تصف هذه الدراسة نموذجا حيوانيا كبيرا قابلا للاستنساخ لإصابة إعادة التروية الكلوية ، والتي يمكن استخدامها لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لإصابة الكلى الحادة ، واستكشاف الطرائق العلاجية المحتملة. هذه الطريقة قابلة للاستنساخ للغاية وتقلل من تأثير الاستجابة الالتهابية عن طريق الحد من مقدار الإهانة للجسم مقارنة بنهج مفتوح. يحاكي هذا النموذج قبل السريري السيناريوهات السريرية ، مثل زرع الكلى ، ونقص التروية الكلوية بعد الصدمة القلبية ، وإجراءات التحويل الجيني مما يؤدي إلى نقص التروية الكلوية ، وإجراءات القلب والأوعية الدموية مع فترات اعتقال القلب والدورة الدموية لفترات طويلة.
للبدء، تطهير المنطقة الجانبية اليمنى من الرقبة عن طريق تطبيق بيتادين ثم 95٪ الإيثانول ثلاث مرات. ستارة الحيوان بطريقة عقيمة. إجراء خفض القسطرة الشريان السباتي الأيمن والوريد الوداجي الأيمن.
تراجع عن العضلة القصية الجانبية، وتشريحها وصولا إلى الشريان السباتي الأيمن والوريد الوداجي الأيمن. أدخل غمد تصوير الأوعية 5F في كل من الشريان والوريد. تأمينه مع خياطة الحرير 2-0.
أدخل غمد تصوير الأوعية 5F باستخدام تقنية Seldinger في الشريان الفخذي الأيسر عن طريق ثقب الشريان بإبرة مجوفة. أدخل سلك دليل لينة تلميح من خلال التجويف وتقدمه في الشريان الفخذي. عقد سلك دليل آمنة مع اليد أثناء إزالة الإبرة.
تمرير غمد تصوير الأوعية عبر سلك الدليل إلى الشريان الفخذي وسحب سلك الدليل باستخدام التوجيه بالموجات فوق الصوتية إذا لزم الأمر. تدار عن طريق الوريد 200 وحدة IU لكل كيلوغرام من الهيبارين الصوديوم لتحقيق مضاد التخثر الجهازية. لإجراء تصوير الأوعية الدموية، قم بحقن عامل تباين يودينات تحت التنظير الفلوري لتحديد الشرايين الكلوية.
تحديد الشرايين الكلوية والتقدم يدويا السلك دليل في القسطرة التوجيهية. ضع القسطرة الإرشادية 5F JL4 في الشريان الكلوي الأيسر عبر الشريان السباتي الأيمن. ضع القسطرة التوجيهية الثانية 5F JL4 في الشريان الكلوي الأيمن عبر الشريان الفخذي الأيسر.
استخدم أسلاك الإرشاد لتوجيه قسطرة تمدد 5F عن طريق الجلد عبر الجلد، أو قسطرة تمدد PTA، في كل شريان كلوي. ضع كل قسطرة بالون في مكانها، وربط خط ضغط بكل قسطرة. تحقق من وجود أشكال موجة النبض الشرياني في جهاز مراقبة الضغط لضمان تحديد الموضع الصحيح للقسطرة.
تضخيم كل بالون وتهدف لضغط ما يقرب من 2.5 الضغط الجوي داخل البالون. لتأكيد توقف تدفق الدم إلى الكليتين، لاحظ تسطيح شكل الموجة النبضية في طرف قسطرة البالون. حقن المتوسطة التباين iodinated في تخفيف 1:1 مع المالحة والتحقق من أي عتامة الأوعية الكلوية.
بعد 60 دقيقة من الانسداد، قم بتخفث وإزالة قسطرة البالون بعناية من الشرايين الكلوية. إجراء تصوير الأوعية باستخدام 1:1 المتوسطة النقيض المخفف لتأكيد الشبع الشريان الكلوي وإنشاء التروية الكلوية. إزالة غمد تصوير الأوعية 5F من الشريان الفخذي الأيسر.
تطبيق من الضغط في موقع القسطرة لمدة 30 دقيقة. عكس تأثير الهيبارين من قبل الإدارة من ثلاثة ملليغرام لكل كيلوغرام من البروتامين حتى تطبيع الوقت تخثر نشط. لعينة البول خلال فترة ما بعد الجراحة، قم بتأمين أنبوب إلى قسطرة فولي مع خياطة حريرية 2-0 باستخدام غرزة متقطعة على الجلد.
لأخذ عينات الدم، اترك أغماد تصوير الأوعية في الشريان السباتي الأيمن والوريد الوداجي الأيمن في مكانه، وآمنها بخياطة حريرية 2-0. إعطاء ثلاثة ملليغرام لكل كيلوغرام من bupivacaine في موقع شق لتقليل الألم. استمر في ترطيب الحيوان بكلوريد الصوديوم 0.9 لمدة ساعتين بعد نهاية نقص التروية.
أغلق شق الرقبة بخياطة حرير 2-0 باستخدام غرزة متقطعة في طبقتين. ضع رقعة الفنتانيل من 25 إلى 50 ميكروغرام في الساعة على الجزء الخلفي من الحيوان لتقليل الألم بعد الجراحة ، ومراقبة الحيوان على التهوية الميكانيكية حتى يستيقظ. جمع عينات الدم والبول النهائي وحساب انتاج البول.
إجراء شق البطن خط الوسط باستخدام شفرة حجم-10 من xiphoid وصولا الى الحوض منتصف. استخدم متراجعا الجانبي المستقيم لسحب جلد البطن. تشريح المرفقات الصفاق الجانبية لجدار البطن لفضح الرجعية اليمنى واليسارية.
تحديد وتشريح بصراحة كل من الشرايين الكلوية والأوردة. Ligate كل من الشرايين الكلوية والأوردة مع خياطة الحرير 2-0 وإجراء استئصال الكلية الثنائية لجمع عينات الأنسجة الكاملة للتحليل النسيجي والأيضي. تم تقييم وظيفة الكلى عن طريق تحديد إخراج البول، eGFR، الكرياتين البلازما، وBUN.
بعد 60 دقيقة من انسداد الشريان الكلوي الثنائي ، انخفض إنتاج البول بشكل كبير وظل على هذا النحو في ست و 24 ساعة بعد التشوه. وبالمثل، لوحظ انخفاض كبير في معدل إعادة التروية eGFR، الذي انخفض من خط الأساس بالمقارنة مع نهاية الإقفارية في ساعتين وست ساعات و24 ساعة من التشوه. زيادة كبيرة في الكرياتينين البلازما في اثنين, ستة, و 24 ساعات من التروية مقارنة مع خط الأساس.
وزادت زيادة عدد الخطوط الأساسية عند ست ساعات و24 ساعة من التشوه. تم توزيع المناطق النخرية والنزفية الواضحة بشكل غير متساو في كلتا الكليتين في نهاية 60 دقيقة من نقص التروية الكلوية الثنائية و24 ساعة من التروية. كشف تلطيخ ماسون الثلاثي الألوان عن نخر تخثر التقاء ، والذي كان موجودا في الأنابيب القريبة من قشرة الكلى.
كما تم تقييم الأقسام المضمنة بالبلاستيك. تم تقييم جميع الشرائح ثلاثية الألوان في Masson لنخر الخلية ، وفقدان حدود الفرشاة ، وتشكيل الزهر ، وتمدد أنبوبي. أظهر النخر الأنبوبي الحاد ، أو تسجيل ATN ، إصابة كبيرة في قشرة الكلى ومولة الدماغ.
عند تنفيذ هذا البروتوكول، تحقق من تحديد مواقع البالون على مقربة من RC، وانسداد التدفق إلى الكلية تماما. تأكد من أنه لا يشبك في ذلك الماء. بعد هذا الإجراء، يمكن إدخال مسابير تدفق القسطرة الوعائية في الشرايين الكلوية لتقييم تدفق الدم الكلوي، أو يمكن إجراء خزعات كلوية لتقييم إصابة الأنسجة الكلوية.
