Система позволяет исследователям легко построить недорогую и универсальную систему освещения для оптогенетических экспериментов. Преимущества этого метода включают в себя возможность программирования синхронизации светодиодной подсветки с доступными длинами волн, которые охватывают видимый ближний ИК-спектр, и то, что светодиоды могут использоваться в различных контекстах Чтобы построить электрическую схему, прикрепите печатную плату к рукам помощи и вставьте провода перемычек, соединив их для формирования точечных отверстий A1 и A3 к земле, провод перемычки D2 в точечное отверстие D6, а блок питания плюс номер семь проводов перемычки в точечное отверстие A7. Согните клеммы на 45 градусов и добавьте флюс.
После пайки обрежьте спинки проводов. Вставьте один конец припаянного гнездового провода к разъему в отверстие A5. Затем подключите один конец резистора к отверстию A5.
Подключите другой конец разъема к заземлению. Затем подключите другой конец резистора к земле и припаяйте соединение. Для разъема Arduino обжимайте концы провода к проводным разъемам и проталкивайте обжатые концы через прямоугольный разъем.
Чтобы настроить светодиоды, наклейте проволоку, нагревая снизу, добавляя припой сверху. Поместите большое количество припоя на большой паяльный наконечник и используйте наконечник для нагрева светодиодного основания на контакте, содержащем флюс. Через несколько секунд индивидуально перетащите припой через каждый контакт и закрепите черный провод на катоде с помощью заколки для волос.
Поместите большое количество припоя на большой паяльный наконечник и прижмите наконечник к проводу, пока припой на основе светодиода не расплавится. Удерживайте проволоку и извлеките паяльник, удерживая проволоку на месте. Поместите небольшое количество паяльной пасты на прокладки для светодиодных соединений и используйте щипцы, чтобы поместить светодиод над прокладками.
Держите предварительно очищенную красную проволоку на аноде и используйте заколку для волос, чтобы зажать проволоку. Добавьте припой к большому наконечнику, как показано на рисунке, и прижмите наконечник к соединению, пока припой на основе светодиода не расплавится, а паяльная паста не расплавится и не станет серебристой. Для изготовления светодиодных проводов поместите 4,76-миллиметровую термоусадочную трубку над проволокой, разрезанной по длине, и 3,18-миллиметровую термоусадочную трубку над разъемом провода к проводу.
Зачистите и добавьте флюс на концы проволоки. С помощью рук помощи зажмите провод к разъему и скрутите конец разъема одним концом провода. Припаяйте материалы вместе и прикрепите другую проволоку к установке таким же образом и припойте.
Затем прикрепите светодиодные провода к рукам помощи с помощью ленты под светодиодным основанием. Затем смешайте эпоксидную смолу в соответствии с инструкциями производителя и распределите эпоксидную смолу поверх припаянного светодиода. Используя сверло лопаты, просверлите отверстие длиной 1,5 сантиметра через верхнюю часть коробки, на которую будет помещен светодиод, и используйте высокоскоростной вращающийся инструмент, чтобы сделать выемку на одной стороне отверстия, чтобы освободить место для светодиодного провода.
Заклейте 25-30-миллиметровый кусок пленки конфиденциальности на черный ящик, закрывающий отверстие, которое светодиод будет освещать, и заклейте светодиод за пределами черного ящика поверх отверстия. Для четырех светодиодной системы управления просверлите четыре отверстия размером 0,83 сантиметра на расстоянии 3,81 сантиметра друг от друга в крышке коробки и используйте высокоскоростной вращающийся инструмент, чтобы вырезать прямоугольное отверстие размером 1,19 на 1,90 сантиметра в верхнем левом углу. С помощью сверла лопаты просверлите отверстие длиной 1,5 сантиметра в задней части коробки и вставьте в отверстие люверс.
Для светодиодов, управляемых компьютером, наждачной бумагой область, где микроконтроллер будет вклеен в коробку, а также нижнюю сторону держателя микроконтроллера. Закрепите микроконтроллер на держателе, затем эпоксидируйте держатель и коробку вместе, прежде чем закрепить держатель в черном ящике. Затем поместите двухстороннюю ленту на зажим и закрепите зажим внутри коробки.
В образцах, трансфектированных для экспрессии фитохрома B, но не фикоцианина билина, утечка увеличивается по мере увеличения количества репортерной ДНК. Кроме того, когда весь переключатель гена фитохрома B, включая плазмиду, продуцирующую фикоцианин билиновый цвет, освещается дальним красным светом, экспрессия люциферазы также увеличивается с увеличением количества репортерной конструкции в трансфекционной смеси. Аналогичным образом, когда светочувствительные клетки освещаются красным светом, экспрессия люциферазы также увеличивается с увеличением репортерного количества.
При сравнении уровней индукции клеток, обработанных красным светом, с дальними клетками, обработанными красным светом, обнаруживается небольшое снижение активации складки с увеличением количества репортера. Важно тщательно следить за каждым шагом при построении электрической цепи и дважды проверять номера точечных отверстий строка за строкой перед пайкой каждого компонента. Этот протокол может быть использован для оптической стимуляции многих типов образцов или оптогенетических инструментов с использованием различных длин волн и позволяет программировать графики освещения.
