마우스에서 하복부 장기 및 뒷다리의 시투 폐쇄 회로 관류 에 설립

이 프로토콜은 우리의 회로에 포함된 기관 내의 약물 전달 및 면역 상호 작용에 대한 질문에 대답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술은 주요 클리어런스 장기를 피하면서 전통적인 전 생체 내 방법에 의해 퍼퓨즈할 수 없는 장기의 관류를 허용합니다. 수술을 시작하기 전에 순환 하는 수조와 모든 물 자켓 구성 요소를 설정 하 고 37 섭씨.

튜브가 세척되어 있는지 확인하고, 난투부부로 습한 챔버 내에서 버블 트랩을 사용하여 난파부 부피를 제한한다. 카테터화 절차를 수행하려면 8~10주 된 남성 마취 전구에서 페달 반사에 대한 반응부족을 확인하여 마우스를 참조하십시오. 그리고 6시에 머리를 가진 스티로폼 보드에 마우스를 배치합니다.

동물의 팔다리를 테이프로 고정시키고 이소프로필 알코올로 복부를 닦아냅니다. 절개 가장자리 주위에 출혈을 중지 전기 응고를 사용하여 복부에 T 모양의 절개를합니다. 복부 대동맥, 베나 카바 및 일반적인 일리악 및 일리오룸바 동맥과 정맥을 드러내기 위해 복부, 제주넘 및 결장들을 복부의 오른쪽으로 밀어 넣습니다.

해부 현미경에서 난소와 일리오룸바 동맥과 정맥을 4-O 실크 봉합사로 찾아 리디게이트합니다. 복부 대동맥 아래 의 4-O 실크 봉합사 2개와 열등한 베나 카바(1mm 이상) 1mm 떨어져 있습니다. 그런 다음 일강 혈관에 가장 가까운 봉합사에서 느슨한 고개를 끄덕이십시오.

바늘 홀더를 사용하여 열등한 베나 카바와 복부 대어타를 수평으로 정렬하고 스트레칭하십시오. 그리고, 혈관을 뻗어 유지, 복부 대어를 펑크 24 게이지 날개 방패 IV 카테터를 사용합니다. 바늘이 용기에 약 1밀리미터 침투하자마자 버튼을 눌러 바늘 코어를 철회하고 카테터를 용기에 약 5밀리미터 삽입합니다.

카테터를 5밀리미터의 베나카카바에 같은 방식으로 삽입합니다. 그리고 카테터로 된 용기 주위에 두 봉합사를 묶는다. 그런 다음 즉시 접착제를 적용하여 카테터를 발기스핀에 고정시키고 복부 장기를 교체하십시오.

관류 시스템을 설정하려면 마우스를 워터 재킷 습한 챔버의 실리콘 패드에 놓고 카테터 날개를 19 게이지 바늘로 패드에 고정시하십시오. 동맥 카테터 입구를 미리 데워진 관류 버퍼로 채웁니다. 혈전성 집게와 나사 온 커넥터를 사용하여 카테터 입구를 튜브에 부착하고 테이프로 유입 구류 튜브를 고정합니다.

연동 유량을 분당 0.6 밀리리터로 조정하고, 관류 유출을 5~10분 동안 열어 두고 정맥 카테터를 통해 혈액을 씻어낸다. 일부 혈전은 콘센트 카테터에 존재하고, 난투 버퍼로 혈전을 플러시하고, 커넥터에 나사를 사용하여 정맥 카테터의 끝에 부착하여 회로를 닫습니다. 그런 다음 습한 챔버를 최대 2시간 동안 미리 데워진 뚜껑으로 덮고 정기적으로 후두기 수준을 확인합니다.

여기서, Hoechst 33342 및 DyLight-649 렉틴을 포함하는 링거 용액을 관성한 후 공초점 이미지가 표시됩니다. 근육, 골수, 고환, 방광, 전립선 및 발 피부는 일반적으로 효율적인 핵 및 혈관 염색을 보여줍니다. 헤마톡시린과 유신은 정상적인 조직 관류 3시간 후에 이 조직의 염색을 통해 명백한 조직 손상 없이 장기의 성공적인 홍조를 드러낸다.

이 모델은 생리적으로 관련이 없는 환경에서 약물 섭취 경로를 이해하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 약물 축적에서 혈청 성분의 역할을 이해한다. 우리는 피부를 심혈성 축적 메커니즘을 이해하기 위해 시스템을 사용하고 있습니다.