압력 반사 민감도는 동맥 혈압의 변화와 심박수의 반사 변화 사이의 관계를 설명합니다. 혈압이 상승하면 심박수가 감소하고 그 반대의 경우도 마찬가지입니다. 의식이 있는 생쥐의 원격 측정 심전도와 혈압 측정을 결합하면 압력 반사 감도를 측정할 수 있습니다.
압력반사 민감도를 결정하는 이전 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 자발적 반사를 측정한다는 것입니다. 생쥐는 깨어 있고 제지 할 필요가 없습니다. 혈압 변화를 유도하기 위해 혈관 작용 약물을 주사하는 것과 같은 침습적 절차는 필요하지 않습니다.
압력반사는 동맥성 고혈압, 심근경색, 심부전과 같은 심장질환 환자의 위험 계층화에 사용할 수 있습니다. 압력 반사 민감도의 병리학 적 변화는 심장 사망 위험 증가와 관련이 있습니다. 따라서 심혈관 질환의 중요한 예후 마커입니다.
경동맥 천자 및 캐뉼라와 같은 미세 수술 세부 사항은 프로토콜에서 가장 어려운 단계입니다. 일시적으로 혈류를 멈추고 캐뉼라 삽입을 위해 동맥을 약간 들어 올리기 위해 봉합사에 충분한 장력이 있는지 확인해야 합니다. 트리머를 사용하여 마취된 마우스의 수술 부위를 턱 아래에서 횡단 가슴 근육을 향해 면도하는 것으로 시작합니다.
마우스를 앙와위 자세로 놓은 후 마취 중에 동물의 눈을 보호하기 위해 눈 연고를 바르십시오. 이전에 면도한 수술 부위에 제모 크림을 바릅니다. 3-4 분 후 면봉과 따뜻한 물을 사용하여 머리카락과 제모 크림을 제거하고 피부가 깨끗하고 잔여 모발이나 크림이 없는지 확인하여 수술 중 상처가 오염되지 않도록합니다.
턱 바로 아래에서 시작하여 목 피부를 통해 1-1.5cm 직선 정중선 절개를하십시오. 뭉툭한 절개 가위로 밑에 있는 결합 조직과 피부를 분리하여 절개 부위 양쪽에 피하 공간을 만들고, 집게로 피부를 너무 세게 끼지 않도록 주의하여 괴사를 일으키고 수술 후 상처 치유 장애를 유발할 수 있습니다. 면봉 어플리케이터를 사용하여 이하선과 턱밑샘을 분리하여 기관 위에 있는 근육을 노출시킵니다.
기관 측면에 위치한 왼쪽 경동맥을 식별하기 위해 구부러진 해부 집게로 왼쪽 침샘을 수축시킵니다. 구부러진 집게를 사용하여 인접한 조직에서 경동맥을 조심스럽게 해부하고 혈관을 따라 흐르는 미주 신경을 손상시키지 않도록 매우 조심하십시오. 좌경동맥을 약 10mm 길이로 노출시키고 혈관 근막과 미주 신경에서 완전히 분리하기 위해 둔기 박리를 계속합니다.
봉합사와 경동맥 사이의 마찰을 줄이기 위해 구부러진 집게로 혈관을 약간 들어 올리면서 경동맥의 격리된 부분 아래에 흡수되지 않는 5x0 실크 봉합사를 통과시킵니다. 봉합사를 경동맥의 분기점에 바로 근위부로 두개골로 놓습니다. 그런 다음 매듭을 만들고 묶어 선박을 영구적으로 결찰합니다.
두개골 교합 봉합사의 양쪽 끝을 수술용 테이프로 수술대에 고정합니다. 경동맥 아래에 두 번째 교합 봉합사를 통과시키고 두개골 봉합사에서 약 5mm 떨어진 곳에 꼬리 모양으로 놓고 느슨한 매듭을 묶습니다. 수술용 테이프로 양쪽 봉합사 끝을 고정합니다.
두개골과 꼬리 폐색 봉합사 사이에 세 번째 봉합사를 배치하여 동맥을 캐뉼러내는 동안 카테터를 제자리에 유지하고 느슨한 매듭을 만듭니다. 꼬리 폐색 봉합사를 부드럽게 당기고 장력으로 고정하여 일시적으로 혈류를 멈추고 동맥을 약간 들어 올립니다. 구부러진 바늘로 두개골 폐색 봉합사에 근접한 동맥을 조심스럽게 관통합니다.
구부러진 바늘로 경동맥을 약간 올리면서 혈관 캐뉼러 집게로 카테터를 잡고 작은 천자에 넣고 천천히 혈관 안으로 밀어 넣습니다. 동시에 구부러진 바늘을 부드럽게 뒤로 당깁니다. 카테터가 꼬리 폐색 봉합사에 도달하면 고정 봉합사를 약간 조여 카테터를 제자리에 유지합니다.
꼬리 폐색 봉합사를 풀어 카테터가 끝이 대동맥궁에 위치할 때까지 더 움직일 수 있도록 합니다. 올바르게 배치되면 세 개의 봉합사로 카테터를 고정하고 매듭을 너무 세게 당기지 않고 끝을 가능한 한 짧게 자릅니다. 목에서 동물의 왼쪽 옆구리를 향한 피하 터널을 형성하고 작은 무딘 해부 가위를 사용하여 작은 주머니를 만듭니다.
따뜻한 멸균 0.9% 염화나트륨 용액으로 채워진 1밀리리터 주사기로 터널을 관개하고 약 300마이크로리터의 용액을 파우치에 넣습니다. 뭉툭한 집게로 피부를 조심스럽게 들어 올리고 경동맥에서 혈압 카테터가 당겨지지 않도록 주의하면서 송신기 장치 본체를 파우치에 넣습니다. 뭉툭한 해부 가위로 오른쪽 가슴 근육에 얇은 터널을 만들고 뭉툭한 집게를 사용하여 음극 리드를 터널에 넣습니다.
6 x 0 흡수성 봉합사 재료를 사용하여 가슴 근육에 스티치로 리드의 끝 부분을 고정합니다. 포지티브 리드에 루프를 형성하고 팁을 왼쪽 꼬리 갈비뼈 부위에 배치하고 6x0 흡수성 봉합사를 사용하여 위치를 고정합니다. 5 x 0의 비 흡수성 봉합사 재료를 사용하여 단일 매듭으로 피부를 닫습니다.
또한 동물이 봉합사를 물지 않도록 모든 매듭에 소량의 조직 접착제를 바르고 열개를 방지하십시오. 회복 단계에서 상처 감염을 방지하기 위해 상처에 10% 포비돈 요오드 하이드로겔을 바르십시오. 선제적 통증 완화를 위해 마우스가 마취 상태에 있는 동안 0.9% 염화나트륨에 카르프로펜을 피하 주사합니다.
수술 후 12 시간 동안 섭씨 36 도로 설정된 가열 플랫폼에 케이지의 절반을 놓고 마우스를 따뜻한 곳으로 옮겨 동물이 깨어있을 때 따뜻한 지역에 머물거나 케이지의 더 시원한 부분으로 이동할 수 있도록합니다. 데이터 수집 후 혈압 및 ECG 흔적을 검사하고 3시간 동안 낮은 활동을 연속적으로 검사합니다. 압력 반사 감도 또는 BRS 분석을 수행하려면 BRS 분석 패널을 엽니다.
패널에 표시된 모든 염기서열을 수동으로 검사하고 이소성 박동, 부비동 일시 정지, 부정맥 이벤트 또는 잡음이 있는 데이터를 제외하여 분석에서 성공적으로 제외합니다. 이 프로토콜은 정확한 BRS 분석과 ECG 간격, BP 변동성 및 부정맥 감지와 같은 광범위한 ECG 또는 BP 파생 매개변수에 사용할 수 있습니다. 수술에서 충분히 회복된 건강한 마우스는 어두운 단계에서 활동, 심박수 및 혈압의 생리학적 증가를 보여줍니다.
서열 방법은 수축기 혈압의 자발적인 상승 또는 하강과 함께 3회 이상의 짧은 박동 시퀀스 동안 수축기 혈압 및 RR 간격을 박동 단위로 검사하는 BRS를 결정하는 데 사용되었습니다. RR과 수축기 혈압 사이의 상관관계를 평가하기 위해 두 매개변수를 서로에 대해 플로팅하고 선형 회귀선의 기울기를 각 시퀀스에 대해 계산했습니다. 수축기 혈압 관계에 의해 RR로부터 계산 된 선형 회귀 선의 기울기에 의해 반영 된 1, 000 비트 당 총 서열 수 및 자발적인 BRS의 평균 이득은 분석에서 관심있는 매개 변수입니다.
활동이 더 높은 단계에서는 신호 품질이 저하되고 노이즈가 발생할 수 있습니다. 최소 상관 계수에 대해 두 개의 낮은 값을 설정하면 압력반사 활성을 반영하지 않지만 부정맥 비드로 인해 발생하는 염기서열이 잘못 검출됩니다. 압력수용체 민감도 데이터의 해석을 위해서는 압력수용체 반사와 관련된 기능적 수준을 고려하는 것이 중요합니다.
신경 수준에서 반사의 구심성, 중추 또는 원심성 구성 요소가 변경될 수 있습니다. 심혈관 수준에서 부비동 결절의 반응성이 감소하거나 증가하면 압력 수용체 민감도가 변화할 수 있습니다. 이 데이터를 통해 압력 반사 민감도와 심장 동방 결절의 기능뿐만 아니라 광범위한 ECG 및 혈압 파생 매개 변수를 결정할 수 있습니다.
여기에는 예를 들어 수축기 및 이완기 혈압, ECG 간격, 심박수 변동성 또는 매미 리듬이 포함됩니다.
