エクスビボ マウスの門脈を通る肝臓灌流

このビデオは、十分な厳密さと再現性で代謝肝臓研究を行うために開発された合理化された手順を示しており、生体内灌流研究のための肝切除を行うためのガイドとして役立ちます。この技術は、疾患モデルにおける代謝産物の代謝産物における機能を検出するためのリアルタイム代謝に最もよく適用される。灌流は、肝臓に利用可能な栄養素やホルモンの正確な制御を可能にします。

この技術は治療に向けられていませんが、肝臓灌流は、糖尿病、NAFLD、NASHなどの疾患の肝代謝に対する病因および影響を理解するのに役立ちます。新しい医薬品が開発されるにつれて、肝中枢エネルギー代謝を評価する方法が不可欠になっています。この方法は、癌を含むいくつかの疾患のモデルおよび疾患進行のいくつかの異なる段階で使用することができる。

まず、麻酔の誘発後にマウスの鼻を鼻円錐形に入れ、その足をテープで留めます。皮下注射により、前腸骨頂部に両側にリドカインを投与する。つま先のピンチテストを実行して、すべての痛み反射がないことを確認します。

幅3センチの切開をして内臓を露出させるセリオトミーを行う。剣状突起をクランプして牽引力を引っ張る止血剤を使用して切開部を広げる。綿の先端をあけたアプリケーターを使用して、門脈を覆っている小腸と大腸をきれいにします。

肝臓近位の門脈のアーチの下に絹の縫合糸を配置する。2−0の縫合糸を用いて肝臓から遠位の下腸間膜静脈の近位または遠位に第2の絹縫合糸を配置する。縫合糸が所定の位置に収まったら、22ゲージのカテーテルで門脈をカニューレし、ベベルを上向きに保ちます。

門脈を15度以下の角度で入力します。最初の縫合糸をカテーテルタッパーの後ろに結びます。門脈がカニューレされた後、門脈の枝から遠位2〜3ミリメートルのカテーテルを絹縫合糸で固定する。

カテーテルの下部を第2の縫合糸で固定する。縫合糸で結び目を結び、門脈の遠位部および周囲組織にカテーテルを固定する。カテーテルが固定されたら、長さ38.1ミリメートルの27ゲージ針を備えた1ミリリットルのシリンジをカテーテルに挿入し、血液や気泡を洗い流します。

固定ストップコックを備えた内径1ミリメートルと外径5ミリメートルのシリコーンチューブを使用して、灌流カラムをカテーテルに結合し、肝臓へのバッファーの流れを可能にし、灌流の開始をマークします。タイマー開始後、下大静脈にハサミを用いた切開により血管圧の上昇を緩和する。肝臓を流れる灌流液の流れを、ピンクや赤から淡黄色への肝臓色の均質な変化を観察して確認します。

流れが確認されたら、周囲の組織から胃、小腸、大腸、右腎臓を切除します。外科助手の助けを借りて、外科医が頭頂腹膜および胸部組織を切断して肝臓を切除するように、腹腔および胸腔の周りに肝臓を操縦する。肝臓を上方に持ち上げ、肝臓を所定の位置に保持している残りの結合組織をはさみで切断する。

見やすくするために肝臓をゆっくりと操作します。流量と酸素消費量の測定は、肝臓の健康と機能を監視するために不可欠です。摂食された肝臓と絶食した肝臓の間には酸素消費量にわずかな違いがあることが多く、これは絶食した肝臓の糖新生によって課せられるエネルギー需要の増加に起因する可能性があります。

最も重要なステップには、カテーテルを15度の角度で挿入すること、カテーテル先端を視覚化すること、縫合糸を縛るときに手首と肩を転がすこと、門脈のねじれを避けることが含まれます。摘出した組織は、任意の数の生化学的または分析的アプローチを用いて灌流後に研究することができる。リアルタイムMRIおよび分光法と組み合わせたエクスビボ灌流は、リアルタイムでの代謝フラックスの測定を可能にします。

当然のことながら、これは疾患に応答した制御状態からのフラックスの摂動にまで及ぶ。