この研究は、ヘルスリサーチおよびゲノムCanada.JSのカナダの協会によってサポートされていたがアルバータ遺産Foundationfor医学研究、心臓とCanadaandの脳卒中財団カナダ糖尿病協会から給与を支援賞を保持しています。シアラーの実験室には、この手順を教えるデビッドワッサーマンと氷楽Bracyに感謝。

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	<li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+basal+and+insulin-stimulated+skeletal+muscle+glucose+uptake+in+the+high-fat-fed+rat.">Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+muscle+glucose+uptake+due+to+high+fat+feeding.">Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding.</a> Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo:+advantages,+limitations,+and+appropriate+usage.">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).</li><li>Cho, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+and+a+diabetes+mellitus-like+syndrome+in+mice+lacking+the+protein+kinase+Akt2+(PKB+beta).">Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta).</a> Science. 292, 1728-1731 (2001).</li><li>Dubois, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SHP-1+protein+tyrosine+phosphatase+negatively+modulates+glucose+homeostasis.">The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis.</a> Nat Med. 12, 549-556 (2006).</li><li>Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+to+glucose+tolerance+of+insulin-independent+vs.+insulin-dependent+mechanisms+in+mice.">Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).</li><li>Herbach, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+effects+of+a+novel+mutated+Ins2+allele+causes+early-onset+diabetes+and+severe+beta-cell+loss+in+Munich+Ins2C95S+mutant+mice.">Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice.</a> Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).</li><li>Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+insulin+resistance+in+mice+lacking+adiponectin/ACRP30.">Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.</a> Nat Med. 8, 731-737 (2002).</li><li>Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+spontaneously+hypertensive+rats+with+rosiglitazone+and/or+enalapril+restores+balance+between+vasodilator+and+vasoconstrictor+actions+of+insulin+with+simultaneous+improvement+in+hypertension+and+insulin+resistance.">Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance.</a> Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).</li><li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse.">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li><li>Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation.">Lost in translation.</a> Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).</li></ol>

手順は、カルガリー動物ケアの大学および使用委員会によって承認され、実験用の実験動物科学のガイドラインについては、カナダの協会を遵守した。著者らは利害の対立または開示はありません。

最初にヒトのインスリン感受性の調査のために開発、クランプの手順は、現在、実験用ラットやマウスなど他の種に適応されています。インスリン抵抗性の調査を動物モデルでは、インスリン感受性と関連する病理の病態生理を理解するだけでなく、臨床的価値の1,2を持っている治 ​​療的介入を特定するのに重要な援助を提供します。動物のインスリン感受性を評価するいくつか?...

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（省略可能） </td></tr><tr valign="top"><td> Intramedicポリエチレンチューブ（PE - 50） </td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 14から170 - 12B </td><td> 0.58ミリメートル（0.023&quot;）0.965ミリメートルのX外径（0.038&quot;）の内径</td></tr><tr valign="top"><td>ダウコーニングシラスティックラボチューブ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 11から189 - 15C </td><td> 0.76ミリメートル（0.030&quot;）の内部直径1.65ミリメートルのX外径（0.065&quot;） </td></tr><tr valign="top"><td>タイゴンS - 50 - HLメディカルチューブ</td><td>ハーバード装置</td><td> PY2 72から1251 </td><td> 3.2ミリメートルの内径（0.125&quot;）4.7ミリメートルのX外径（0.1875&quot;） </td></tr><tr valign="top"><td>ロックタイトスーパー接着剤</td><td>グランド＆玩具</td><td> 32237 </td><td>ゲルコントロール</td></tr><tr valign="top"><td>無菌手術ブレード</td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>湾曲したマイクロ解剖鉗子</td><td>ジョージティーマンアンドカンパニー</td><td> 160から20 </td><td> × 2 </td></tr><tr valign="top"><td>ストレートマイクロ解剖鉗子</td><td>ジョージティーマンアンドカンパニー</td><td> 160から15 </td><td> × 2 </td></tr><tr valign="top"><td>湾曲した止血剤</td><td>ジョージティーマンアンドカンパニー</td><td> 105-1135 </td><td> × 2 </td></tr><tr valign="top"><td>ストレート止血剤</td><td>ジョージティーマンアンドカンパニー</td><td> 105-1130 </td><td> × 2 </td></tr><tr valign="top"><td>止血鉗子の先端ガード</td><td>ロビンスインスツルメンツ株式会社</td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>ストレート外科用はさみ</td><td>ジョージティーマンアンドカンパニー</td><td> 105から402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECTマルチサンプルルアーアダプター</td><td>テルモメディカルプロダクツ</td><td> 810127A </td><td> 21ゲージ、1インチ</td></tr><tr valign="top"><td>滅菌カテーテルイントロデューサー</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14ゲージのブラントニードル</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 511310 </td><td> 14ゲージ、2インチ</td></tr><tr valign="top"><td>滅菌縫合糸</td><td>ジョンソン＆ジョンソンメディカルプロダクツ</td><td> 1679H </td><td>シルク、サイズ3〜0 </td></tr><tr valign="top"><td>非滅菌外科用縫合糸</td><td>アンジオテックファーマシューティカルズ</td><td> SP116 </td><td>シルク、サイズ4から0 </td></tr><tr valign="top"><td>綿棒</td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 4plyガーゼパッド</td><td> VWR </td><td> CA43845 - 062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>小動物コードレスクリッパーズ</td><td>ハーバード装置</td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>イソフルレン</td><td>ハロカーボン製品株式会社</td><td> IPN - 45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>麻酔カート</td><td>ベンソン医療産業、（株） </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 70％エタノール</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> HC - 1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Betadineの消毒液</td><td>西洋医薬品流通センター株式会社</td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>モデル11 Plusのシリンジポンプ</td><td>ハーバード装置</td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>ステンレス鋼チューブカプラ</td><td>ハーバード装置</td><td> 72から4434 </td><td> 23ゲージ、インチ0.3 </td></tr><tr valign="top"><td>ステンレス鋼チューブのプラグ</td><td>ハーバード装置</td><td> 72から4436 </td><td> 23ゲージ、0.5インチ</td></tr><tr valign="top"><td>ステンレス鋼ブラント針</td><td>インステックラボラトリーズ、（株） </td><td> LS22 </td><td> 22ゲージ</td></tr><tr valign="top"><td> 60 ° Y -コネクタ</td><td>スモールパーツ</td><td> STCY - 22から05 </td><td> 22ゲージ</td></tr><tr valign="top"><td> CritSpinマイクロヘマトクリット遠心機</td><td>アイリスのサンプル処理</td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>ミニ遠心機</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>マイクロ遠心チューブ</td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 50ミリリットルポリプロピレン遠心チューブ</td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 1ミリリットルプラスチックスリップのヒントシリンジ</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 3ミリリットルプラスチックLuerlokヒントシリンジ</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>ヘパリン抗凝固剤の注入</td><td>西洋医薬品流通センター株式会社</td><td> 102824 </td><td>メーカー：LEO製薬株式会社コンク。 1000 IU </td></tr><tr valign="top"><td> EDTA溶液</td><td>プロメガ株式会社</td><td> V4231 </td><td> 0.5 M、pH8.0の</td></tr><tr valign="top"><td>生理食塩水</td><td>西洋医薬品流通センター株式会社</td><td> ABB7983154 </td><td>メーカー：ホスピーラ0.9％塩化ナトリウム</td></tr><tr valign="top"><td> 50％のブドウ糖</td><td> Vetoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>ヒューマリン- R </td><td>イーライリリー</td><td> HI - 210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> 1ミリリットルインスリン用注射筒</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Hematoシールシーラント</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 02から678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Microhematocritキャピラリーチューブ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>ワンタッチウルトラテストストリップ</td><td> LifeScan、（株） </td><td> AW 085 - 314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>ワンタッチウルトラ血糖測定器</td><td> LifeScan、（株） </td><td> AW 085 - 314B </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Pentobarbitolナトリウム</td><td>チェバサンテAnimale </td><td> 1715 138 </td><td>コンク。 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td>レッド研究所ラベリングテープ</td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>青い研究所ラベリングテープ</td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>計量器</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>渦</td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td>タイマー</td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat

2型糖尿病（T2D）が急速に罹患率が高まっています。不十分なインスリンの生産や高血糖のレベルでインスリン生産、T2D結果を利用することができないことのいずれかによって特徴付け。インスリン感受性を評価する&quot;ゴールドスタンダード&quot;は高インスリン血症、正常血糖クランプまたはインスリンクランプです。この手順では、インスリンは血糖値の低下、その結果一定の速度で注入する。一定のレベルで血糖値を維持するために、外因性グルコース（D50）は、静脈循環に注入される。恒常性を維持するために注入されたグルコースの量は、インスリン感受性の指標である。ここで、我々は慢性的にカテーテルを挿入、無拘束、覚醒ラットにおける基本的なクランプの手順を示しています。このモデルでは、血液が動物に最小限のストレスで収集することができます。麻酔の誘導後、正中切開が行われ、左総頸動脈と右頸静脈はカテーテルをされています。挿入されたカテーテルは、体外と確保、ヘパリン生理食塩水でフラッシュされます。動物を毎日監視体重増加で、実験の前に4〜5日で回復されている。手術前のレベルに体重を取り戻すだけの動物が実験に使用されています。実験当日、ラットを絶食させるとインスリンとD50を含むポンプに接続されています。ベースラインのグルコースは、動脈ラインから評価し、実験（血糖値）全体でベンチマークを使用されています。これに続いて、インスリンを静脈循環に一定の速度で注入する。血糖値の低下を一致させるには、D50が注入される。 D50注入速度は、取り込みの速度よりも大きい場合、グルコースの上昇が発生します。同様に、速度が全身のグルコース取り込みを一致させるには不十分な場合、ドロップが発生します。安定した血糖測定値が達成されるまでグルコースの滴定は継続。この安定した期間中の血糖値およびグルコース注入率を記録し、報告されている。結果は、全身のインスリン感受性のインデックスを提供しています。技術は特定の実験的な要件を満たすように改良できます。それは組織特異的インスリン刺激によるグルコース取り込みだけでなく、全身のブドウ糖の代謝回転を決定することができる放射性トレーサーの使用によってさらに強化されています。

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Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

高インスリン血症、正常血糖クランプは、インスリン作用の評価のための&quot;ゴールドスタンダード&quot;です。インスリンはグルコース取り込みを刺激する一定の速度で注入する。このドロップダウンに対抗するために注入された外因性グルコースの量は、インスリン感受性の指標である。ここで手順は意識、無拘束のラットで実行されます。

覚醒ラットにおける高インスリン血症、正常血糖クランプ

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

51.8K ビュー.  University of Calgary. 高インスリン血症、正常血糖クランプは、インスリン作用の評価のための"ゴールドスタンダード"です。インスリンはグルコース取り込みを刺激する一定の速度で注入する。このドロップダウンに対抗するために注入された外因性グルコースの量は、インスリン感受性の指標である。ここで手順は意識、無拘束のラットで実行されます。