化学会社が新しい化学物質や他の材料を市場に投入したいと考えている場合、一連の環境毒性試験からデータを提供する必要があります。藻類検定は、実行する必要がある3つの必須テストの1つです。藻類のテストは、実行するのが非常に困難であるという事実に苦しんでいます。
このため、我々は、LEVITATTのテストプラットフォームを開発しました。LEVITATTは、LEDライトを使用して、過度の発熱の問題を回避します。さらに、均一な光場を保証します。
これは、藻類のテストを実行するために多くのスペースを必要としないことを意味し、コンパクトなサイズを有するが、同時に、それは、試験の前、中、および後に化学分析と特性を実行するのに十分なサンプル量を使用することができます。これは、ナノ材料をテストする際に特に重要です。本ビデオでは、ナノ材料やその他の難しい物質の藻類毒性試験に対するLEVITATTの使用について説明します。
デモは、次の 4 つの手順で構成されます。まず、LEVITATT のコンポーネントについて説明します。第2のステップは、藻類増殖培地用の溶液を調製することです。
そして第3のステップは、藻類毒性試験を行う方法の手順の概要を示す。最後のステップは、フルオロメーターによる藻類バイオマスの増加を測定することです。レビタットは部屋の温度管理されたキャビネットに置くことができる。
これにより、露光を通して安定した温度を実現します。この設定は、試験中にサンプルの回転を可能にするために軌道シェーカーに配置されます。試験は、4ミリリットル露光媒体を含む20ミリリットルシンチレーションバイアルで行われる。
穴が開けたネジキャップは、露光時に空気とCO2交換を可能にします。LEDソースは2つのプラスチックシートに挟まれ、各ケーシングの中央に位置しています。配置により、均一な照明フィールドが作成され、サンプル間のシェーディングが最小限に抑えられます。
各ケースはクランプと取付けられ、5つまでのサンプルを握ることができる。コンパクトサイズにより、実験の実行に必要なスペースを最小限に抑えることができます。ストック溶液を調製するには、各化合物の適切な量を計量する。
ストック溶液は、藻類の成長に不可欠な様々な塩で構成されています。適切な量の塩を計量すると、超純水で希釈されます。ストック溶液は、濾過またはオートクレーブによって滅菌されます。
滅菌後、ストック液は摂氏4度で暗闇の中に貯蔵することができる。一連の暴露濃度を準備する。露光濃度間の係数は3.2を超えてはなりません。
指数関数的に成長する藻類の適切な量は、各試験濃度に追加されます。最終的な細胞密度は、ミリリットル当たり約10,000藻類細胞である必要があります。テストの有効性基準を満たすために、プレカルチャーが指数関数的に成長していることが重要です。
測定バイアルは、サンプリング前に藻類と化合物の均質な分布を可能にするために混合される。サンプルはビーカーに注がれ、4ミリリットルは20ミリリットルのシンチレーションバイアルにピッピングされる。シンチレーションバイアルは現在キャップされています。
各濃度からピペット0.4ミリリットル。1.6ミリリットルのアセトンを加え、細胞壁を破壊し、クロロフィルを液相に放出します。各ガラスバイアルは、現在、保存中にアセトンの蒸発を避けるためにしっかりと近づいています。
キャップシンチレーションバイアルは現在、LEVITATTでランダムに分布し、72時間インキュベートされています。インキュベーションの開始と終了時の光強度と温度を測定し、希望するガイドラインに準拠していることを確認します。サブサンプリングは、各シンチレーションバイアルからガラスバイアルに0.4ミリリットルをピペット処理することによって24時間間隔で行われます。
細胞壁を破壊し、クロロフィルを液相に放出するために160万アセトンを加えます。アセトンを加えた後、しっかりと蓋をねじ込み、分析するまでサンプルを暗闇の中に置きます。蛍光計を使用して、試験期間を通じて取得したサンプル中のバイオマスを定量化します。
蛍光計の設定は、励起波長として420ナノメートル、発光波長は671ナノメートルでなければなりません。個々のサンプルは3回測定され、相対値が示されます。フルオロメーターからの相対値は、さらなるデータ処理に使用される成長率を計算するために使用されます。
統計ソフトウェアを使用して、計算された成長率データに非線形回帰曲線を適合させます。非線形回帰曲線の例として、実行可能関数の対数ロジスティックが挙げられます。関連付けられた 95% 信頼区間は、モデル適合と共に表示されます。
10、20、50%非効率などの定期的に有効な濃度値を使用して、環境毒性試験の結果を報告します。結論として、LEVITATTは国際的な標準化されたガイドラインに準拠した規則的な化学薬品の藻類毒性試験のための密集したプラットホームを提供する。さらに、セットアップは、ナノ材料や着色された物質などの藻類に向かって光の通過を妨げる困難な物質のテストのための堅牢なプラットフォームを提供します。
