鉄レドックス種(Fe(II)、Fe(III)の定量化のためのキャピラリー電気泳動誘導結合プラズマ質量分析(CE-ICP-MS)のセットアップ

過剰な鉄は、フェロプトシスとして知られている脂質過酸化による酸化ストレスや細胞死など、細胞内で壊滅的な影響を引き起こす可能性のある遊離酸化活性鉄2プラスをもたらす。鉄と鉄の定量測定は、これらの有害なプロセスに対するより深い洞察を得るための鍵となります。このCE-ICP-Ms技術は、鉄-酸化還元種を定量化するために必要な高速分析と低定量限界の両方を提供します。

まず、低い自己吸引容積のネブライザーを選択し、自家製のインターフェイスをマウントするための適切な部品を準備します。下の3方向ルアーバーの左端をオスコネクタに接続し、オスコネクタを上部3ウェイルアーの中央接続に接続して、2つの3ウェイメスルアーコネクタをオスコーンルアーコネクタと接続します。次に、白金線の上に1センチメートルのチューブを置き、1センチメートルのシリコーンチューブを使用して、オスのルアーコネクタの最初のチューブとノズルを接続します。

アセンブリをねじ回転により、下部 3 方向ルアー コネクタの中間接続に固定します。1センチチューブをCEキャピラリーの出口に押し込み、端部から8〜9センチメートルの位置に置き、シリコンチューブでオスのルアーコネクタのノズルに接続します。上部 3 方向 T コネクタのバーを通してアセンブリ全体を配置し、オスのルアー コネクタとメスの 3 方向ルアー コネクタの左端をねじ回転で固定します。

その後、オスのルアーコネクタのノズルで25センチメートルのシリコーンチューブを固定し、下部3ウェイルアーコネクタからバーの底部にアセンブリ全体を固定します。1センチのシリコーンチューブを、ネブライザーの端に5ミリメートルしっかりと押します。2番目の男性のルアーコーンコネクタは、チューブの突出部分に差し込まれている間。

突き出たCEキャピラリーのインターフェース部分をネブライザーのオスコーンに移動し、オスコーンとネブライザーキャピラリーのより広い部分を慎重にキャピラリーに挿入します。必要に応じて、左手の男性ルアーを緩め、付属のチューブを持つルアーを必要な位置に移動し、それを再インストールすることによって、突き出たキャピラリーの長さを調整します。上の女性の三方のルアーコネクタは、雄のコーンにしっかりとフィットする必要があります。

セットアップが完了したら、ICP-Ms を使用して続行します。校正曲線は、鉄3種と鉄2種の酸化還元種のために作成された。検出限界は鉄2の1リットル当たり3.1マイクログラム、鉄3の1リットル当たり3.2マイクログラムであり、直線性は1リットル当たり150マイクログラムまで実証された。

SH-SY5Y細胞リサテの分析は、幾分高い導電性のために鉄の酸化還元種のためのわずかに遅い移動を示した。鉄3と鉄2の測定濃度は、それぞれ1リットル当たり330マイクログラム、1リットル当たり84マイクログラムであった。鉄の2対3の比率が0.25になります。

このプロトコルの最も重要なステップは、マウントされたインターフェイスを介して突き出たCE毛細管の慎重な挿入とネブライザー毛細管に関連する適切な位置です。ここで提示した方法は、鉄依存分子プロセスに対する洞察を深める有望なツールとなり得る。慎重に設計された研究は、鉄2プラス、鉄3プラス定量が神経変性および癌疾患の文脈で鉄媒介致死的損傷のリスクがある組織を特定する潜在的なバイオマーカーとして役立つかどうかを検証するために必要です。