Vorremmo ringraziare i membri del laboratorio Reizes per la loro revisione critica e le intuizioni durante la preparazione del manoscritto, così come i nuclei di imaging e istologia del Lerner Research Institute per la loro assistenza nella raccolta e nell'analisi dei dati. Questo lavoro è stato sostenuto attraverso un finanziamento interno attraverso il Comitato del programma di ricerca presso la Cleveland Clinic e da una sovvenzione esterna attraverso la Society for Reproductive Investigation e Bayer. La ricerca nel Laboratorio Reizes è finanziata anche attraverso VeloSano Bike to Cure, Centro di eccellenza della ricerca nel cancro ginecologico, e attraverso la Laura J. Fogarty Endowed Chair for Uterine Cancer Research. La Cleveland Clinic possiede l'autorizzazione di copyright per la Figura 1 e la Figura 2.

NOTA: L'uso di animali in questo studio è stato approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) presso il Cleveland Clinic Lerner Research Institute. Tutti gli standard di cura e utilizzo degli animali disponibili al pubblico sono stati eseguiti seguendo le linee guida del National Institutes of Health. Questa procedura utilizza tecniche asettiche. La capsula di Petri è sterile. Il PBS/soluzione salina utilizzato è sterile. Gli strumenti chirurgici per l'autopsia e la dissezione tissutale vengono sterilizzati in autoclave. Usiamo il 70% di EtOH sugli strumenti tra custodie di animali (se più di uno per sessione) per ridurre la contaminazione.
1. Preparazione dei topi donatori e riceventi (cfr. figura 1)
<ol><li>Assicurarsi che sia in atto un'approvazione appropriata per lavorare con animali da laboratorio.</li>
	<li>Determinare il ceppo del mouse. In questi esperimenti, sono stati utilizzati topi wildtype e mutanti con un background C57BL / 6J, ma i ricercatori che utilizzano modelli simili riportano il successo con altri ceppi di topo come i topi BALB / c10. Inoltre, i topi donatori e/o riceventi possono utilizzare sistemi reporter, come topi GFP o RFP (vedere Figura 2 e Figura 3).</li>
	<li>Per la tempistica del trapianto di tessuto endometriale, assicurarsi che i topi donatori siano tra i 22-24 giorni al momento dell'iniezione di gonadotropina. Ciò garantisce che siano naïve dal punto di riproduzione, ad esempio, non ancora iniziato il ciclo estrale.</li>
	<li>Assicurarsi che i topi riceventi siano riproduttivamente intatti (nessuna ovariectomia precedente) tra i 2 ei 4 mesi di età. Sebbene non sia necessario, si raccomanda di posizionare periodicamente la lettiera imbevuta di urina da una gabbia per topi maschi nella gabbia del ricevente per facilitare il ciclo estrale in corso e di nuovo a 72 ore prima del trapianto di tessuto endometriale. NOTA: Ciò non garantirà la sincronizzazione del ciclo estrale dei destinatari, poiché il posizionamento della lettiera imbevuta di urina dipende fortemente dalla quantità di lettiera maschile utilizzata e ha risultati variabili. Se si desidera la sincronizzazione del ciclo estrale, tre iniezioni sottocutanee consecutive di 100 ng/100 μL di estradiolo porteranno tutti gli animali alla fase estrale. Mentre non abbiamo trovato alcuna differenza nell'induzione della lesione basata sulla fase del ciclo estrale, altri gruppi hanno trovato la fase del ciclo importante10.</li>
	<li>Iniettare per via sottocutanea Gonadotropina sierica di cavalla gravida (PMSG, 2 UI diluita in 200 μL) in topi donatori per via sottocutanea utilizzando un ago sottile (25-27 Graccomandati). Non portare PMSG ai topi riceventi, in quanto innescherà l'ovulazione e il conseguente ambiente ad alto progesterone, che è meno ricettivo alla formazione di endometriosi. NOTA: I modelli murini precedenti hanno utilizzato PMSG o estrogeni per stimolare la proliferazione endometriale nei topi donatori prima della raccolta endometriale23. PmSG è raccomandato per i seguenti motivi: l'emivita di PMSG è di 40 ore mentre l'emivita di 17-beta-estradiolo è di sole 2 ore. L'utilizzo di una singola iniezione sottocutanea di PMSG nei donatori 40 ore prima dell'approvvigionamento di tessuto endometriale fornisce una durata sostenuta dell'esposizione alla stimolazione della gonadotropina, che agisce per stimolare gli estrogeni endogeni. Molti preparati di estrogeni esogeni richiedono iniezioni multiple per innescare adeguatamente l'endometrio.</li>
	<li>Dopo l'iniezione di PMSG, programmare l'autopsia, l'approvvigionamento e il trapianto nel ricevente tra 38-42 ore. Tempo il prelievo del tessuto endometriale dopo l'iniezione di gonadotropina per garantire la raccolta del tessuto prima dell'ovulazione, che si verifica a 42 ore dopo l'iniezione. L'ovulazione produce un ambiente ad alto progesterone (P4), che ridurrebbe l'instaurazione della lesione.</li>
</ol>2. Approvvigionamento di tessuto endometriale di topo donatore
<ol><li>Dopo l'eutanasia del topo donatore (utilizzando la camera CO2 seguita da lussazione cervicale), spruzzare l'addome con una soluzione di etanolo al 70%; questo serve a ridurre la contaminazione del tessuto procurato dalla flora cutanea e dai peli spostati. Con le forbici sezionanti, fai un cecchino trasversale poco profondo sulla linea mediana attraverso la pelle e il tessuto sottocutaneo. Quindi afferrando ogni lato dell'incisione cutanea, utilizzare la trazione smussata per aprire l'addome.</li>
	<li>Identificare l'utero. Prima di rimuovere l'utero, tagliare via il tessuto connettivo adiacente. Transect ogni corno uterino appena sotto la rispettiva tuba di Falloppio e poi transect la cervice per rimuovere l'intero utero in blocco.</li>
	<li>Dopo la rimozione dalla cavità addominale, ispezionare attentamente l'utero e rimuovere qualsiasi grasso periferico aggiuntivo o tessuto connettivo. Metti l'utero in una goccia di PBS fredda su una capsula di Petri. Determinare e documentare la massa combinata dell'intero utero.</li>
	<li>Transect ogni corno dal fondo dell'utero, rendendo la trasezione il più vicino possibile al fondo in modo da massimizzare la lunghezza di ogni corno. Usando l'aiuto di un microscopio di dissezione, posizionare una lama delle forbici di dissezione all'interno del lume del primo corno, quindi tagliare lungo l'asse maggiore del tubo. Aprire con attenzione il tubo, tenendo presente da quale parte è la sierosa e da quale parte è l'epitelio.</li>
	<li>Mettere 500 cc di soluzione salina o PBS su una nuova capsula di Petri; il liquido rimarrà insieme a causa della tensione superficiale.</li>
	<li>Quindi, eseguire la frammentazione dell'utero in modo uniforme. È meglio avere meno lesioni più grandi di molte lesioni più piccole. Inizia separando l'epitelio dal miometrio afferrando lo strato endometriale e staccandolo.<ol>
<li>In alternativa, è sufficiente frammentare il tessuto senza separare il miometrio (purché il lato epiteliale sia completamente esposto), ma mantenere il miometrio riduce la rilevanza fisiologica di questo modello per la malattia umana. Assicurarsi che i frammenti siano il più grandi possibile ma abbastanza piccoli da passare attraverso un ago da 18 G; (si consiglia 1 mm x 1 mm).</li>
		<li>Raccogliere 10-12 di questi frammenti di 1 mm x 1 mm dal primo corno (che corrisponde approssimativamente a 40 mg di tessuto nei topi C57BL / 6J). Inserire i frammenti raccolti nella raccolta di liquidi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Eseguire gli stessi passaggi per l'altro corno uterino per un totale di circa 24 frammenti per topo. Documentare il numero totale di frammenti.</li>
</ol>3. Iniezione peritoneale di frammenti di tessuto nel topo ricevente
<ol><li>Aspirare i frammenti sospesi di 1 mm x 1 mm utilizzando l'estremità smussata di una siringa da 1 cc; il volume totale dovrebbe essere di 1 ml.</li>
	<li>Attaccare un ago da 18 G alla siringa completa e caricare il fluido nell'ago. Prendere in considerazione una finta iniezione nella capsula di Petri per assicurarsi che tutto il tessuto passi attraverso l'ago.</li>
	<li>Prendi il mouse del destinatario. Prima o dopo l'iniezione IP, ottenere uno striscio vaginale del topo ricevente per la documentazione del ciclo estrale (10 μL di soluzione salina utilizzando la siringa a bulbo sull'orifizio vaginale e placcato sul vetrino con il coperchio).</li>
	<li>Eseguire l'iniezione intraperitoneale dei frammenti con la siringa con un angolo di 45 gradi, facendo attenzione a non iniettare per via sottocutanea.</li>
	<li>Se i frammenti rimangono dopo l'iniezione, prelevare altri 200 μL del fluido nella siringa per iniezione per garantire che tutti i frammenti siano iniettati con successo per via intraperitoneale.</li>
	<li>Una volta assicurato di non avere sanguinamento o complicazioni, rimette i topi riceventi nelle loro gabbie e alimenta una dieta normale.</li>
</ol>4. Raccolta delle lesioni endometriotiche
<ol><li>Eutanasia dei topi riceventi a circa 21 giorni dopo l'iniezione di frammenti post-trapianto. NOTA: Dall'esperienza e dalla discussione con i collaboratori che utilizzano modelli simili, la dimensione e il numero massimo della lesione si verificano a circa 3 settimane dopo il trapianto; dopo 3 settimane, le lesioni iniziano a regredire di dimensioni. Viene utilizzato il metodo di eutanasia approvato dalla IACUC.</li>
	<li>Dopo l'eutanasia e la lussazione cervicale, spruzzare l'addome dell'animale con il 70% di etanolo e tendare la pelle a tagliare superficialmente con le forbici sezionanti. Incidere la pelle e lo spazio sottocutaneo con le forbici per aprire senza mezzi termini l'addome.</li>
	<li>Prima di intraprendere qualsiasi ulteriore dissezione, viene eseguita un'indagine completa per le lesioni grossolane, con dimensioni misurate dalle pinze e documentate sulla loro regione anatomica (vedi sotto).</li>
	<li>Eseguire una raccolta completa di tre distinte regioni anatomiche in blocco (indipendentemente dal fatto che le lesioni possano essere apprezzate grossolanamente). Se le lesioni sono osservate in altre regioni (ad esempio, intestino), queste dovrebbero essere ignorate e non raccolte a meno che la lesione non attraversi una delle tre aree sottostanti.<ol>
<li>A = parete addominale/peritoneo (può essere appiattito in una cassetta o arrotolato, purché coerente tra i campioni).</li>
		<li>B = pancreas e grasso mesenterico.</li>
		<li>C = tessuto connettivo parauterino e grasso (tessuto bianco scintillante che circonda l'utero ma non coinvolge organi diversi dalla vescica; fare attenzione a non confondere la vescica per una lesione).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Posizionare ogni area sezionata in una cassetta, opportunamente etichettata, e inserirla in formalina e processo come da protocollo di laboratorio per il sezionamento istologico.</li>
	<li>Blocchi di formalina di sezione in due vetrini (D1 e D2) per area tissutale a due profondità uniformi.</li>
</ol>5. Punteggio delle lesioni endometriotiche
<ol><li>Scansione (con ingrandimento 40x) e archiviazione delle diapositive.</li>
	<li>Utilizzare un software di lettura digitale delle diapositive, definire la distanza più lunga (X) tra i bordi di una lesione endometriotica, indipendentemente dal fatto che il bordo sia costituito da ghiandole o stroma, e contrassegnarla. Una lesione continua è definita da ghiandole circondate da stroma; la linea non attraversa necessariamente solo il tessuto endometriotico (come nel caso della determinazione dei punti finali su un fuoco di forma irregolare o ondulata dell'endometriosi) ma i due punti finali devono essere collegati da stroma e/o ghiandole continue (vedi Figura 4).</li>
	<li>Crea una seconda linea (Y) di 90 gradi attraverso la prima riga, con la lunghezza della seconda linea determinata seguendo le regole sopra riportate.</li>
	<li>Se si incontrano più lesioni non contigue, dare a ciascuna le proprie misurazioni X e Y.</li>
	<li>Calcola il punteggio finale per ogni diapositiva come somma delle aree (X * Y) di ciascuna lesione.</li>
	<li>Prendi il più grande dei punteggi delle due diapositive (D1 vs D2) come punteggio finale per quella regione (A, B, C).</li>
	<li>Sommare i punteggi di ogni regione per dare il punteggio microscopico finale per quell'animale.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> England Journal of Medicine. 382 (13), 1244-1256 (2020).</li><li>Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+pharmacotherapy+in+the+treatment+of+endometriosis+across+the+lifespan.">The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan.</a> Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).</li><li>Giudice, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Endometriosis.">Clinical practice. Endometriosis.</a> New England Journal of Medicine. 362 (25), 2389-2398 (2010).</li><li>D'Hooghe, T. M., Debrock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis,+retrograde+menstruation+and+peritoneal+inflammation+in+women+and+in+baboons.">Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons.</a> Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).</li><li>Ahn, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+and+immune+dysfunction+in+endometriosis.">Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis.</a> BioMed Research International. 2015, (2015).</li><li>Falcone, T., Flyckt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+management+of+endometriosis.">Clinical management of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (3), 557-571 (2018).</li><li>Vercellini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+endometriosis+stage,+lesion+type,+patient+characteristics+and+severity+of+pelvic+pain+symptoms:+a+multivariate+analysis+of+over+1000+patients.">Association between endometriosis stage, lesion type, patient characteristics and severity of pelvic pain symptoms: a multivariate analysis of over 1000 patients.</a> Human Reproduction. 22 (1), 266-271 (2007).</li><li>Bulun, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Endocrine Reviews. 40 (4), 1048-1079 (2019).</li><li>Brueggmann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+three-dimensional+in+vitro+models+of+ovarian+endometriosis.">Novel three-dimensional in vitro models of ovarian endometriosis.</a> Journal of Ovarian Research. 7, 17 (2014).</li><li>Dodds, K. N., Beckett, E. A. H., Evans, S. F., Hutchinson, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+is+modulated+by+the+natural+estrous+cycle+and+mouse+strain+in+a+minimally+invasive+model+of+endometriosis.">Lesion development is modulated by the natural estrous cycle and mouse strain in a minimally invasive model of endometriosis.</a> Biology of Reproduction. 97 (6), 810-821 (2017).</li><li>Martinez, J., Bisbal, V., Marin, N., Cano, A., G&#243;mez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+lesion+size+in+a+heterologous+mouse+model+of+endometriosis.">Noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (144), (2019).</li><li>Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+surgically-induced+endometriosis+by+auto-transplantation+of+uterine+tissue.">Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3396 (2012).</li><li>Nishimoto-Kakiuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+endometriosis+in+cynomolgus+monkeys+as+a+clinically+relevant+experimental+model.">Spontaneous endometriosis in cynomolgus monkeys as a clinically relevant experimental model.</a> Human Reproduction. 33 (7), 1228-1236 (2018).</li><li>Nair, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+model+of+human+endometriosis+by+induced+unopposed+estrogenicity+in+baboons.">An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons.</a> Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).</li><li>Lagan&#224;, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+animal+models+for+endometriosis+research:+a+long+and+windy+road.">Translational animal models for endometriosis research: a long and windy road.</a> Annals of Translational Medicine. 6 (22), 431 (2018).</li><li>Bellofiore, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+evidence+of+a+menstruating+rodent:+the+spiny+mouse+(Acomys+cahirinus).">First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus).</a> Amercian Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (1), 1-11 (2017).</li><li>Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+endometriosis:+identifying+mechanisms+of+disease+and+therapeutic+targets.">Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets.</a> Current Women's Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).</li><li>Bilotas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+endometriosis+and+pregnancy+in+a+mouse+model.">Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model.</a> PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).</li><li>Peterse, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+women:+a+laparoscopic+mouse+model+for+endometriosis.">Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).</li><li>Richards, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KLF11+is+an+epigenetic+mediator+of+DRD2/dopaminergic+signaling+in+endometriosis.">KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis.</a> Reproductive Sciences. 224 (8), 1129-1138 (2017).</li><li>Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+Mouse+Model+of+Experimentally+Induced+Endometriosis+to+Evaluate+and+Compare+the+Effects+of+Bisphenol+A+and+Bisphenol+AF+Exposure.">Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure.</a> Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-451+deficiency+is+associated+with+altered+endometrial+fibrinogen+alpha+chain+expression+and+reduced+endometriotic+implant+establishment+in+an+experimental+mouse+model.">miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model.</a> PloS One. 9 (6), 100336 (2014).</li></ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da divulgare.

Il nostro studio dimostra che l'endometriosi può essere indotta in modo affidabile nei topi senza richiedere l'uso di ovariectomia e / o chirurgia di sopravvivenza e che le lesioni endometriali ectopiche possono essere identificate e quantificate utilizzando un'indagine standardizzata dell'addome e un'analisi istologica.
Molti studi murini di endometriosi utilizzano l'endometriosi indotta chirurgica...

L'endometriosi è una malattia enigmatica del tratto riproduttivo femminile con significativi oneri finanziari e sanitari per le donne1,2. L'eziologia dell'endometriosi non è completamente compresa e sono state proposte molteplici spiegazioni tra cui metaplasia celomica, riposi mülleriani embrionali, reclutamento di cellule progenitrici derivate dal midollo osseo e mestruazioni retrograde3. Mentre possono essere coinvolti molteplici aspetti di questi meccanismi proposti, e nessuna singola spiegazione può spiegare tutte le forme della malattia, il modello principale di patogenesi dell'endometriosi è la mestruazione retrograda. Le mestruazioni retrograde sono il passaggio dell'effluente mestruale attraverso le tube di Falloppio e nella cavità peritoneale; si stima che il 90% delle donne mestruazioni si sottoponga regolarmente a mestruazioni retrograde4,5. Dato questo fenomeno comune delle mestruazioni retrograde, perché l'endometriosi si sviluppa solo in un sottogruppo di donne non è chiaro5. Per comprendere meglio l'eziologia di questa malattia, gli studi diretti sull'uomo non sono fattibili e gli studi sugli animali sono giustificati.
L'endometriosi è una sfida sia da trattare che da studiare. La prevalenza della malattia non è nota ma stimata in 10%1. Mentre alcuni tipi avanzati di endometriosi possono essere identificati con precisione attraverso l'imaging non invasivo, una diagnosi definitiva si ottiene solo attraverso l'analisi istopatologica di campioni di biopsia ottenuti chirurgicamente; lesioni che visivamente sembrano essere malate, possono infatti essere fibrosi o cicatrici da altre cause6. La gravità e l'estensione della malattia non sono correlate alla sintomatologia7.
Le lesioni dell'endometriosi sono costituite da tipi cellulari eterogenei e popolazioni che interagiscono in modi complessi all'interno del microambiente, limitando quindi l'utilità dei modelli cellulari8,9. Esistono modelli in vivo, ma questi hanno sfide e limitazioni intrinseche10,11,12. I modelli di primati sono ideali ma spesso non sonofattibili13,14,15. Pochi mammiferi non primati hanno le mestruazioni e sviluppano l'endometriosi spontaneamente16. Esistono modelli di roditori di endometriosi, ma ognuno ha limitazioni17. Molti di questi modelli richiedono un intervento chirurgico di sopravvivenza per suturare o impiantare il tessuto endometriale nella parete o nell'intestino del ricevente donatore, aggiungendo complessità tecnica, necessità di anestesia e confondendo i fattori immunitari dell'intervento stesso18,19,20. Inoltre, molti modelli richiedono l'ovariectomia e l'integrazione di estrogeni; mentre aumenta la resa della lesione, questo aggiunge tempo, spese e ulteriori interventi chirurgici di sopravvivenza. I modelli di iniezione intraperitoneale (IP) non richiedono anestesia o chirurgia di sopravvivenza e questi modelli simulano logicamente le mestruazioni retrograde meglio dei modelli di sutura21,22,23. La maggior parte dei modelli IP, tuttavia, sono soggetti a una maggiore variabilità nella posizione della lesione a causa della dispersione casuale dei frammenti endometriali dopo l'iniezione e quindi a una maggiore distorsione nell'identificazione e nella misurazione delle lesioni.
Qui presentiamo un modello murino di endometriosi che integra diverse caratteristiche dei modelli di endometriosi esistenti in un sistema nuovo, semplificato ed efficiente che si basa sulla quantificazione microscopica al posto della classificazione soggettiva.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting PMSG into donor mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Tuberculin syringe with 27G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-87</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant mare serum gonadotropin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-70-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6&#8221; serrated forceps, curved tip</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72993-6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol solution</td>
			<td>Pharmco</td>
			<td>33000HPLCCS4L</td>
			<td>70% solution dilute ethyl acetate 200 proof</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>ME54TE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide</td>
			<td>TriGas Supplier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S14000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 10 disposable scalpel</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9999403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, curved</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, straight</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica SE 4</td>
			<td>For tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instrument sterilization tray</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>66112-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-202-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting into recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>301025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>148265d</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 uL pipette tip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double distilled water</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex bulb</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro cover glass slip</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48366-067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM IL</td>
			<td>For evaluating vaginal cytology smears</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for harvesting tissue from recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy foam pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-038-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Digital Calipers</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62065-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing/embedding cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic murine model of endometriosis using naturally cycling mice

L'endometriosi è una delle principali cause di dolore pelvico e infertilità. È definito dalla presenza di tessuto endometriale in posizioni extrauterine. Lo sviluppo di nuove terapie e strumenti diagnostici per l'endometriosi è stato limitato a causa in parte delle sfide nello studio della malattia. Al di fuori dei primati, pochi mammiferi hanno le mestruazioni e nessuno sviluppa endometriosi spontanea. I modelli di roditori sono popolari ma richiedono l'induzione artificiale dell'endometriosi, con molti che utilizzano topi immunocompromessi o malattie indotte chirurgicamente. Recentemente, è stata data maggiore attenzione ai modelli che coinvolgono l'iniezione intraperitoneale. Presentiamo un modello murino di endometriosi che integra diverse caratteristiche dei modelli di endometriosi esistenti in un nuovo sistema semplificato che si basa sulla quantificazione microscopica al posto della classificazione soggettiva. In questo modello, eseguiamo la stimolazione ormonale dei topi donatori, l'iniezione intraperitoneale, l'indagine addominale sistematica e la raccolta dei tessuti e la quantificazione istologica che può essere eseguita e verificata in qualsiasi momento dopo l'autopsia. Questo modello richiede risorse e formazione minime; non richiede competenze da parte di tecnici di laboratorio nella chirurgia murina di sopravvivenza o nell'identificazione di lesioni endometriotiche grossolane; può essere usato in topi immunocompromessi, immunocompetenti e/o mutanti; e crea in modo affidabile lesioni endometriotiche che sono istologicamente coerenti con la malattia endometriotica umana.

Per un esperimento iniziale di prova del concetto, l'endometrio donatore di topi RFP è stato iniettato in topi riceventi wildtype. La colorazione H&E ha rivelato la conferma istopatologica dell'architettura classica della lesione dell'endometriosi (Figura 3A). La microscopia fluorescente ha confermato che la lesione osservata in questione proveniva dal donatore (Figura 3B).
Il secondo esperimento è stato eseguito utilizzando 10 dona...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice at JoVE.com

A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Molti modelli di endometriosi di roditori sono limitati dalla complessità tecnica, dalla riproducibilità e / o dalla necessità di animali immunocompromessi o topi reporter speciali. Presentiamo un sistema semplificato di induzione della lesione utilizzando qualsiasi topo sperimentale con un sistema di punteggio oggettivo verificabile in modo indipendente e senza necessità di ovariectomia o chirurgia di sopravvivenza.

Un modello murino singenico di endometriosi utilizzando topi naturalmente ciclabili

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The ...

a-syngeneic-murine-model-of-endometriosis-using-naturally-cycling-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

4.9K Views.  Cleveland Clinic. Molti modelli di endometriosi di roditori sono limitati dalla complessità tecnica, dalla riproducibilità e / o dalla necessità di animali immunocompromessi o topi reporter speciali. Presentiamo un sistema semplificato di induzione della lesione utilizzando qualsiasi topo sperimentale con un sistema di punteggio oggettivo verificabile in modo indipendente e senza necessità di ovariectomia o chirurgia di sopravvivenza.

Video: A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of lesions, and/or chronic pharmaceutical management of pain and infertility symptoms. The cost associated with endometriosis has been estimated at 22 billion dollars per year in the United States1. To further our understanding of mechanisms underlying this enigmatic disease, animal models have been employed. Primates spontaneously develop endometriosis and therefore primate models most closely resemble the disease in women. Rodent models, however, are more cost effective and readily available2. The model that we describe here involves an autologous transfer of uterine tissue to the intestinal mesentery (Figure 1) and was first developed in the rat3 and later transferred to the mouse4. The goal of the autologous rodent model of surgically-induced endometriosis is to mimic the disease in women. We and others have previously shown that the altered gene expression pattern observed in endometriotic lesions from mice or rats mirrors that observed in women with the disease5,6. One advantage of performing the surgery in the mouse is that the abundance of transgenic mouse strains available can aid researchers in determining the role of specific components important in the establishment and growth of endometriosis. An alternative model in which excised human endometrial fragments are introduced to the peritoneum of immunocompromised mice is also widely used but is limited by the lack of a normal immune system which is thought to be important in endometriosis2,7. Importantly, the mouse model of surgically induced endometriosis is a versatile model that has been used to study how the immune system8, hormones9,10 and environmental factors11,12 affect endometriosis as well as the effects of endometriosis on fertility13 and pain14.

A description of the surgical induction of endometriosis in mice and rats by auto-transplantation of uterine tissue to the arterial cascade of the intestinal mesentery.

Modello murino di endometriosi chirurgicamente indotto da Auto-trapianto di tessuto uterino

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Ricerca

Medicina

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

Modello murino di guarigione delle ferite

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Murino cervicale Cuore trapianto Modello utilizzando una tecnica Cuff Modificato

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

Un modello murino di emorragia subaracnoidea

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, murine pancreatic tumor model of hepatic metastases via a hemispleen injection of syngeneic murine pancreatic tumor cells is described. This model mimics many of the clinical conditions in patients with metastatic disease to the liver. Mice consistently develop metastases in the liver allowing for investigation of the metastatic process, experimental therapy testing, and tumor immunology research.

A preclinical, murine model of hepatic metastases performed via a hemispleen injection technique.

Un preclinici Modello murino di metastasi epatiche

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

A &quot;Patient-Like&quot; Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

A &quot;paziente-Like&quot; ortotopico Singenico modello murino della carcinoma epatocellulare Metastasi

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

Iniezione di cellule singenici del topo melanoma per determinare il loro potenziale metastatico nei polmoni

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

Modello di trapianto aortico cervicale murine utilizzando una tecnica di manette non sutura modificata

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...