このシステムにより、研究者は光遺伝学的実験用の安価で汎用性の高い照明システムを簡単に構築できます。この技術の利点には、可視近赤外スペクトルにまたがる利用可能な波長でLED照明タイミングをプログラムできること、およびLEDをさまざまな状況で使用できることが含まれます電気回路を構築するには、プリント回路基板を補助の手にクリップし、ジャンパー線を挿入し、それらを接続してA1およびA3ピンホールをアースに形成します。 D2ジャンパー線をD6ピンホールに接続し、電源と7番のジャンパー線をA7ピンホールに接続します。端子を45度曲げて、磁束を追加します。
はんだ付け後、ワイヤーの裏側をトリミングします。はんだ付けされたメス線の一方の端をワイヤコネクタにA5穴に挿入します。次に、抵抗器の一端をA5穴に接続します。
コネクタのもう一方の端をアースに接続します。次に、抵抗器のもう一方の端をグランドに接続し、接続をはんだ付けします。Arduinoコネクタの場合は、ワイヤの端をワイヤコネクタに圧着し、圧着された端を長方形のコネクタに押し込みます。
LEDを設定するには、上からはんだを加えながら、下から加熱してワイヤーを錫メッキします。大きなはんだ付けチップの上にたっぷりのはんだを置き、チップを使用してフラックスを含む接点のLEDベースを加熱します。数秒後、各接点にはんだを個別にドラッグし、ヘアクリップを使用して黒いワイヤーをカソードに固定します。
大きなはんだ付けチップにたっぷりのはんだを置き、LEDベースのはんだが溶けるまでチップをワイヤーに押し付けます。ワイヤーを所定の位置に保持しながら、ワイヤーを押したままはんだごてを取り外します。LED接続用のパッドに少量のはんだペーストを置き、鉗子を使用してLEDをパッドの上に置きます。
事前に錫メッキされた赤いワイヤーをアノードに保持し、ヘアクリップを使用してワイヤーをクリップします。示されているように大きな先端にはんだを追加し、LEDベースのはんだが溶けてはんだペーストが溶けて銀色になるまで、先端を接続に押し付けます。LEDワイヤーを作成するには、長さにカットされたワイヤーの上に4.76ミリメートルのシュリンクチューブを配置し、ワイヤー対ワイヤコネクタの上に3.18ミリメートルのシュリンクチューブを配置します。
ワイヤの端を剥がしてフラックスを追加します。助け手を使ってワイヤをワイヤにクリップし、コネクタの端を1本のワイヤの端でねじります。材料をはんだ付けし、もう一方のワイヤを同じ方法でセットアップに取り付けてはんだ付けします。
次に、LEDベースの下にテープでLEDワイヤーを補助手にクリップします。次に、製造元の指示に従ってエポキシを混合し、はんだ付けされたLEDの上部にエポキシを広げます。スペードドリルビットを使用して、LEDを配置するボックスの上部に1.5センチメートルの穴を開け、高速回転ツールを使用して穴の片側にノッチを作り、LEDワイヤー用のスペースを作ります。
LEDが照らす穴を覆うブラックボックスに25〜30ミリメートルのプライバシーフィルムをテープで留め、ブラックボックスの外側のLEDを穴の上にテープで留めます。4つのLED制御システムの場合、ボックスの蓋に3.81センチメートル離して0.83センチメートルの穴を4つ開け、高速回転ツールを使用して、左上隅に1.19 x 1.90センチメートルの長方形の穴を開けます。スペードドリルビットを使用して、ボックスの背面に1.5センチメートルの穴を開け、グロメットを穴に挿入します。
コンピュータ制御のLEDの場合、ボックス内のマイクロコントローラが接着される領域とマイクロコントローラホルダの底面をサンドペーパーで表します。マイクロコントローラをホルダにスナップし、ホルダとボックスを一緒にエポキシ化してから、ホルダをブラックボックスに固定します。次に、クリップに両面テープを置き、クリップをボックス内に固定します。
フィコシアニンビリンを発現するがフィコシアニンBを発現しないようにトランスフェクトされたサンプルでは、レポーターDNAの量が増えるにつれて漏れが増加します。さらに、フィコシアニンビリンクロモファー産生プラスミドを含むフィトクロムB遺伝子スイッチ全体を遠赤色光で照射すると、トランスフェクションミックス内のレポーター構築物の量の増加とともにルシフェラーゼ発現も増加します。同様に、光感受性細胞が赤色光で照らされると、ルシフェラーゼ発現もレポーター量の増加とともに増加する。
赤色光処理細胞の誘導レベルを遠赤色光処理細胞と比較すると、レポーターの量の増加に伴ってフォールド活性化のわずかな減少が見出される。電気回路を構築するときは、各ステップを注意深く実行し、各コンポーネントをはんだ付けする前に、ピンホール番号を行ごとに再確認することが不可欠です。このプロトコルは、さまざまな波長を使用した多くの種類のサンプルまたは光遺伝学的ツールの光刺激に使用でき、照明スケジュールのプログラミングを可能にします。
