マウスにおける下腹部および後肢の脳閉回路灌流における確立

このプロトコルは、私たちの回路に含まれる臓器内の薬物送達と免疫相互作用に関する質問に答えるために使用することができます。この技術は、主なクリアランス器官を避けながら、従来の元生体法では浸透することができない器官の灌流を可能にする。手術を開始する前に、循環水浴と水ジャケットのコンポーネントのすべてを摂氏37度に設定します。

チューブが洗浄されていることを確認し、パーフューズトの貯蔵所として湿ったチャンバー内の気泡トラップを使用して、パーフューズの体積を制限します。カテーテル法を実行するには、ペダル反射への応答の欠如を確認し、8〜10週齢の男性麻酔球でマウスを参照してください。そして、マウスを発泡スチロールボードの上の上に置き、頭を6時に置きます。

動物の手足をテープで固定し、イソプロピルアルコールで腹部を拭きます。T字型の切開を腹部に作り、電気凝固を使用して切開の縁の周りの出血を止める。腹部の右側に胃、小腸および結腸を押し、腹部大動脈、大動脈、大静脈および一般的な腸骨およびイリオルバール動脈および静脈を明らかにする。

解剖顕微鏡の下で、4-Oシルク縫合糸で卵巣およびイリオルバール動脈および静脈を見つけてリゲートする。腹部大動脈と下の大静脈の下に2つの4-Oシルク縫合糸をループします, 約1ミリメートル離れて、腸骨動脈と静脈の上に約1センチメートル.その後、腸骨容器に最も近い縫合糸で緩いうなずきを作ります。

針ホルダーを使用して、下の大静脈と腹部大動脈の両方を水平に整列させ、伸ばします。そして、血管を伸ばしたままにしておくと、24ゲージの翼を持つシールドIVカテーテルを使用して腹部大動脈を穿刺する。針が約1ミリメートルを血管に入り込み、ボタンを押して針の芯を引き込み、カテーテルを容器に約5ミリメートル挿入します。

同様に、下の大静脈に5ミリメートルのカテーテルを挿入します。そして、カテーテル化された容器の周りに両方の縫合糸を結ぶ。次に、瞬時接着剤を適用して、カテーテルをスピンaに固定化し、腹部の器官を交換します。

灌流システムを設定するには、水ジャケット湿ったチャンバーのシリコンパッドにマウスを置き、カテーテルの翼を19ゲージの針でパッドに固定します。動脈カテーテル入口を、温める前の灌流バッファーで満たします。止血鉗子を使用し、ネジオンコネクタを使用してカテーテルの入口をチューブに取り付け、入口灌流チューブをテープで固定します。

蠕動流量を毎分0.6ミリリットルに調整し、灌流流出を5〜10分間開放し、静脈カテーテルを通して血液を洗い流す。いくつかの血栓は、出口カテーテルに存在し、透過液バッファーで血栓を洗い流し、静脈カテーテルの端部に回路を閉じるためにコネクタのネジを使用します。その後、湿ったチャンバーを最大2時間の灌流のために事前に温めた蓋で覆い、定期的にパーフューズトのレベルをチェックします。

ここで、Hoechst 33342およびDyLight-649レクチンを含むリンジャー溶液との灌流後の共焦点画像が示されている。筋肉、骨髄、精巣、膀胱、前立腺および足の皮膚は、典型的には、効率的な核および血管染色を示す。ヘマトキシリンおよびエオシン染色は、正常なサーミック灌流の3時間後に、明らかな組織損傷を伴わない器官の正常な紅潮を明らかにする。

このモデルは、生理学的に無関係な環境で薬物取り込み経路を理解するために使用することができる。例えば、薬物蓄積における血清成分の役割を理解する。私たちは、皮膚中のリポソーム蓄積のメカニズムを理解するために、システムを使用しています。