Reizes laboratuvarı üyelerine makalenin hazırlanması sırasındaki eleştirel incelemeleri ve içgörüleri için ve Lerner Araştırma Enstitüsü'ndeki Görüntüleme ve Histoloji çekirdeklerine veri toplama ve veri analizi konusundaki yardımları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Cleveland Clinic'teki Araştırma Programı Komitesi aracılığıyla bir iç hibe fonu ve Üreme Araştırmaları Derneği ve Bayer aracılığıyla harici bir hibe ile desteklendi. Reizes Laboratuvarı'ndaki araştırmalar ayrıca VeloSano Bike to Cure, Jinekolojik Kanser araştırma mükemmelliği merkezi ve Laura J. Fogarty Uterin Kanser Araştırmaları Için Bağışlanan Sandalye aracılığıyla finanse edilir. Cleveland Clinic, Şekil 1 ve Şekil 2için telif hakkı iznine sahiptir.

NOT: Bu çalışmada hayvanların kullanımı Cleveland Clinic Lerner Araştırma Enstitüsü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Kamuya açık tüm hayvan bakım ve kullanım standartları, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından kurallara uygun olarak gerçek gerçekleştirildi. Bu prosedür aseptik teknikler kullanmaktadır. Petri kabı sterildir. Kullanılan PBS/salin sterildir. Nekropsi ve doku diseksiyonu için cerrahi aletler otoklav ile sterilize edilir. Kontaminasyonu azaltmak için hayvan vakaları arasındaki aletlerde (seans başına birden fazla ise) %70 EtOH kullanıyoruz.
1. Donör ve alıcı farelerin hazırlanması (bkz. Şekil 1)
<ol><li>Laboratuvar hayvanlarıyla çalışmak için uygun onayın yerinde olduğundan emin olun.</li>
	<li>Farenin zorluğunu belirleyin. Bu deneylerde, C57BL / 6J arka planına sahip wildtype ve mutant fareler kullanılmıştır, ancak benzer modelleri kullanan araştırmacılar BALB / c fareler10gibi diğer fare suşları ile başarıyı bildirmektedir. Ek olarak, donör ve/veya alıcı fareler GFP veya RFP fareleri gibi muhabir sistemlerini kullanabilir (bkz. Şekil 2 ve Şekil 3).</li>
	<li>Endometriyal doku naklinin zamanlaması için, donör farelerin gonadotropin enjeksiyonu sırasında 22-24 günlük olduğundan emin olun. Bu, üreme olarak naif olmalarını sağlar, örneğin henüz östrous bisiklet sürmeye başlamamıştır.</li>
	<li>Alıcı farelerin 2 ila 4 ay arasında üreme bozulmadan (önceden yumurtalık ameliyatı yapılmaz) olduğundan emin olun. Gerekli olmasa da, devam eden östrous bisiklet sürmeyi kolaylaştırmak için ve endometriyal doku naklinden önce tekrar 72 saat içinde, bir erkek fare kafesinden idrarla ıslatılmış yatakların periyodik olarak alıcının kafesine yerleştirilmesi önerilir. NOT: Bu, alıcıların östrous döngüsünün senkronizasyonunu sağlamaz, çünkü idrarla ıslatılmış yataklar kullanılan erkek yatak miktarına oldukça bağlıdır ve değişken sonuçlara sahiptir. Östrous döngüsünün senkronizasyonu istenirse, 100 ng/100 μL estradiolden oluşan ardışık üç deri altı enjeksiyonu tüm hayvanları östrous faza getirecektir. Estrous döngüsünün evresine dayanan lezyon indüksiyonunda bir fark bulamasak da, diğer gruplar döngü fazını önemli buldu10.</li>
	<li>Hamile Mare Serum Gonadotropin'i (PMSG, 200 μL'ye seyreltilmiş 2 IU) ince bir iğne kullanarak (25-27 Gönerilir)deri altından donör farelere deri altından enjekte edin. Endometriozis oluşumuna daha az duyarlı olan yumurtlamayı ve ardından gelen yüksek progesteron ortamını tetikleyeceği için alıcı farelere PMSG vermeyin. NOT: Önceki fare modelleri, endometriyal hasat23'tenönce donör farelerde endometriyal çoğalması teşvik etmek için PMSG veya östrojen kullanmıştır. PMSG aşağıdaki nedenlerden dolayı önerilir: PMSG'nin yarı ömrü 40 saat, 17-beta-estradiol'un yarı ömrü ise sadece 2 saattir. Endometriyal doku tedariki öncesinde donörlerde 40 saat pmsg tek bir deri altı enjeksiyonu kullanılarak, endojen östrojen uyarmak için hareket gonadotropin stimülasyonuna sürekli bir maruz kalma süresi sağlar. Eksojen östrojenin birçok preparabı, endometriumu yeterince astarlamak için birden fazla enjeksiyon gerektirir.</li>
	<li>PMSG enjeksiyonundan sonra, nekropsi, tedarik ve nakli 38-42 saat arasında alıcıya planlayın. Yumurtlamadan önce dokunun toplanmasını sağlamak için gonadotropin enjeksiyonunu takiben endometriyal doku hasadını zamanlayın, bu da enjeksiyon sonrası 42 saattir. Yumurtlama, lezyon indüksiyonunu azaltacak yüksek progesteron (P4) ortamı üretir.</li>
</ol>2. Donör fare endometriyal dokusunun temini
<ol><li>Donör fare ötanaziden sonra (CO2 odasını ve ardından servikal çıkığı kullanarak), karnı% 70 etanol çözeltisi ile püskürtün; bu, temin edilen dokunun cilt florasından ve yerinden edilmiş tüylerden kirlenmesini azaltmaya yarar. Diseksiyon makası ile cilt ve deri altı dokusundan orta çizgide sığ bir enine yudum yapın. Daha sonra cilt kesisinin her iki tarafını kavrayarak, karnı açmak için künt çekiş kullanın.</li>
	<li>Rahmi tanımla. Uterusun çıkarılmasından önce, bitişik bağ dokusunu kesin. Her rahim boynuzu kendi fallop tüpünün hemen altında transekte edin ve daha sonra tüm uterus bloğunu çıkarmak için serviksi transekte edin.</li>
	<li>Karın boşluğundan çıkarıldıktan sonra, uterusun dikkatlice incelenmesi ve ek periferik yağ veya bağ dokusunu çıkarın. Uterusun bir Petri kabına soğuk PBS damlacıklarına yerleştirin. Tüm uterusun birleşik kütlesini belirleyin ve belgeleyin.</li>
	<li>Her boynuzu uterus fundusundan transeksiyon, her boynuzun uzunluğunu en üst düzeye çıkarmak için fundusa mümkün olduğunca yakın hale getirir. Bir diseksiyon mikroskobu yardımıyla, kesme makasının bir bıçağını ilk boynuzun lümeninin içine yerleştirin, ardından tüpün ana ekseni boyunca kesin. Tüpü dikkatlice açın, hangi tarafın serosa, hangi tarafın epitel olduğunu unutmayın.</li>
	<li>Yeni bir Petri kabına 500 cc tuzlu su veya PBS koyun; yüzey gerilimi nedeniyle sıvı bir arada kalacaktır.</li>
	<li>Daha sonra, uterusun parçalanmasını düzgün bir şekilde gerçekleştirin. Birçok küçük lezyona göre daha az büyük lezyona sahip olmak daha iyidir. Endometriyal tabakayı kavrayarak ve soyup çıkararak epitelleri miyometriyumdan ayırarak başlayın.<ol>
<li>Alternatif olarak, miyometriumu ayırmadan (epitel tarafı tamamen maruz kaldığı sürece) dokuyu parçalayın, ancak miyometriumu korumak bu modelin insan hastalığıyla fizyolojik ilgisini azaltır. Parçaların mümkün olduğunca büyük ancak 18 G iğneden geçecek kadar küçük olduğundan emin olun; (1 mm x 1 mm önerilir).</li>
		<li>Bu 1 mm x 1 mm parçalardan 10-12'sini ilk boynuzdan toplayın (bu da C57BL/ 6J farelerde kabaca 40 mg dokuya karşılık gelir). Toplanan parçaları sıvı koleksiyonuna yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fare başına toplam yaklaşık 24 parça için diğer rahim boynuzu için aynı adımları uygulayın. Toplam parça sayısını belgele.</li>
</ol>3. Alıcı fareye doku parçalarının periton enjeksiyonu
<ol><li>Askıya alınan 1 mm x 1 mm'lik parçaları 1 cc şırınnanın künt ucunun künt ucunun kullanılarak aspire edin; toplam hacim 1 mL olmalıdır.</li>
	<li>Tam şırıngaya 18 G'lik bir iğne takın ve sıvıyı iğneye yükleyin. Tüm dokunun iğneden geçmesini sağlamak için Petri kabına sahte bir enjeksiyon düşünün.</li>
	<li>Alıcı fareyi alın. IP enjeksiyonundan önce veya sonra, östrous döngüsü belgeleri için alıcı farenin vajinal bir lekesini elde edin (vajinal delikte ampul şırıngını kullanarak ve kapakla cam kaydırağa kaplanmış 10 μL salin).</li>
	<li>Parçaların şırınd ile intraperitoneal enjeksiyonu 45 derecelik bir açıyla gerçekleştirin, deri altından enjekte etmemeye dikkat edin.</li>
	<li>Parçalar enjeksiyondan sonra kalırsa, tüm parçaların intraperitoneal olarak başarıyla enjekte edildiğinden emin olmak için enjeksiyon için şırındağa ilave 200 μL sıvı çizin.</li>
	<li>Kanama veya komplikasyon olmadığından emin olduktan sonra, alıcı fareleri kafeslerine geri yerleştirin ve normal bir diyetle besleyin.</li>
</ol>4. Endometriotik lezyonların hasadı
<ol><li>Nakil sonrası parça enjeksiyonundan yaklaşık 21 gün sonra alıcı fareleri ötenazi yapın. NOT: Deneyimlerden ve benzer modelleri kullanan işbirlikçilerle tartışmadan, maksimum lezyon büyüklüğü ve sayısı nakil sonrası yaklaşık 3 haftada gerçekleşir; 3 hafta sonra lezyonlar boyut olarak gerilemeye başlar. IACUC onaylı ötanazi yöntemi kullanılmaktadır.</li>
	<li>Ötenazi ve servikal çıkık sonrasında, hayvanın karnına% 70 etanol püskürtün ve cildi diseksiyon makası ile yüzeysel olarak kesmek için çadırlayın. Karnı açıkça açmak için cildi ve deri altı boşluğu makasla inzivaya çıkarın.</li>
	<li>Daha fazla diseksiyon yapılmadan önce, brüt lezyonlar için tam bir anket yapılır, boyutu kaliperlerle ölçülür ve anatomik bölgelerine göre belgelenir (aşağıya bakın).</li>
	<li>Blok olarak üç farklı anatomik bölgenin tam koleksiyonunu gerçekleştirin (lezyonların büyük ölçüde takdir edilip edilemeyeceğine bakılmaksızın). Lezyonlar diğer bölgelerde (örneğin bağırsaklar) görülüyorsa, lezyon aşağıdaki üç alandan birini geçmedikçe bunlar göz ardı edilmeli ve toplanmamalıdır.<ol>
<li>A = karın duvarı/periton (numuneler arasında tutarlı olduğu sürece bir kasete düzleştirilebilir veya yuvarlanabilir).</li>
		<li>B = pankreas ve mezenterik yağ.</li>
		<li>C = parauterin bağ dokusu ve yağ (uterusun etrafını saran ancak mesane dışında herhangi bir organ içermeyen beyaz ışıltılı doku; mesaneyi bir lezyonla karıştırmamaya özen gösterir).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Diseksiyon yapılan her alanı uygun şekilde etiketlenmiş bir kasete yerleştirin ve histolojik bölümleme için laboratuvar protokolüne göre formalin ve işleme yerleştirin.</li>
	<li>Bölüm formalin blokları iki düzgün derinlikte doku alanı başına iki slaytta (D1 ve D2).</li>
</ol>5. Endometriotik lezyonların puanlatması
<ol><li>Tarama (40x büyütmede) ve arşiv slaytları.</li>
	<li>Dijital slayt okuma yazılımını kullanın, endometriotik bir lezyonun kenarları arasındaki en uzun mesafeyi (X) tanımlayın - kenarın bezlerden mi yoksa stromadan mı oluştuğunu ve işaretleyin. Sürekli bir lezyon stroma ile çevrili bezlerle tanımlanır; çizgi mutlaka sadece endometriotik dokudan geçmez (düzensiz şekilli veya dalgalı bir endometriozis odağında uç noktaların belirlenmesinde olduğu gibi) ancak iki uç noktanın sürekli stroma ve/veya bezlerle bağlanması gerekir (bkz. Şekil 4).</li>
	<li>yukarıdaki kurallara uyarak ikinci satırın uzunluğu belirlenecek şekilde, ilk satır boyunca 90 derecelik ikinci bir çizgi (Y) yapın.</li>
	<li>Bitişik olmayan birden fazla lezyonla karşılaşılırsa, her bireye kendi X ve Y ölçümlerini verin.</li>
	<li>Her slayt için son puanı, her lezyonun alanlarının (X * Y) toplamı olarak hesaplayın.</li>
	<li>O bölgenin (A, B, C) son puanı olarak iki slayttan (D1 vs D2) daha büyük puanları alın.</li>
	<li>Bu hayvan için son mikroskobik puanı vermek için her bölgeden puanları toplar.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> England Journal of Medicine. 382 (13), 1244-1256 (2020).</li><li>Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+pharmacotherapy+in+the+treatment+of+endometriosis+across+the+lifespan.">The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan.</a> Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).</li><li>Giudice, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Endometriosis.">Clinical practice. Endometriosis.</a> New England Journal of Medicine. 362 (25), 2389-2398 (2010).</li><li>D'Hooghe, T. M., Debrock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis,+retrograde+menstruation+and+peritoneal+inflammation+in+women+and+in+baboons.">Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons.</a> Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).</li><li>Ahn, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+and+immune+dysfunction+in+endometriosis.">Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis.</a> BioMed Research International. 2015, (2015).</li><li>Falcone, T., Flyckt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+management+of+endometriosis.">Clinical management of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (3), 557-571 (2018).</li><li>Vercellini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+endometriosis+stage,+lesion+type,+patient+characteristics+and+severity+of+pelvic+pain+symptoms:+a+multivariate+analysis+of+over+1000+patients.">Association between endometriosis stage, lesion type, patient characteristics and severity of pelvic pain symptoms: a multivariate analysis of over 1000 patients.</a> Human Reproduction. 22 (1), 266-271 (2007).</li><li>Bulun, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Endocrine Reviews. 40 (4), 1048-1079 (2019).</li><li>Brueggmann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+three-dimensional+in+vitro+models+of+ovarian+endometriosis.">Novel three-dimensional in vitro models of ovarian endometriosis.</a> Journal of Ovarian Research. 7, 17 (2014).</li><li>Dodds, K. N., Beckett, E. A. H., Evans, S. F., Hutchinson, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+is+modulated+by+the+natural+estrous+cycle+and+mouse+strain+in+a+minimally+invasive+model+of+endometriosis.">Lesion development is modulated by the natural estrous cycle and mouse strain in a minimally invasive model of endometriosis.</a> Biology of Reproduction. 97 (6), 810-821 (2017).</li><li>Martinez, J., Bisbal, V., Marin, N., Cano, A., G&#243;mez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+lesion+size+in+a+heterologous+mouse+model+of+endometriosis.">Noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (144), (2019).</li><li>Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+surgically-induced+endometriosis+by+auto-transplantation+of+uterine+tissue.">Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3396 (2012).</li><li>Nishimoto-Kakiuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+endometriosis+in+cynomolgus+monkeys+as+a+clinically+relevant+experimental+model.">Spontaneous endometriosis in cynomolgus monkeys as a clinically relevant experimental model.</a> Human Reproduction. 33 (7), 1228-1236 (2018).</li><li>Nair, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+model+of+human+endometriosis+by+induced+unopposed+estrogenicity+in+baboons.">An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons.</a> Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).</li><li>Lagan&#224;, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+animal+models+for+endometriosis+research:+a+long+and+windy+road.">Translational animal models for endometriosis research: a long and windy road.</a> Annals of Translational Medicine. 6 (22), 431 (2018).</li><li>Bellofiore, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+evidence+of+a+menstruating+rodent:+the+spiny+mouse+(Acomys+cahirinus).">First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus).</a> Amercian Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (1), 1-11 (2017).</li><li>Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+endometriosis:+identifying+mechanisms+of+disease+and+therapeutic+targets.">Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets.</a> Current Women's Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).</li><li>Bilotas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+endometriosis+and+pregnancy+in+a+mouse+model.">Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model.</a> PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).</li><li>Peterse, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+women:+a+laparoscopic+mouse+model+for+endometriosis.">Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).</li><li>Richards, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KLF11+is+an+epigenetic+mediator+of+DRD2/dopaminergic+signaling+in+endometriosis.">KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis.</a> Reproductive Sciences. 224 (8), 1129-1138 (2017).</li><li>Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+Mouse+Model+of+Experimentally+Induced+Endometriosis+to+Evaluate+and+Compare+the+Effects+of+Bisphenol+A+and+Bisphenol+AF+Exposure.">Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure.</a> Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-451+deficiency+is+associated+with+altered+endometrial+fibrinogen+alpha+chain+expression+and+reduced+endometriotic+implant+establishment+in+an+experimental+mouse+model.">miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model.</a> PloS One. 9 (6), 100336 (2014).</li></ol>

Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.

Çalışmamız, endometriozisin farelerde ovaerektomi ve/veya sağkalım cerrahisi kullanılmadan güvenilir bir şekilde indüklenebileceğini ve ektopik endometriyal lezyonların karın ve histolojik analizlerin standart bir anketi kullanılarak tespit edilip nicelleştirilebileceğini göstermektedir.
Endometriozis ile ilgili birçok murine çalışması, donör endometriyumun bağırsak, karın d...

Endometriozis, kadınlar üzerinde önemli finansal ve sağlık yükleri olan kadın üreme sisteminin esrarengiz bir hastalığıdır1,2. Endometriozis etiyolojisi tam olarak anlaşılamamıştır ve koelomik metaplazi, embriyonik Müllerian restleri, kemik iliği türevli progenitör hücrelerin işe alınması ve retrograd adet3dahil olmak üzere birden fazla açıklama önerilmiştir. Önerilen bu mekanizmaların birden fazla yönü söz konusu olsa da ve hastalığın tüm formlarını tek bir açıklama açıklayamasa da, endometriozis patogenezinin önde gelen modeli retrograd adettir. Retrograd adet, adet atıklarının fallop tüplerinden ve periton boşluğuna geçişidir; adet gören kadınların% 90'ının düzenli olarak retrograd adet gördüğü tahmin edilmektedir4,5. Retrograd adet görmenin bu yaygın fenomeni göz önüne alındığında, endometriozisin neden sadece kadınların bir alt kümesinde geliştiği belirsizdir5. Bu hastalığın etiyolojisini daha iyi anlamak için doğrudan insan çalışmaları mümkün değildir ve hayvan çalışmaları garanti edilir.
Endometriozis hem tedavi etmek hem de çalışmak için bir zorluktur. Hastalığın prevalansı bilinmemekle birlikte %101olarak tahmin edilmektedir. Bazı ileri endometriozis türleri noninvaziv görüntüleme ile doğru bir şekilde tanımlanabilirken, kesin tanı ancak cerrahi olarak elde edilen biyopsi örneklerinin histopatolojik analizi ile elde edilir; görsel olarak hastalıklı gibi görünen lezyonlar, aslında fibrozis veya diğer nedenlerden yara izi olabilir6. Hastalığın şiddeti ve kapsamı semptomatoloji ile ilişkili değildir7.
Endometriozis lezyonları, mikroçevrinde karmaşık şekillerde etkileşime giren heterojen hücre tiplerinden ve popülasyonlardan oluşur, bu nedenle hücresel modellerin yararlılığını sınırlar8,9. In vivo modelleri vardır, ancak bunlar doğal zorluklara ve sınırlamalara sahiptir10,11,12. Primat modelleri idealdir, ancak genellikle uygulanabilir değildir13,14,15. Birkaç primat olmayan memeli adet gören ve kendiliğinden endometriozis geliştiren16. Kemirgen endometriozis modelleri vardır, ancak her birinin sınırlamaları vardır17. Bu modellerin çoğu, donör alıcı duvarına veya bağırsayasına endometriyal doku dikmek veya implante etmek için sağkalım ameliyatı gerektirir, teknik karmaşıklık, anestezi ihtiyacı ve ameliyatın kendisinden şaşırtıcı bağışıklık faktörleri ekler18,19,20. Ek olarak, birçok model yumurtalık ve östrojen takviyesi gerektirir; lezyon verimini artırırken, bu zaman, masraf ve ek sağkalım cerrahisi ekler. Intraperitoneal (IP) enjeksiyon modelleri anestezi veya sağkalım ameliyatı gerektirmez ve bu modeller mantıksal olarak retrograd adeti dikiş modellerinden daha iyi simüle eder21,22,23. Bununla birlikte, çoğu IP modeli, enjeksiyondan sonra endometriyal parçaların rastgele dağılımı ve dolayısıyla lezyon tanımlama ve ölçümünde daha fazla önyargı nedeniyle lezyon konumunda daha fazla değişkenliğe maruz kalmaktadır.
Burada, mevcut endometriozis modellerinin çeşitli özelliklerini öznel derecelendirme yerine mikroskobik niceleme dayanan yeni, basitleştirilmiş ve verimli bir sisteme entegre eden bir endometriozis murine modeli sunuyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting PMSG into donor mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Tuberculin syringe with 27G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-87</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant mare serum gonadotropin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-70-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6&#8221; serrated forceps, curved tip</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72993-6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol solution</td>
			<td>Pharmco</td>
			<td>33000HPLCCS4L</td>
			<td>70% solution dilute ethyl acetate 200 proof</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>ME54TE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide</td>
			<td>TriGas Supplier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S14000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 10 disposable scalpel</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9999403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, curved</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, straight</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica SE 4</td>
			<td>For tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instrument sterilization tray</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>66112-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-202-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting into recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>301025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>148265d</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 uL pipette tip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double distilled water</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex bulb</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro cover glass slip</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48366-067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM IL</td>
			<td>For evaluating vaginal cytology smears</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for harvesting tissue from recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy foam pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-038-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Digital Calipers</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62065-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing/embedding cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic murine model of endometriosis using naturally cycling mice

Endometriozis pelvik ağrı ve kısırlığın önde gelen bir nedenidir. Ekstrauterin yerlerde endometriyal dokunun varlığı ile tanımlanır. Endometriozis için yeni tedavilerin ve tanı araçlarının geliştirilmesi, kısmen hastalığın incelenmesindeki zorluklar nedeniyle sınırlı olmuştur. Primatların dışında, az sayıda memeli adet gösterir ve hiçbiri spontan endometriozis geliştirmez. Kemirgen modelleri popülerdir, ancak endometriozis yapay indüksiyonu gerektirir, birçoğu immün sistemi baskılanmış fareler veya cerrahi olarak indüklenen hastalık kullanır. Son zamanlarda intraperitoneal enjeksiyon içeren modellere daha fazla dikkat edilmiştir. Mevcut endometriozis modellerinin çeşitli özelliklerini öznel derecelendirme yerine mikroskobik niceleme dayanan yeni, basitleştirilmiş bir sisteme entegre eden bir endometriozis modeli sunuyoruz. Bu modelde donör farelerin hormonal stimülasyonu, intraperitoneal enjeksiyon, sistematik abdominal etüt ve doku hasadı ve nekropsi sonrası her an yapılabilen ve doğrulanabilen histolojik niceleme gerçekleştiriyoruz. Bu model minimum kaynak ve eğitim gerektirir; murine sağkalım cerrahisinde veya brüt endometriotik lezyonların tanımlanmasında laboratuvar teknisyenleri tarafından uzmanlık gerektirmez; bağışıklık sistemi baskılanmış, immün yetecekli ve/veya mutant farelerde kullanılabilir; ve güvenilir bir şekilde insan endometriotik hastalığı ile histolojik olarak tutarlı endometriotik lezyonlar oluşturur.

Konsept deneyinin ilk kanıtı için, RFP farelerinden donör endometriyum wildtype alıcı farelere enjekte edildi. H&E lekeleme endometriozis lezyonunun klasik mimarisinin histopatolojik teyidini ortaya koydu (Şekil 3A). Floresan mikroskopi, söz konusu gözlenen lezyonun donörden kaynaklandığını doğruladı (Şekil 3B).
İkinci deney, 10 wildtype C57BL/6J bağışçısı ve 10 alıcı kullanılarak gerçekleştirildi. Ek 5 al...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice at JoVE.com

A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.

Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The ...

a-syngeneic-murine-model-of-endometriosis-using-naturally-cycling-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

4.9K Görüntüleme.  Cleveland Clinic. Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.

Video: A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of lesions, and/or chronic pharmaceutical management of pain and infertility symptoms. The cost associated with endometriosis has been estimated at 22 billion dollars per year in the United States1. To further our understanding of mechanisms underlying this enigmatic disease, animal models have been employed. Primates spontaneously develop endometriosis and therefore primate models most closely resemble the disease in women. Rodent models, however, are more cost effective and readily available2. The model that we describe here involves an autologous transfer of uterine tissue to the intestinal mesentery (Figure 1) and was first developed in the rat3 and later transferred to the mouse4. The goal of the autologous rodent model of surgically-induced endometriosis is to mimic the disease in women. We and others have previously shown that the altered gene expression pattern observed in endometriotic lesions from mice or rats mirrors that observed in women with the disease5,6. One advantage of performing the surgery in the mouse is that the abundance of transgenic mouse strains available can aid researchers in determining the role of specific components important in the establishment and growth of endometriosis. An alternative model in which excised human endometrial fragments are introduced to the peritoneum of immunocompromised mice is also widely used but is limited by the lack of a normal immune system which is thought to be important in endometriosis2,7. Importantly, the mouse model of surgically induced endometriosis is a versatile model that has been used to study how the immune system8, hormones9,10 and environmental factors11,12 affect endometriosis as well as the effects of endometriosis on fertility13 and pain14.

A description of the surgical induction of endometriosis in mice and rats by auto-transplantation of uterine tissue to the arterial cascade of the intestinal mesentery.

Uterus Doku Otomatik nakli Cerrahi indüklenen Endometriozis Fare Modeli

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Tıp

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

Yara Şifa murin Modeli

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

Subaraknoid Kanama bir fare modeli

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, murine pancreatic tumor model of hepatic metastases via a hemispleen injection of syngeneic murine pancreatic tumor cells is described. This model mimics many of the clinical conditions in patients with metastatic disease to the liver. Mice consistently develop metastases in the liver allowing for investigation of the metastatic process, experimental therapy testing, and tumor immunology research.

A preclinical, murine model of hepatic metastases performed via a hemispleen injection technique.

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

Farelerde Basit Kritik ölçekli Femoral Hata Modeli

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

Bir &quot;Hasta gibi&quot; Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

Singenik Fare Melanom Hücreleri Enjeksiyon Akciğerler Onların Metastatik Potansiyeli belirleme

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...