Questo studio descrive un modello animale di grandi dimensioni riproducibile di lesione renale da riperfusione di ischemia, che può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia della lesione renale acuta ed esplorare potenziali modalità terapeutiche. Questo metodo è altamente riproducibile e riduce al minimo l'impatto della risposta infiammatoria limitando la quantità di insulto al corpo rispetto a un approccio aperto. Questo modello preclinico imita scenari clinici, come il trapianto renale, l'ipoperfusione renale a seguito di shock cardiogenico, procedure trascateteriche con conseguente ischemia renale e procedure cardiovascolari con tempi di arresto cardio-circolatori prolungati.
Per iniziare, disinfettare l'area laterale destra del collo applicando betadina e quindi 95% di etanolo tre volte. Drappeggia l'animale in modo sterile. Eseguire un taglio per la cateterizzazione dell'arteria carotidea destra e della vena giugulare destra.
Ritrarre lateralmente il muscolo sternocleidomastoide e sezionarlo fino all'arteria carotidea destra e alla vena giugulare destra. Inserire una toria angioografica 5F sia nell'arteria che nella vena. Fissalo con una sutura 2-0 di seta.
Inserire una toria angioografica 5F utilizzando la tecnica Seldinger nell'arteria femorale sinistra forando l'arteria con un ago cavo. Inserire un filo guida a punta morbida attraverso il lume e farlo avanzare nell'arteria femorale. Tenere il filo guida sicuro con una mano mentre si rimuove l'ago.
Passare la torcia angioografica sopra il filo guida nell'arteria femorale e ritirare il filo guida utilizzando la guida ad ultrasuoni, se necessario. Somministrare per via endovenosa 200 UI per chilogrammo di eparina di sodio per ottenere l'anticoagulazione sistemica. Per eseguire l'angiografia, iniettare un agente di contrasto iodinato sotto fluoroscopia per identificare le arterie renali.
Identificare le arterie renali e far avanzare manualmente il filo guida nel catetere guida. Posizionare il catetere guida 5F JL4 nell'arteria renale sinistra attraverso l'arteria carotidea destra. Posizionare il secondo catetere guida 5F JL4 nell'arteria renale destra attraverso l'arteria femorale sinistra.
Utilizzare i fili guida per dirigere un'angioplastica transluminale percutanea 5F, o catetere di dilatazione PTA, in ogni arteria renale. Posizionare ogni catetere a palloncino in posizione e collegare una linea di pressione a ciascun catetere. Controllare la presenza di forme di onda d'impulso arteriosa nel monitor di pressione per garantire il corretto posizionamento del catetere.
Gonfiare ogni palloncino e mirare a una pressione di circa 2,5 pressione atmosferica all'interno del palloncino. Per confermare la cessazione del flusso sanguigno ai reni, osservare l'appiattimento della forma d'onda del polso sulla punta del catetere a palloncino. Iniettare un mezzo di contrasto iodinato in una diluizione 1:1 con soluzione salina e verificare la presenza di eventuali opacizza dei vasi renali.
Dopo 60 minuti di occlusione, sgonfiare e rimuovere accuratamente i cateteri a palloncino dalle arterie renali. Eseguire un'angiografia utilizzando un mezzo di contrasto diluito 1:1 per confermare la persistenza dell'arteria renale e la creazione di una riperfusione renale. Rimuovere la toria angioografica 5F dall'arteria femorale sinistra.
Applicare dalla pressione nel sito di cateterizzazione per 30 minuti. Invertire l'effetto dell'eparina con la somministrazione di tre milligrammi per chilogrammo di protamina fino alla normalizzazione del tempo di coagulazione attivo. Per campionare l'urina durante il periodo post-operatorio, fissare un tubo al catetere Foley con una sutura di seta 2-0 usando un punto interrotto sulla pelle.
Per il prelievo del sangue, lasciare le suonerie angioografiche nell'arteria carotidea destra e la vena giugulare destra in posizione e fissarle con una sutura di seta 2-0. somministrare tre milligrammi per chilogrammo di bupivacaina nel sito di incisione per ridurre al minimo il dolore. Continuare a idratare l'animale con 0,9 cloruro di sodio per un totale di due ore dopo la fine dell'ischemia.
Chiudi l'incisione del collo con una sutura di seta 2-0 usando un punto interrotto in due strati. Posizionare una macchia di fentanil da 25 a 50 microgrammi all'ora sul retro dell'animale per ridurre al minimo il dolore post-operatorio e monitorare l'animale sulla ventilazione meccanica fino a quando non si sveglia. Raccogliere i campioni finali di sangue e urine e calcolare l'uscita delle urine.
Eseguire un'incisione di laparotomia della linea mediana utilizzando una lama di dimensioni 10 dallo xifoide fino al bacino medio. Utilizzare un retrattile laterale dritto per ritrarre la pelle addominale. Sezionare gli attacchi peritoneali laterale della parete addominale per esporre il retroperitoneo destro e sinistro.
Identificare e sezionare senza mezzi termini sia le arterie renali che le vene. Ligate sia arterie renali che vene con una sutura di seta 2-0 ed eseguire nefromie bilaterali per raccogliere campioni di tessuto intero per l'analisi istologica e metabolica. La funzione renale è stata valutata determinando la produzione di urina, eGFR, creatina plasmatica e BUN.
Dopo 60 minuti di occlusione bilaterale dell'arteria renale, la produzione di urina è stata significativamente diminuita ed è rimasta in questo modo a sei e 24 ore dopo la riperfusione. Allo stesso modo, è stata osservata una significativa diminuzione dell'eGFR, che è sceso dal basale rispetto alla fine dell'ischemia a due ore, sei ore e 24 ore di riperfusione. La creatinina plasmatica è stata significativamente aumentata a due, sei e 24 ore di riperfusione rispetto al basale.
Bun è stato aumentato rispetto al basale a sei e 24 ore di riperfusione. Evidenti aree necrotiche ed emorragiche sono state distribuite in modo non uniforme in entrambi i reni alla fine dei 60 minuti di ischemia renale bilaterale e delle 24 ore di riperfusione. La colorazione tricromatica di Masson rivelò una necrosi coagulativa confluente, che si trovava nei tubuli prossimali della corteccia renale.
Sono state valutate anche le sezioni in plastica incorporata. Tutte le diapositive tricromatiche di Masson sono state valutate per necrosi cellulare, perdita del bordo del pennello, formazione del calco e dilatazione dei tubuli. La necrosi tubolare acuta, o punteggio ATN, ha mostrato lesioni significative alla corteccia renale e al midollo.
Quando si esegue questo protocollo, controllare il posizionamento dei siti di palloncini sulla vicinanza di RC e occludere totalmente il flusso al rene. Assicurati che non si piei in quell'acqua. Seguendo questa procedura, le sonde di flusso del catetere endovascolare possono essere inserite nelle arterie renali per valutare il flusso sanguigno renale, oppure possono essere eseguite biopsie renali per valutare la lesione renale del tessuto.
