Это исследование описывает воспроизводимую модель реперфузии почечной ишемии, которая может быть использована для изучения патофизиологии острого повреждения почек и изучения потенциальных терапевтических методов. Этот метод является высоковоспроизводимым и минимизирует влияние воспалительной реакции, ограничивая количество оскорблений для организма по сравнению с открытым подходом. Эта доклиническая модель имитирует клинические сценарии, такие как трансплантация почек, почечная гипоперфузия после кардиогенного шока, транскатетерные процедуры, приводящие к почечной ишемии, и сердечно-сосудистые процедуры с длительным временем остановки сердечно-кровообращения.
Для начала продезинфицируйте правую боковую область шеи, применив бетадин, а затем 95% этанол три раза. Задрапировщик животного стерильным способом. Выполняют разрезание для катетеризации правой сонной артерии и правой яремной вен.
Втягивайте грудино-клеведомастоидную мышцу латерально и рассекают ее вниз до правой сонной артерии и правой яремной вены. Вставьте 5F ангиографическую оболочку как в артерию, так и в вену. Закрепите его шелковым швом 2-0.
Вставьте оболочку ангиографии 5F по методике Селдингера в левую бедренную артерию, проколов артерию полой иглой. Вставьте через просвет направляющую проволоку с мягким наконечником и продвинуйте ее в бедренную артерию. Держите направляющую проволоку надежно рукой, снимая иглу.
Пропустите оболочку ангиографии по направляющей проволоке в бедренную артерию и при необходимости выведите направляющую проволоку с помощью ультразвукового руководства. Внутривенно вводят 200 МЕ на килограмм гепарина натрия для достижения системной антикоагуляции. Для выполнения ангиографии вводите йодированное контрастное вещество под рентгеноскопией для выявления почечных артерий.
Определите почечные артерии и вручную продвинь направляющую проволоку в направляющий катетер. Расположите направляющий катетер 5F JL4 в левой почечной артерии через правую сонную артерию. Поместите второй направляющий катетер 5F JL4 в правую почечную артерию через левую бедренную артерию.
Используйте направляющие провода для направления чрескожной транслюминальной ангиопластики 5F или катетера дилатации PTA в каждую почечную артерию. Поместите каждый баллонный катетер на место и подключите напорную линию к каждому катетеру. Проверьте наличие артериальных импульсных волновых форм в мониторе давления, чтобы обеспечить правильное позиционирование катетера.
Надувайте каждый воздушный шар и стремитесь к давлению примерно 2,5 атмосферного давления внутри воздушного шара. Чтобы подтвердить прекращение притока крови к почкам, наблюдают за уплощение пульсовой формы сигнала на кончике баллонного катетера. Вводят йодированное контрастное вещество в разведении 1:1 физиологическим раствором и проверяют на помутнение почечных сосудов.
После 60 минут окклюзии осторожно сдуть и удалить баллонные катетеры из почечных артерий. Выполняют ангиографию с использованием разбавленного контрастного вещества 1:1 для подтверждения проходимости почечной артерии и установления почечной реперфузии. Удалите оболочку ангиографии 5F из левой бедренной артерии.
Применяют от давления в месте катетеризации в течение 30 минут. Обратный эффект гепарина путем введения трех миллиграммов на килограмм протамина до нормализации активного времени свертывания крови. Для отбора проб мочи в послеоперационный период прикрепите трубку к катетеру Фоли шелковым швом 2-0 с помощью прерванного шва на коже.
Для забора крови оставьте ангиографические оболочки в правой сонной артерии и правую яремную вену на месте и закрепите их шелковым швом 2-0. вводят три миллиграмма на килограмм бупивакаина в месте разреза, чтобы свести к минимуму боль. Продолжайте гидратировать животное 0,9 хлоридом натрия в течение двух часов после окончания ишемии.
Закройте разрез шеи шелковым швом 2-0 с помощью прерванного стежка в два слоя. Поместите фентаниловую пластырь от 25 до 50 микрограммов в час на спину животного, чтобы свести к минимуму послеоперационную боль, и следите за животной на механической вентиляции легких, пока оно не проснется. Соберите окончательные образцы крови и мочи и рассчитайте выход мочи.
Выполните разрез лапаротомии средней линии с использованием лезвия размером 10 от кифоидного до среднего таза. Используйте прямой боковой втягиватель для втягивки кожи живота. Рассеките боковые перитонеальные прикрепления брюшной стенки, чтобы обнажить правое и левое забрюшинное.
Выявляют и тупо рассеклают как почечные артерии, так и вены. Обжигайте как почечные артерии, так и вены шелковым швом 2-0 и выполняйте двусторонние нефрэктомии для сбора образцов цельной ткани для гистологического и метаболического анализа. Функцию почек оценивали путем определения диуреза, сКФ, креатина плазмы и BUN.
После 60 минут двусторонней окклюзии почечной артерии диурез был значительно снижен и оставался таким в течение шести и 24 часов после реперфузии. Аналогичным образом, значительное снижение наблюдалось при СКФ, которая снизилась от исходного уровня по сравнению с окончанием ишемии через два часа, шесть часов и 24 часа реперфузии. Креатинин плазмы был значительно повышен через два, шесть и 24 часа реперфузии по сравнению с исходным уровнем.
BUN был увеличен по сравнению с исходным уровнем через шесть и 24 часа реперфузии. Очевидные некротические и геморрагические участки были неравномерно распределены в обеих почках в конце 60 минут двусторонней почечной ишемии и 24 часов реперфузии. Трихромное окрашивание Массона выявило слитый коагуляционный некроз, который располагался в проксимальных канальцах почечной коры.
Также была проведена оценка пластиковых секций. Все трихромные слайды Массона были оценены на некроз клеток, потерю границы кисти, образование гипса и расширение канальцев. Острый канальцевый некроз, или оценка АТН, показал значительное повреждение коры почек и продолговатого мозга.
При выполнении этого протокола проверьте расположение баллонных участков на близости RC и полностью закусьте поток в почку. Убедитесь, что он не изгибается в этой воде. После этой процедуры эндоваскулярные катетерные протоки могут быть вставлены в почечные артерии для оценки почечного кровотока, или биопсия почек может быть выполнена для оценки повреждения почечной ткани.
