Bu çalışma, akut böbrek hasarının patofizyolojisini incelemek ve potansiyel terapötik yöntemleri araştırmak için kullanılabilecek renal iskemi reperfüzyon hasarının tekrarlanabilir büyük bir hayvan modelini açıklamaktadır. Bu yöntem oldukça tekrarlanabilir ve açık bir yaklaşıma kıyasla vücuda hakaret miktarını sınırlayarak enflamatuar yanıtın etkisini en aza indirir. Bu preklinik model, böbrek nakli, kardiyojenik şoku takiben böbrek hipopipfüzyonu, böbrek iskemisi ile sonuçlanan transktheter prosedürleri ve uzun kardiyo-dolaşım arrest süreleri ile kardiyovasküler prosedürler gibi klinik senaryoları taklit eder.
Başlamak için, boynun sağ yanal bölgesini betadin uygulayarak ve ardından üç kez% 95 etanol uygulayarak dezenfekte edin. Hayvanı steril bir şekilde örtün. Sağ şahdamarının ve sağ şahdamarının kateterizasyonu için bir kesme gerçekleştirin.
Sternocleidomastoid kası yanal olarak geri çekin ve sağ şahdamarına ve sağ şahdamarına kadar parçalara ayırın. Hem atardamara hem de damara 5F anjiyografi kılıfı yerleştirin. İpek 2-0 dikiş ile sabitleyin.
Seldinger tekniğini kullanarak 5F anjiyografi kılıfını içi boş bir iğne ile atardamarı delerek sol uyluk atardamarına yerleştirin. Lümen içinden yumuşak uçlu bir kılavuz tel yerleştirin ve uyluk atardamarına ilerletin. İğneyi çıkarırken kılavuz teli bir el ile sabit tutun.
Anjiyografi kılıfını kılavuz telin üzerinden uyluk atardamarına geçirin ve gerekirse ultrason kılavuzunu kullanarak kılavuz teli çekin. Sistemik antikoagülasyon elde etmek için kilogram başına 200 IU sodyum heparin intravenöz olarak uygulanır. Anjiyografi yapmak için, renal arterleri tanımlamak için floroskopi altında iyodated kontrast maddesi enjekte edin.
Renal arterleri tanımlayın ve kılavuz teli kılavuz kateterde manuel olarak ilerletin. 5F JL4 kılavuz kateteri sol renal arterde sağ şahdamarı üzerinden yerleştirin. İkinci 5F JL4 kılavuz kateteri sağ renal arterde sol femoral arterden geçirin.
Her renal arterde 5F perkütan translüminal anjiyoplasti veya PTA genişleme kateterini yönlendirmek için kılavuz telleri kullanın. Her balon kateterlerini yerine yerleştirin ve her katetere bir basınç hattı bağlayın. Kateterin doğru konumlandırılmasından emin olmak için basınç monitöründe arteriyel nabız dalgası formlarının varlığını kontrol edin.
Her balonu şişirin ve balonun içinde yaklaşık 2,5 atmosferik basınç hedefleyin. Böbreklere kan akışının durmasını doğrulamak için balon kateterin ucundaki nabız dalga biçiminin düzleştirmesini gözlemleyin. İyotlu kontrast ortamını salin ile 1:1 seyreltme içine enjekte edin ve renal damarların herhangi bir opaklaşmasını kontrol edin.
60 dakikalık tıkanıklıktan sonra balon kateterlerini dikkatlice söndür ve renal arterlerden çıkarın. Renal arter açıklığını ve renal reperfüzyonun kurulmasını doğrulamak için 1:1 seyreltilmiş kontrast ortamı kullanarak anjiyografi gerçekleştirin. Sol femoral arterden 5F anjiyografi kılıfını çıkarın.
Kateterizasyon yerindeki basınçtan 30 dakika uygulayın. Aktif pıhtılaşma süresinin normalleşmesi olana kadar protamin kilogramı başına üç miligram uygulama ile heparinin etkisini tersine çevirin. Ameliyat sonrası dönemde idrar örneği almak için, cilde kesik bir dikiş kullanarak foley kateterine ipek 2-0 dikişli bir tüp sabitleyin.
Kan örneklemesi için anjiyografi kılıflarını sağ şahdamarında ve sağ şahdamarında yerinde bırakın ve ipek 2-0 dikiş ile sabitleyin. ağrıyı en aza indirmek için kesi yerinde kilogram başına üç miligram bupivakain uygulamak. İskemi sona erdiden sonra toplam iki saat boyunca hayvanı 0.9 sodyum klorürle nemlendirmeye devam edin.
İki kat halinde kesilmiş bir dikiş kullanarak boyun kesisini ipek 2-0 dikiş ile kapatın. Ameliyat sonrası ağrıyı en aza indirmek için hayvanın arkasına saatte 25 ila 50 mikrogramlık bir fentanil yama yerleştirin ve hayvanı uyanana kadar mekanik havalandırmada izleyin. Son kan ve idrar örneklerini toplayın ve idrar çıkışını hesaplayın.
Xiphoid'den orta pelvise kadar 10 numara bir bıçak kullanarak orta çizgi laparotomi kesisi gerçekleştirin. Karın derisini geri çekmek için düz bir yanal retraktör kullanın. Sağ ve sol retroperitoneumu ortaya çıkarmak için karın duvarının lateral peritoneal eklerini parçalara ayrılın.
Hem renal arterleri hem de damarları tanımlayın ve açıkça parçalara ayrıştırın. Hem renal arterleri hem de damarları 2-0 ipek dikişle lige edin ve histolojik ve metabolik analiz için tüm doku örneklerini toplamak için bilateral nefrektomiler yapın. Böbrek fonksiyonu idrar çıkışı, eGFR, plazma kreatin ve BUN belirlenerek değerlendirildi.
bilateral renal arter tıkanma 60 dakika sonra idrar çıkışı önemli ölçüde azaldı ve reperfüzyondan sonra altı ve 24 saatte bu şekilde kaldı. Benzer şekilde, iki saat, altı saat ve 24 saatlik repertuarda iskemi sonuna kıyasla taban çizgisine düşen eGFR'de de önemli bir azalma gözlendi. Plazma kreatinin, taban çizgisine kıyasla iki, altı ve 24 saatlik reperfüzyonda önemli ölçüde artmıştır.
BUN, 6 ve 24 saatlik repertuarda taban çizgisine göre artırıldı. Belirgin nekrotik ve hemorajik alanlar, 60 dakikalık bilateral renal iskemi ve 24 saatlik reperfüzyonun sonunda her iki böbrekte de eşit olmayan bir şekilde dağıtıldı. Masson'un üç renkli lekesi, renal korteksin proksimal tübülleri arasında bulunan birleşik pıhtılaştırıcı nekrozu ortaya çıkardı.
Plastik gömülü bölümler de değerlendirildi. Masson'un tüm üç renkli slaytları hücre nekrozu, fırça kenarlığı kaybı, alçı oluşumu ve tübül genişlemesi açısından değerlendirildi. Akut tübüler nekroz veya ATN skoru, renal korteks ve medullada önemli yaralanmalar gösterdi.
Bu protokolü gerçekleştirirken, balon bölgelerinin RC'nin yakınlığına konumunu kontrol edin ve böbreğe akışı tamamen tıkayın. O suda bükülme olmadığından emin ol. Bu işlemi takiben, renal kan akışını değerlendirmek için renal arterlere endovasküler kateter akış probları yerleştirilebilir veya renal doku yaralanmasını değerlendirmek için renal biyopsiler yapılabilir.
