Reizes研究所のメンバーは、原稿の作成中に批判的なレビューと洞察を得ただけでなく、ラーナー研究所のイメージングとヒストロジーのコアに対して、データ収集とデータ分析の支援をしてくれたことに感謝します。この研究は、クリーブランド・クリニックの研究プログラム委員会を通じた内部助成金と、生殖調査・バイエル協会を通じた外部助成金によって支援されました。Reizes研究所の研究はまた、VeloSanoバイクを治すために、婦人科癌の研究優秀センター、および子宮癌研究のためのローラJ.フォガティ寄付椅子を通じて資金を提供しています。クリーブランド クリニックは図1と図 2の著作権の許可を所有しています。

注:この研究における動物の使用は、クリーブランドクリニックラーナー研究所の施設動物ケアおよび使用委員会(IACUC)によって承認されました。一般に公開されているすべての動物ケアと使用基準は、国立衛生研究所のガイドラインに従って実施されました。この手順は、無菌技術を利用しています。ペトリ皿は無菌です。使用されるPBS/生理学は無菌です。壊死および組織解剖のための外科器具はオートクレーブによって殺菌される。汚染を減らすには、動物のケース間の機器に70%EtOH(セッションごとに複数の場合)を使用しています。
1.ドナーマウスとレシピエントマウスの調製 ( 図1参照)
<ol><li>実験動物と連携するための適切な承認が実施されていることを確認します。</li>
	<li>マウスのひずみを特定します。これらの実験では、C57BL/6Jバックグラウンドを有する野生型および変異型マウスが利用されたが、同様のモデルを用いた研究者はBALB/cマウスなどの他のマウス株での成功を報告する。さらに、ドナーマウスおよび/またはレシピエントマウスは、GFPまたはRFPマウスなどのレポーターシステムを利用することができる(図2および図3を参照)。</li>
	<li>子宮内膜組織移植のタイミングについては、ドナーマウスがゴナドトロピン注射時に22〜24日の間であることを確認してください。これは、彼らが生殖的にナイーブであることを保証します, 例えば, まだestrousサイクリングを開始していません.</li>
	<li>レシピエントマウスが、2~4ヶ月の間に生殖に残っていることを確認します(卵巣切り出し前の切り出し術はありません)。必須ではありませんが、男性のマウスケージから尿浸しの寝具を定期的にレシピエントのケージに入れて、継続的なestrousサイクリングを容易にし、子宮内膜組織移植の前に72時間で再び行うことを推奨します。 注:配置尿浸し寝具は使用される男性の寝具の量に大きく依存し、可変的な結果を有するので、これは、レシピエントのエストルースサイクルの同期を保証しません。エトルサイクルの同期が望ましい場合、100 ng/100 μLエストラジオールの3回連続の皮下注射は、すべての動物をエストルス期に導く。エストルースサイクルの段階に基づく病変誘導に違いは見つからなかったが、他のグループはサイクルフェーズが重要であることを発見した。</li>
	<li>皮下に妊娠中のマーレ血清性性腺刺激ホルモン(PMSG、2IUを200μLに希釈)を細かい針を用いて皮下マウスに注射する(25-27 G推奨)。それは排卵とその後の高プロゲステロン環境を引き起こすので、レシピエントマウスにPMSGを与えないでください, 子宮内膜症形成に受容性が低いです. 注:以前のマウスモデルは、子宮内膜収穫23の前にドナーマウスの子宮内膜増殖を刺激するためにPMSGまたはエストロゲンのいずれかを利用している。PMSGは以下の理由で推奨されています: PMSG の半減期は 40 時間ですが、17-β-エストラジオールの半減期は 2 時間だけです。子宮内膜組織の調達前にドナー40時間にPMSGを単一の皮下注射を利用すると、性腺刺激への曝露の持続持続期間を提供し、これは内因性エストロゲンを刺激する作用をする。外因性エストロゲンの多くの調製物は、適切に子宮内膜をプライムするために複数の注射を必要とします.</li>
	<li>PMSG注射に続いて、38〜42時間の間にレシピエントに壊死、調達、および移植をスケジュールする。子宮内膜組織の収穫は、42時間のポスト注射で起こる排卵前の組織の収集を確実にするために、ゴナドトロピン注射後に収穫する。排卵は高いプロゲステロン(P4)環境を作り出し、病変の確立を減らします。</li>
</ol>2. ドナーマウス子宮内膜組織の調達
<ol><li>ドナーマウスの安楽死後(CO2チャンバーを使用し、その後に子宮頸部脱臼を行い、腹部に70%エタノール溶液を噴霧する。これは、皮膚の植物相および外れた毛髪から調達された組織の汚染を減らすのに役立つ。はさみを解剖すると、皮膚と皮下組織を通して正中線で浅い横断切り取りを行います。次に、皮膚切開の各側を把持し、腹部を開くために鈍い牽引を使用する。</li>
	<li>子宮を特定します。子宮を取り除く前に、隣接する結合組織を切り取ってください。それぞれの卵管のすぐ下の各子宮ホーンをトランセクトし、子宮頸部全体をトランセクトして子宮全体を取り除く。</li>
	<li>腹腔から取り出した後、子宮を注意深く検査し、追加の末梢脂肪または結合組織を取り除きます。ペトリ皿の上に冷たいPBSの液滴に子宮を置きます。子宮全体の質量を決定し、文書化します。</li>
	<li>子宮眼深部から各角をトランセクトし、各角の長さを最大化するように、切除を可能な限り眼深部に近づけます。解剖顕微鏡の助けを借りて、最初の角の内腔の内側に解剖ハサミの刃を1枚置き、チューブの長軸に沿って切ります。慎重に、どちらの側がセローザであり、どちらの側が上皮であることを念頭に置いて、チューブを開きます。</li>
	<li>新しいペトリ皿に生理食前またはPBSの500 ccを置きます。表面張力のために液体は一緒に滞在します。</li>
	<li>次いで、子宮の断片化を均一に行う。多くの小さな病変よりも大きな病変が少ない方がよい。まず、子宮内膜層をつかんで剥がすことで、上皮をミオメトリウムから分離することから始めます。<ol>
<li>あるいは、単にミオメトリウムから分離することなく組織を断片化する(上皮側が完全に露出している限り)、筋膜を保持すると、このモデルの生理学的関連性がヒト疾患に及ぼすのが軽減される。断片はできるだけ大きく、18Gの針を通過するのに十分な小ささを確認してください。(1 mm x 1 mm を推奨)。</li>
		<li>最初の角からこれらの1mm x 1mm断片の10-12を収集します(これはC57BL/ 6Jマウスの40mg組織に大別します)。収集した断片を液体コレクションに入れる。</li>
	</ol>
</li>
	<li>マウスあたり約24個のフラグメントについて、他の子宮ホーンについても同じ手順を実行します。フラグメントの総数を文書化します。</li>
</ol>3. レシピエントマウスへの組織断片の腹膜注射
<ol><li>1 ccシリンジの鈍い端を使用して、吊り下げられた1ミリメートルx 1 mmの断片を吸引する。合計ボリュームは 1 mL である必要があります。</li>
	<li>18Gの針を完全な注射器に取り付け、液体を針に積み込みます。すべての組織が針を通過することを確実にするために、ペトリ皿に模擬注射を検討してください。</li>
	<li>受信者のマウスを取ります。IP注入の前または後に、エストルースサイクルドキュメンテーション(膣オリフィスで電球注射器を使用して生理食音の10 μLを取得し、カバースリップでガラススライドにメッキ)</li>
	<li>45度の角度でシリンジを用いた断片の腹腔内注射を行い、皮下注射しないように注意する。</li>
	<li>注射後に断片が残っている場合は、注射のためにさらに200μLの流体を注射器に引き込み、すべての断片が腹腔内に正常に注入されるようにします。</li>
	<li>出血や合併症が保証されなくなったら、レシピエントマウスをケージに戻し、通常の食事を与えます。</li>
</ol>4. 子宮内膜病変の収穫
<ol><li>移植後のフラグメント注射後約21日でレシピエントマウスを安楽死させる。 注:経験から、同様のモデルを使用して共同研究者との議論から、最大病変のサイズと数は移植後約3週間で発生します。3週間後、病変は大きさが後退し始める。IACUC承認の安楽死法が用いられる。</li>
	<li>安楽死と頸部脱臼の後、動物の腹部に70%エタノールを吹き付け、皮膚をテントでテントにして、切除ハサミで表面的に切断します。皮膚と皮下空間をはさみで切開し、腹部を露状に開きます。</li>
	<li>さらなる解剖が行われる前に、総病変の完全な調査が行われ、口径によって測定された大きさが行われ、解剖学的領域に関して文書化される(下記参照)。</li>
	<li>3つの異なる解剖学的領域の完全な収集を実行します(病変がひどく理解できるかどうかに関係なく)。病変が他の領域(例えば、腸)で見られる場合、これらは無視されるべきであり、病変が下の3つの領域のいずれかを横断しない限り、収集されない。<ol>
<li>A = 腹壁/腹膜(カセットに平らにするか、サンプル間で一貫している限りロールアップすることができます)。</li>
		<li>B =膵臓と腸間膜脂肪。</li>
		<li>C = パラウテリン結合組織と脂肪(子宮を取り囲むが、膀胱以外の器官を含まない白い輝く組織;膀胱を病変と間違えないように注意する)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>解剖された各領域をカセットに入れ、適切にラベル付けし、組織学的断面化のためのラボプロトコルに従ってホルマリンとプロセスに入れる。</li>
	<li>ホルマリンブロックは、2つの均一な深さで、組織面積あたり2枚のスライド(D1およびD2)にセクションする。</li>
</ol>5. 子宮内膜病変のスコアリング
<ol><li>スキャン(40倍の倍率で)とアーカイブスライド。</li>
	<li>デジタルスライド読み取りソフトウェアを使用して、子宮内膜病変のエッジ間の最長距離(X)を定義する - エッジが腺または間質で構成されているかどうか、それをマークします。連続病変は、間質に囲まれた腺によって定義されます。この線は必ずしも子宮内膜組織のみを横断するわけではありませんが(子宮内膜症の不規則な形状または起伏のある焦点上の端点を決定する場合のように)、2つの端点は連続的な間質および/または腺によって接続される必要があります(図4を参照)。</li>
	<li>最初の行を横切って 2 番目の線 (Y) を 90 度、上記の規則に従って 2 番目の行の長さを決定します。</li>
	<li>連続していない複数の病変が発生した場合は、それぞれに独自のXおよびY測定値を与える。</li>
	<li>各スライドの最終スコアを各病変の領域の合計(X*Y)として計算します。</li>
	<li>2 つのスライドのスコアのうち大きい方 (D1 対 D2) を、そのリージョンの最終スコア (A、B、C) として取ります。</li>
	<li>各領域からのスコアを合計して、その動物の最終的な顕微鏡スコアを与えます。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> England Journal of Medicine. 382 (13), 1244-1256 (2020).</li><li>Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+pharmacotherapy+in+the+treatment+of+endometriosis+across+the+lifespan.">The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan.</a> Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).</li><li>Giudice, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Endometriosis.">Clinical practice. Endometriosis.</a> New England Journal of Medicine. 362 (25), 2389-2398 (2010).</li><li>D'Hooghe, T. M., Debrock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis,+retrograde+menstruation+and+peritoneal+inflammation+in+women+and+in+baboons.">Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons.</a> Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).</li><li>Ahn, S. 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B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+model+of+human+endometriosis+by+induced+unopposed+estrogenicity+in+baboons.">An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons.</a> Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).</li><li>Lagan&#224;, A. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+endometriosis:+identifying+mechanisms+of+disease+and+therapeutic+targets.">Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets.</a> Current Women's Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).</li><li>Bilotas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+endometriosis+and+pregnancy+in+a+mouse+model.">Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model.</a> PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).</li><li>Peterse, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+women:+a+laparoscopic+mouse+model+for+endometriosis.">Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).</li><li>Richards, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KLF11+is+an+epigenetic+mediator+of+DRD2/dopaminergic+signaling+in+endometriosis.">KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis.</a> Reproductive Sciences. 224 (8), 1129-1138 (2017).</li><li>Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+Mouse+Model+of+Experimentally+Induced+Endometriosis+to+Evaluate+and+Compare+the+Effects+of+Bisphenol+A+and+Bisphenol+AF+Exposure.">Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure.</a> Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-451+deficiency+is+associated+with+altered+endometrial+fibrinogen+alpha+chain+expression+and+reduced+endometriotic+implant+establishment+in+an+experimental+mouse+model.">miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model.</a> PloS One. 9 (6), 100336 (2014).</li></ol>

著者らは開示する利益相反を持っていません。

我々の研究は、卵巣切除術および/または生存手術を必要とせずにマウスで子宮内膜症を確実に誘導することができ、腹部および組織学的分析の標準化された調査を使用して異所性子宮内膜病変を同定し、定量できることを示している。
子宮内膜症の多くのマウス研究は、ドナー子宮内膜が腸、腹壁?...

子宮内膜症は、女性の1,2に大きな経済的および健康上の負担を伴う女性生殖管の謎めいた病気である。子宮内膜症の病因は完全には理解されておらず、血中性代謝、胚性ミュレリアレス、骨髄由来前駆細胞の募集、および逆行月経3を含む複数の説明が提案されている。これらの提案されたメカニズムの複数の側面が関与する可能性があり、単一の説明が病気のすべての形態を説明することはできませんが、子宮内膜症の病因の主要なモデルは、月経を逆行することです。逆行性の月経は、卵管を通って腹腔内に月経排水の通路です。月経中の女性の90%が定期的に逆行月経4,5を受けると推定されている。この逆行月経の一般的な現象を考えると、なぜ子宮内膜症が女性のサブセットでのみ発症するのかは不明である5.この病気の病因をよりよく理解するために、直接的なヒト研究は実現不可能であり、動物実験が保証されている。
子宮内膜症は治療と勉強の両方の課題です。この疾患の罹患率は知られていないが、10%と推定される。いくつかの高度なタイプの子宮内膜症は、非侵襲的なイメージングを通じて正確に同定されるかもしれませんが、決定的な診断は外科的に得られた生検標本の病理組織学的分析によってのみ達成される。目視で罹患しているように見える病変は、実際には、他の原因から線維症または瘢痕化する可能性がある6。重症度と疾患の程度は症状学7と相関しない。
子宮内膜症病変は、微小環境内で複雑な相互作用をする異種細胞型および集団から構成され、したがって、細胞モデル8,9の有用性を制限する。インビボモデルは存在するが、これらは固有の課題と制限を有する10、11、12。霊長類モデルは理想的ですが、多くの場合、実現可能ではありません13,14,15.少数の非霊長類哺乳動物は、月経し、自発的に子宮内膜症を発症する16.子宮内膜症のげっ歯類モデルが存在するが、それぞれに制限がある 17.これらのモデルの多くは、縫合またはドナーレシピエントの壁または腸に子宮内膜組織を移植する生存手術を必要とし、技術的な複雑さ、麻酔の必要性、および手術自体18、19、20からの免疫因子の交和を加える。さらに, 多くのモデルは、卵巣切り分けとエストロゲン補充を必要とします;病変収量を増加させながら、これは時間、費用、および追加の生存手術を追加します。腹腔内(IP)注射モデルは麻酔や生存手術を必要とせず、これらのモデルはモデル21、22、23を縫合するよりも逆行月経を論理的にシミュレートする。しかし、ほとんどのIPモデルは、注入後の子宮内膜フラグメントのランダム分散による病変位置の変動に左右され、したがって病変の同定および測定におけるより多くのバイアスに影響を及ぶ。
ここでは、既存の子宮内膜症モデルのいくつかの特徴を、主観的なグレーディングの代わりに顕微鏡的な定量化に依存する新しい、単純化された効率的なシステムに統合した子宮内膜症のマウスモデルを提示する。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting PMSG into donor mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Tuberculin syringe with 27G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-87</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant mare serum gonadotropin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-70-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6&#8221; serrated forceps, curved tip</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72993-6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol solution</td>
			<td>Pharmco</td>
			<td>33000HPLCCS4L</td>
			<td>70% solution dilute ethyl acetate 200 proof</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>ME54TE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide</td>
			<td>TriGas Supplier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S14000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 10 disposable scalpel</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9999403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, curved</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, straight</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica SE 4</td>
			<td>For tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instrument sterilization tray</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>66112-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-202-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting into recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>301025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>148265d</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 uL pipette tip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double distilled water</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex bulb</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro cover glass slip</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48366-067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM IL</td>
			<td>For evaluating vaginal cytology smears</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for harvesting tissue from recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy foam pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-038-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Digital Calipers</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62065-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing/embedding cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic murine model of endometriosis using naturally cycling mice

子宮内膜症は、骨盤痛と不妊の主な原因です。それは子宮外の場所で子宮内膜組織の存在によって定義される。子宮内膜症の新しい治療法と診断ツールの開発は、病気の研究における課題の一部のために限られています。霊長類の外では、月経する哺乳類はほとんどおらず、自発的な子宮内膜症を発症するものはない。げっ歯類モデルは一般的であるが、子宮内膜症の人工的な誘導を必要とし、多くは免疫不全マウスまたは外科的に誘発された疾患のいずれかを利用している。最近では、腹腔内注射を伴うモデルに対して、より注目が集まってきた。既存の子宮内膜症モデルのいくつかの特徴を、主観的なグレーディングの代わりに顕微鏡的な定量化に依存する新しい単純化されたシステムに統合した子宮内膜症のマウスモデルを提示する。本モデルでは、ドナーマウスのホルモン刺激、腹腔内注射、系統的な腹部調査と組織収穫、および壊死後の任意の時点で行い、検証することができる組織学的定量を行う。このモデルは最小限のリソースとトレーニングを必要とします。マウスサバイバル手術や子宮内膜病変の識別におけるラボ技術者による専門知識を必要としません。免疫不全、免疫能力、変異マウスで使用できます。そして確実にヒト子宮内膜疾患と組織学的に一致している子宮内膜病変を作成する。

初期の概念実証実験のために、RFPマウスからのドナー子宮内膜を野生型レシピエントマウスに注射した。H&E染色は、子宮内膜症病変の古典的なアーキテクチャの病理組織学的確認を明らかにした(図3A)。蛍光顕微鏡は、問題の観察病変がドナーに由来することを確認した(図3B)。
第2の実験は、10の野生型C57BL/6Jドナーおよび10人?...

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A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

子宮内膜症の多くのげっ歯類モデルは、技術的な複雑さ、再現性、および/または免疫不全動物または特別なレポーターマウスの必要性によって制限されています。我々は、独立して検証可能な客観的なスコアリングシステムを有し、卵巣切り出しまたは生存手術の要件を持たない任意の実験マウスを使用して、病変誘導の簡略化されたシステムを提示する。

自然サイクリングマウスを用いた子宮内膜症のシンジニアスマウスモデル

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

4.8K ビュー.  Cleveland Clinic. 子宮内膜症の多くのげっ歯類モデルは、技術的な複雑さ、再現性、および/または免疫不全動物または特別なレポーターマウスの必要性によって制限されています。我々は、独立して検証可能な客観的なスコアリングシステムを有し、卵巣切り出しまたは生存手術の要件を持たない任意の実験マウスを使用して、病変誘導の簡略化されたシステムを提示す?...

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Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of lesions, and/or chronic pharmaceutical management of pain and infertility symptoms. The cost associated with endometriosis has been estimated at 22 billion dollars per year in the United States1. To further our understanding of mechanisms underlying this enigmatic disease, animal models have been employed. Primates spontaneously develop endometriosis and therefore primate models most closely resemble the disease in women. Rodent models, however, are more cost effective and readily available2. The model that we describe here involves an autologous transfer of uterine tissue to the intestinal mesentery (Figure 1) and was first developed in the rat3 and later transferred to the mouse4. The goal of the autologous rodent model of surgically-induced endometriosis is to mimic the disease in women. We and others have previously shown that the altered gene expression pattern observed in endometriotic lesions from mice or rats mirrors that observed in women with the disease5,6. One advantage of performing the surgery in the mouse is that the abundance of transgenic mouse strains available can aid researchers in determining the role of specific components important in the establishment and growth of endometriosis. An alternative model in which excised human endometrial fragments are introduced to the peritoneum of immunocompromised mice is also widely used but is limited by the lack of a normal immune system which is thought to be important in endometriosis2,7. Importantly, the mouse model of surgically induced endometriosis is a versatile model that has been used to study how the immune system8, hormones9,10 and environmental factors11,12 affect endometriosis as well as the effects of endometriosis on fertility13 and pain14.

A description of the surgical induction of endometriosis in mice and rats by auto-transplantation of uterine tissue to the arterial cascade of the intestinal mesentery.

子宮組織の自動移植による外科的に誘発される子宮内膜症のマウスモデル

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

医学

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

創傷治癒のマウスモデル

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

変更されたカフ法を用いたマウス子宮頸心臓移植モデル

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

くも膜下出血のマウスモデル

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, murine pancreatic tumor model of hepatic metastases via a hemispleen injection of syngeneic murine pancreatic tumor cells is described. This model mimics many of the clinical conditions in patients with metastatic disease to the liver. Mice consistently develop metastases in the liver allowing for investigation of the metastatic process, experimental therapy testing, and tumor immunology research.

A preclinical, murine model of hepatic metastases performed via a hemispleen injection technique.

肝転移の前臨床マウスモデル

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

A &quot;Patient-Like&quot; Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

肝細胞癌転移の「患者様」同所同系マウスモデル

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

同系マウスメラノーマ細胞の注入は、肺におけるそれらの転移能を決定するために、

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

マウスの遠位人工肛門、転用 c57bl/6 マウス大腸炎の新たなモデル

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

改変非縫合カフ技術を用いたマウス子宮頸動脈大動脈移植モデル

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...