本研究は、急性腎障害の病態生理を研究し、潜在的な治療様式を探求するために使用することができる腎虚血再灌流傷害の再現可能な大動物モデルを記述する。この方法は非常に再現性が高く、開放的なアプローチと比較して身体に対する侮辱の量を制限することによって炎症反応の影響を最小限に抑える。この前臨床モデルは、腎移植、心原性ショック後の腎低灌流、腎虚血をもたらす経カテーテル処置、および長期の心循環停止時間を伴う心血管処置などの臨床シナリオを模倣する。
まず、ベタジンを塗布し、次いで95%エタノールを3回塗布することにより、首の右側領域を消毒する。無菌の方法で動物をドレープ。右頸動脈と右頸静脈のカテーテル化のための切り下げを行う。
胸骨筋を横に引き込み、右頸動脈と右頸静脈まで解剖する。動脈と静脈の両方に5F血管造影鞘を挿入する。シルク2-0縫合糸で固定します。
中空の針で動脈を穿刺することによって、セルディンガー技術を使用して5F血管造影シースを左大腿動脈に挿入する。ルーメンにソフトチップガイドワイヤーを挿入し、大腿動脈に進めます。針を外しながらガイドワイヤーを手でしっかりと持ちます。
ガイドワイヤーの上に血管造影シースを大腿動脈に渡し、必要に応じて超音波ガイダンスを使用してガイドワイヤーを引き出します。全身抗凝固を達成するために、1キログラム当たり200 IUを静脈内投与する。血管造影を行うために、蛍光検査の下でヨード造影剤を注入して腎動脈を同定する。
腎動脈を特定し、ガイド線を導くカテーテルで手動で進めます。5F JL4誘導カテーテルを左腎動脈に右頸動脈を通る位置付け。左大腿動脈を通って右腎動脈にカテーテルを導く第2の5F JL4を位置付ける。
ガイドワイヤーを使用して、各腎動脈に5F経皮的半年血管形成術(PTA拡張カテーテル)を向けます。各バルーンカテーテルを所定の位置に配置し、各カテーテルに圧力線を接続します。圧力モニタに動脈脈波が形成されていることを確認し、カテーテルの正しい位置を確認します。
各バルーンを膨らませ、気球内部の約2.5気圧の圧力を目指します。腎臓への血流の停止を確認するために、バルーンカテーテルの先端の脈波波形の平坦化を観察する。生理食音で1:1希釈でヨウ化した造影剤を注入し、腎血管の任意の振動を確認します。
60分間の閉塞の後、慎重に収縮し、腎動脈からバルーンカテーテルを取り除く。1:1希釈された造影剤を用いて血管造影を行い、腎動脈の開血と腎再灌流の確立を確認する。5F血管造影鞘を左大腿動脈から取り除く。
カテーテル法の部位で圧力から30分間塗布する。活性凝固時間の正常化までプロタミンのキログラム当たり3ミリグラムの投与によってヘパリンの効果を逆に.術後の期間中に尿をサンプリングするには、皮膚の中断されたステッチを使用してシルク2-0縫合糸でフォーリーカテーテルにチューブを固定します。
血液サンプリングの場合は、右頸動脈に血管を、右頸静脈に血管を所定の位置に残し、シルク2-0縫合糸で固定します。痛みを最小限に抑えるために切開部位でブピバカインのキログラムあたり3ミリグラムを投与.虚血の終わりから2時間、0.9塩化ナトリウムで動物を水和し続ける。
2つの層に中断されたステッチを使用してシルク2-0縫合糸で首の切開を閉じます。術後の痛みを最小限に抑えるために、動物の背中に1時間あたり25〜50マイクログラムのフェンタニルパッチを置き、目覚めるまで機械換気で動物を監視します。最終的な血液と尿のサンプルを収集し、尿の出力を計算します。
シフォイドから中骨盤までのサイズ10ブレードを使用して、中線開腹切開を行います。腹部の皮膚を引っ込めるためにまっすぐな横のレトラクターを使用しなさい。腹壁の腹膜の横部の付着を解剖し、右および左の後腹膜を露出する。
腎動脈と静脈の両方を識別し、ぶっきらぼうに解剖する。2-0シルク縫合糸で腎動脈と静脈の両方をリゲートし、組織学的および代謝分析のために組織全体の標本を収集するために両側腎切除を行う。腎機能は、尿の出力、eGFR、血漿クレアチン、およびBUNを決定することによって評価した。
60分の両側腎動脈閉塞の後、尿の出力は有意に減少し、再灌流後6時間と24時間でこのように残った。同様に、eGFRでは有意な減少が認められ、これは2時間、6時間、および24時間の再灌流で虚血の終わりと比較してベースラインから低下した。血漿クレアチニンは、ベースラインと比較して2時間、6時間、24時間の再灌流で有意に増加した。
BUNは、再灌流の6時間および24時間でベースラインと比較して増加した。明らかな壊死および出血性領域は、両側性腎虚血の60分および再灌流の24時間の終わりに両方の腎臓に不均一に分布していた。マッソンの三色染色は、腎皮質の近位細管に位置していたコンフルエント凝固壊死を明らかにした。
プラスチック埋め込みセクションも評価された。マッソンのトリクロームスライドはすべて、細胞壊死、ブラシ境界の喪失、キャスト形成、および細管拡張について評価された。急性尿管壊死、またはATNスコアリングは、腎皮質および髄質に重大な傷害を示した。
このプロトコルを実行する際には、RCの近接上のバルーン部位の位置を確認し、腎臓への流れを完全に閉塞させる。その水の中でキンキングしていないことを確認してください。この手順に従って、内血管カテーテルフロープローブを腎動脈に挿入して腎血流を評価したり、腎組織損傷を評価するために腎生検を行ったりすることができる。
