またはその後の臓器移植のために収穫され得る。

このモデルは、脳死誘発傷害の影響に関する詳細な研究を可能にし、すでに補完活性化および白血球移動に関する新しい洞察を明らかにしている。