Sistem, araştırmacıların optogenetik deneyler için ucuz ve çok yönlü bir aydınlatma sistemini kolayca inşa etmelerini sağlar. Bu tekniğin avantajları, LED aydınlatma zamanlamasını, görünür yakın IR spektrumunu kapsayan mevcut dalga boylarıyla programlama yeteneğini ve LED'lerin çeşitli bağlamlarda kullanılabileceğini içerir Bir elektrik devresi oluşturmak için, baskılı devre kartını yardım ellerine klipsleyin ve jumper tellerini yerleştirin, bunları A1 ve A3 iğne deliklerini oluşturacak şekilde birbirine bağlayın. D2 jumper teli D6 iğne deliğine ve güç kaynağı artı yedi numaralı jumper kablosu A7 iğne deliğine girer. Terminalleri 45 derece bükün ve akı ekleyin.
Lehimlemeden sonra, tellerin arkalarını kesin. Lehimli dişi telin bir ucunu konektörü A5 deliğine bağlayın. Ardından direncin bir ucunu A5 deliğine bağlayın.
Konektörün diğer ucunu toprağa bağlayın. Ardından direncin diğer ucunu toprağa bağlayın ve bağlantıyı lehimleyin. Arduino konektörü için, telin uçlarını kablo konektörlerine sıkın ve kıvrımlı uçları dikdörtgen konektörden geçirin.
LED'leri ayarlamak için, üstten lehim eklerken aşağıdan ısıtarak bir tel teneke kutulayın. Büyük lehimleme ucunun üzerine bol miktarda lehim yerleştirin ve LED tabanı akı içeren temasta ısıtmak için ucu kullanın. Birkaç saniye sonra, lehimi her temas boyunca ayrı ayrı sürükleyin ve siyah teli bir saç tokası kullanarak katoda sabitleyin.
Büyük lehimleme ucuna bol miktarda lehim yerleştirin ve LED tabanındaki lehim eriyene kadar ucu telin üzerine bastırın. Teli basılı tutun ve teli yerinde tutarken havyayı çıkarın. LED bağlantıları için pedlerin üzerine az miktarda lehim macunu yerleştirin ve LED'i pedlerin üzerine yerleştirmek için forseps kullanın.
Önceden konserve edilmiş kırmızı teli anot üzerinde tutun ve teli kesmek için bir saç tokası kullanın. Gösterildiği gibi büyük uca lehim ekleyin ve LED tabanındaki lehim eriyene ve lehim macunu eriyip gümüş olana kadar ucu bağlantıya bastırın. LED telleri yapmak için, uzunluğa kadar kesilmiş telin üzerine 4,76 milimetrelik bir büzülme tüpü ve tel konektörü için tel üzerine 3,18 milimetrelik bir büzülme tüpü yerleştirin.
Şeritleyin ve tel uçlarına akı ekleyin. Teli kabloya bağlamak için yardım ellerini kullanın ve konektör ucunu bir tel ucuyla döndürün. Malzemeleri birlikte lehimleyin ve diğer teli kuruluma aynı şekilde takın ve lehimleyin.
Ardından LED kablolarını, LED tabanının altındaki bantla yardım ellerine klipsleyin. Daha sonra, epoksiyi üreticinin talimatlarına göre karıştırın ve epoksiyi lehimli LED'in üstüne yayın. Kürek matkap ucunu kullanarak, LED'in yerleştirileceği kutunun üstünden 1,5 santimetrelik bir delik açın ve LED teline yer açmak için deliğin bir tarafında bir çentik yapmak için yüksek hızlı bir döner alet kullanın.
LED'in aydınlatacağı deliği kaplayan kara kutuya 25 ila 30 milimetrelik bir gizlilik filmi parçası bantlayın ve LED'i deliğin üstündeki kara kutunun dışına bantlayın. Dört LED kontrol sistemi için, kutunun kapağına 3,81 santimetre arayla dört adet 0,83 santimetre delik açın ve sol üst köşeye 1,19 x 1,90 santimetrelik dikdörtgen bir delik açmak için yüksek hızlı bir döner alet kullanın. Bir kürek matkap ucu kullanarak, kutunun arkasına 1,5 santimetrelik bir delik açın ve deliğe bir rommet yerleştirin.
Bilgisayar kontrollü LED'ler için, mikrodenetleyicinin yapıştırılacağı alanı zımpara kağıdı kutuya ve mikrodenetleyici tutucusunun alt tarafına yerleştirin. Mikrodenetleyiciyi tutucunun üzerine oturtun, ardından tutucuyu kara kutuya sabitlemeden önce tutucuyu ve kutuyu epoksi yapın. Ardından klipsin üzerine çift taraflı bant yerleştirin ve klibi kutunun içine sabitleyin.
Fitokrom B'yi eksprese etmek için transfekte edilen ancak fikosiyanin bilin olmayan örneklerde, muhabir DNA miktarı arttıkça sızıntı artar. Ek olarak, fikosiyanin iki krom üreten plazmid de dahil olmak üzere tüm fitokrom B gen anahtarı uzak kırmızı ışıkla aydınlatıldığında, lusiferaz ekspresyonu da transfeksiyon karışımı içindeki muhabir yapısının artan miktarları ile artar. Benzer şekilde, ışığa duyarlı hücreler kırmızı ışıkla aydınlatıldığında, lusiferaz ekspresyonu da artan muhabir miktarı ile artar.
Kırmızı ışıkla tedavi edilen hücrelerin indüksiyon seviyelerini uzak kırmızı ışıkla tedavi edilen hücrelerle karşılaştırırken, artan miktarda muhabirle birlikte kıvrım aktivasyonunda küçük bir azalma bulunur. Elektrik devresini oluştururken her adımı dikkatlice takip etmek ve her bir bileşeni lehimlemeden önce iğne deliği numaralarını satır satır iki kez kontrol etmek önemlidir. Bu protokol, çeşitli dalga boyları kullanarak birçok numune türünün veya optogenetik araçların optik stimülasyonu için kullanılabilir ve aydınlatma programlarının programlanmasına izin verir.
