圧反射感度は、動脈血圧の変化と心拍数の反射変化との関係を表します。血圧が上昇すると心拍数が低下し、逆もまた同様です。意識のあるマウスにおける遠隔心電図と血圧測定を組み合わせることで、圧反射感度の決定が可能になります。
圧反射感度を決定するための古い方法に対するこの技術の主な利点は、自発反射を測定することです。マウスは目を覚ましており、拘束する必要はありません。血圧変化を誘発するために血管作用薬を注射するなどの侵襲的な手順は必要ありません。
圧反射は、動脈性高血圧、心筋梗塞、心不全などの心疾患患者のリスク層別化に使用できます。圧反射感受性の病理学的変化は、心臓死亡のリスク増加と関連している。したがって、心血管疾患の重要な予後マーカーです。
頸動脈の穿刺やカニューレ挿入などの顕微手術の詳細は、プロトコルの最も困難なステップです。一時的に血流を停止し、カニューレ挿入のために動脈をわずかに持ち上げるために、縫合糸に十分な張力があることを確認するように注意する必要があります。トリマーを使用して、麻酔をかけたマウスの手術領域をあごの下から横胸筋に向かって剃ることから始めます。
マウスを仰臥位にした後、麻酔中に動物の目を保護するために眼軟膏を塗布します。以前に剃った手術部位に脱毛クリームを塗ります。3〜4分後、綿パッドと温水を使用して髪と脱毛クリームを取り除き、皮膚が清潔で、手術中に傷が汚染されないように髪の毛やクリームが残っていないことを確認します。
あごのすぐ下から首の皮膚を通して1〜1.5センチメートルの直線正中線切開を行います。鉗子で皮膚を強くつまみすぎて壊死を引き起こし、手術後の創傷治癒障害につながる可能性のある鉗子で皮膚を結合組織から分離することにより、切開の両側に皮下スペースを作成します。綿の先端アプリケーターを使用して耳下腺と顎下腺を分離し、気管の上にある筋肉組織を露出させます。
湾曲した解剖鉗子で左唾液腺を引っ込めて、気管の横方向に位置する左頸動脈を特定します。血管に沿って走っている迷走神経を傷つけないように細心の注意を払って、湾曲した鉗子を使用して隣接する組織から頸動脈を慎重に解剖します。鈍的解離を続け、左頸動脈を約10ミリメートルの長さに露出させ、血管筋膜および迷走神経から完全に分離します。
縫合糸と頸動脈の間の摩擦を減らすために湾曲した鉗子で血管をわずかに持ち上げながら、頸動脈の孤立した部分の下に非吸収性の5×ゼロシルク縫合糸を通過させます。頸動脈の分岐部のすぐ近くに頭蓋に縫合糸を配置します。次に、結び目を形成し、それを結び、血管を永久に結紮します。
頭蓋閉塞縫合の両端をサージカルテープで手術台に固定します。頸動脈の下に2番目の咬合縫合糸を通し、頭蓋縫合糸から約5ミリメートルの距離で尾側に配置し、緩い結び目を結びます。両縫合糸の端をサージカルテープで固定します。
頭蓋と尾の閉塞縫合糸の間に3番目の縫合糸を配置して、動脈をカニューレ挿入しながらカテーテルを所定の位置に保ち、緩い結び目を作ります。尾側咬合縫合糸をそっと引っ張り、緊張させて一時的に血流を止め、動脈をわずかに持ち上げます。曲がった針で頭蓋閉塞縫合糸の近位の動脈を慎重に貫通します。
曲がった針で頸動脈を少し持ち上げながら、血管カニューレ鉗子でカテーテルをつかみ、小さな穿刺に導入し、ゆっくりと血管内に滑り込ませます。同時に、曲がった針をそっと引き戻します。カテーテルが尾側咬合縫合糸に到達したら、固定縫合糸を少し締めてカテーテルを所定の位置に保ちます。
尾側閉塞縫合糸を緩めて、カテーテルの先端が大動脈弓に配置されるまでカテーテルをさらに動かせるようにします。適切に配置されたら、3つの縫合糸すべてでカテーテルを固定し、結び目をきつく引っ張らずに両端をできるだけ短く切ります。動物の左脇腹に向けられた首から皮下トンネルを形成し、小さな鈍い解剖ハサミを使用して小さなポーチを形成します。
温かい滅菌0.9%塩化ナトリウム溶液で満たされた1ミリリットルのシリンジでトンネルを灌漑し、約300マイクロリットルの溶液をポーチに入れます。鈍い鉗子で皮膚を慎重に持ち上げ、血圧カテーテルを頸動脈から引き抜かないように注意しながら、送信機装置本体をポーチに入れます。鈍い解剖ハサミで右胸筋への細いトンネルを形成し、鈍い鉗子を使用して負のリードをトンネルに配置します。
リードの末端を、6×0吸収性縫合材料を使用して胸筋にステッチで固定します。正のリードにループを形成し、その先端を左尾肋骨領域に配置し、6 x 0吸収性縫合糸を使用してその位置を固定します。ファイブバイゼロの非吸収性縫合材料を使用して、シングルノットで皮膚を閉じます。
さらに、動物が縫合糸を噛まないようにし、裂開を防ぐために、すべての結び目に少量の組織接着剤を塗布します。回復段階での創傷感染を防ぐために、10%ポビドンヨードヒドロゲルを創傷に塗布する。先制的な痛みを和らげるために、マウスがまだ麻酔下にある間に、0.9%塩化ナトリウムにカルプロフェンを皮下注射します。.
手術後12時間、摂氏36度に設定された加熱プラットフォームにケージの半分を配置し、マウスを暖かい場所に移して、動物が暖かい場所にとどまるか、目覚めたときにケージの涼しい部分に移動するかを選択できるようにします。データ収集に続いて、血圧とECGトレースを検査し、低活動の3時間のシーケンスをスクリーニングします。圧反射感度または BRS 解析を実行するには、BRS 解析パネルを開きます。
パネルに表示されるすべてのシーケンスを手動で検査し、異所性拍動、洞休止、不整脈イベント、またはノイズの多いデータを除外して、分析から正常に除外します。このプロトコルは、正確なBRS分析と、ECG間隔、血圧変動、不整脈検出などの幅広いECGまたはBP派生パラメータに使用できます。手術から十分に回復した健康なマウスは、暗期に活動、心拍数、および血圧の生理学的増加を示します。
シーケンス法を使用してBRSを決定し、収縮期血圧の自発的な上昇または下降を伴う3つ以上の拍動の短いシーケンス中に収縮期血圧とRR間隔を拍動ごとに調べました。RRと収縮期血圧の相関を評価するために、両方のパラメータを互いにプロットし、線形回帰直線の傾きをシーケンスごとに計算しました。収縮期血圧関係によってRRから計算された線形回帰直線の傾きによって反映される1,000拍当たりの総配列数および自発的BRSの平均ゲインは、分析において関心のあるパラメータである。
活動量が多い段階では、信号品質が低下し、ノイズが発生する可能性があります。最小相関係数に2つの低い値を設定すると、圧反射活動を反映しないが不整脈ビーズに起因する配列の誤検出も生じる。圧受容器感受性データの解釈のためには、圧受容器反射に関与する機能レベルを考慮することが重要である。
ニューロンレベルでは、反射の求心性、中枢性、または遠心性の成分が変化し得る。心血管レベルでは、洞結節の応答性の低下または増加は圧受容器感受性の変化を引き起こす可能性がある。このデータを使用して、圧反射感度と心臓洞房結節の機能だけでなく、広範囲のECGおよび血圧由来のパラメータも決定します。
これらには、例えば、収縮期血圧および拡張期血圧、ECG間隔、心拍変動、または蝉のリズムが含まれる。
