心臓および呼吸機能障害は、発作後の突然死に寄与する。そこで、この現象を研究するために、ウサギモデルに多系統アプローチを適用した。この技術により、発作、不整脈、および先行死を取り巻く複数のウサギの神経学的、心臓、呼吸機能を同時に監視し、後で分析することができます。
病気は主に神経または心臓であるかもしれないが、それは脳と心臓の両方の電気的障害を含むかもしれない, 発作や不整脈など, 呼吸機能障害.後ろ足の強さのためにウサギと一緒に働くのは難しいかもしれません。ウサギを動かすときに、モニターを取り付けるときには、落ち着くように注意してください。
まず、コンピュータを64ピンヘッドボックスでアンプに接続します。ヘッドボックスの8番ピンをリファレンスにするには、リファレンス電極を独立に設定します。ECG電極の移植のために、研究者の膝の頭で、その体の残りの部分よりも低い頭で、うなぎの位置にウサギを固定します。
第二の研究者が下層の皮膚を露出させるために毛皮を広げて、下皮は各腋窩に35度の角度曲がった電極を挿入する。胸にリードを置き、右と左前肢の後部。そして腹部には、左後肢の前部。
次に、腹部の右後肢に接地ピン電極を前置きします。すべてのECGリードが適切に配置されたら、動物の下に後肢を持つ適切なサイズの拘束剤でウサギを固定します。45度の角度アプローチを使用して、皮下ストレートピン電極を頭皮に挿入します。
右前部、左前頭、右後頭部、左後頭部領域に1本のEEGリードを配置します。他の 4 つのリードの間の中央点に中央参照リードを配置します。耳の間にワイヤーを実行し、ゆるやかに頭の後ろの拘束者にそれらをテザー。
実験中の呼吸を監視するには、パルスオキシメーターを限界耳静脈の上の片耳に取り付け、動物の口と鼻の上にカプノグラフィーチューブでフェイスマスクを静かに固定します。次に、チューブのもう一方の端をバイタルサインモニターに取り付けます。ビデオEEG-ECGを記録するには、適切な市販のEEGソフトウェアプログラムを開き、すべてのウサギが視野内で観察されるようにビデオを調整します。
最低10〜20分間、または心拍数が少なくとも5分間毎分200〜250拍に安定するまで、動物のベースライン記録を行う。低周波数フィルタを 1 ヘルツに、高周波フィルタを 59 ヘルツに設定します。リアルタイムでタイムロックされたメモを追加して、介入のタイミング、神経心臓イベント、およびモーターまたは研究者のアーティファクトを示します。
フォティック刺激の場合、目の高さで、目の高さで、目の高さで、目の前に円形反射器を持つ光源を配置し、最大に設定します。そして、頭の両側に2つの鏡を置き、1つの鏡をウサギの後ろに置き、光がウサギの目に入るようにします。調整可能なレート、強度、および持続時間を持つコントローラにライトを取り付けます。
フォティック刺激装置を1ヘルツに設定し、フラッシュをオンにして、応答を30秒間記録します。マスクでウサギの目を覆い、目の閉鎖をシミュレートしたり、引き起こしたりして、さらに30秒間刺激します。各周波数で目を開けて目を閉じた応答を記録した後、30秒間フォティック刺激器をオフにし、コントローラを次の周波数設定に設定します。
各周波数で2ヘルツ間隔で1~25ヘルツまで60秒間録画した後、5ヘルツ刻みで60ヘルツから25ヘルツの周波数を下げ、目を開けて30秒間、目を閉じて30秒間記録します。実験の最後に、ウサギからEEGとECGのリードを取り除き、畜産スタッフによる日常的なケアのために動物を自宅のケージに戻します。薬を投与する前に、実証したように、未処理のウサギからベースラインEEG-ECGビデオの10〜20分を収集します。
関心のある薬の経口投与のために、食品グレードのリンゴソースの3ミリリットルに関心のある薬物の1キログラム当たり0.3ミリグラムを混合し、3ミリリットル経口注射器に混合物をロードします。ウサギの上唇をそっと持ち上げ、注射器の先端をウサギの歯に塞がらない口の側面にスライドさせ、薬物補充リンゴソースの全容をウサギの口に注入する。その後、定期的なケアのためにそのホームケージにウサギを返す前に、EEG-ECGビデオデータの2時間を収集します。
静脈内投薬投与に対するEEG-ECG応答を記録する前に、ウサギの耳の後面を剃り、70%エタノールを使用してサイトを消毒し、限界耳静脈を拡張する。慎重に、25ゲージの血管カテーテルで限界耳静脈をカニューレートし、カテーテルの端に注入プラグを置きます。3つのロールガーゼから作成された副木を耳にテープで貼り付け、カテーテルを所定の位置に固定し、耳を直立に保持します。
カテーテル特許を維持するために、ヘパリン化生理食塩水のミリリットルあたり10 USP単位の1ミリリットルを注入します。ベースライン記録が終了したら、 10 分に 1 回カテーテルに関心のある薬の 1 キログラムあたり 1 0 ミリグラムを補充した生理焼菌を注入します。.各用量の後、ビデオ脳G-ECG、オキシメトリーカプノグラフィー、任意の神経、心臓、電気および呼吸器の異常またはてんかん活動の視覚的証拠を注意深く監視する。
これらの変更は、リアルタイムで、またポスト分析中に注意してください。心電図ビデオを分析するには、適切な市販のソフトウェアを使用して、心電図データ内の頻脈、小線源、異所性拍動、またはその他の不整脈の期間を同定します。レビューするデータの量を減らすために、タコグラムを作成して、頻脈、徐脈、またはRR間隔の不規則性の期間を容易にする。
薬物投与実験後のビデオEEG分析では、EEGトレースを視覚的にスクロールして、薬物の各用量の後に少なくとも1分間、てんかんと非てんかんの動きを区別します。感光刺激実験後のビデオEEG解析では、適切なEEG解析ソフトウェアプログラムでスペクトル解析プロットを作成します。次に、後頭部駆動リズムの有無について、EEGの後頭部を解析する。
後頭部の駆動リズムは、感知刺激子の周波数に対応するスペクトル解析でピークを作り出します。心電図形態の評価は異常な心拍数、伝導および心電図波の形態の検出を可能にする。また、このトレースは、心拍数、RR間隔、PR間隔、P期間、QRS間隔、QT間隔、QTc、JT間隔、T-ピークからT終了間隔の数値を定量化するためにも使用できます。
後頭部のEEGリードからの記録は、通常、正面リードデータに対して観測されたものよりも高い振幅を示す。そして、すべてのリードの支配的な周波数は、一般的にデルタ範囲で測定されます。ここでは、代表的なウサギ実験からの睡眠スピンドル波が示されている。
睡眠の1期間の複数の脳波モンタージュは、これらの波が人間の発見と一致する頭部の中心から生じることを示しています。通常のEEG変化に加えて、これらのデータをてんかんの排出物と区別するために使用できるベースライン記録中に、様々な意識的で非てんかんウサギの動きが観察される。ECGリードを皮膚にしっかりと入れて、ワイヤーを脚から遠ざけ、ウサギを拘束剤に移すときに電極が取り付けられたままにすることが重要です。
この多系統記録装置は、今後の薬剤の安全性・有効性の研究を可能にし、様々な病気の獲得・遺伝性疾患を総合的に理解することを可能にします。この技術は、発作後に致命的な多臓器機能不全の可能性を捉え、SUDEPのメカニズムをよりよく理解する。
