そのぎこちないサイズのために、ショウジョウバエはイメージするのが難しいです。この方法は、ステレオ顕微鏡を用いたハエの挙動と形態のイメージングを実証する。このプロトコルは、科学研究と教育の両方に使用することができます。
この手順を実証するのは、私の指導の下で研究訓練を行っている学部生のトンとウェン・ユジアさん Ms.Li です。まず、約17×22ミリメートルの半透明のペットボトルキャップを使用するか、5ミリリットルピペットチップの厚い端から17ミリメートルのセクションを切断することによって、フライ挙動観察室、またはFBOCを作ります。1%寒天をFBOCに注ぎ、深さを調整します。
食品をFBOCに入れる必要がある場合は、寒天を注ぎ、12ミリメートルの深さを得ます。食べ物をFBOCに入れる必要がない場合は、寒天を5ミリメートルの深さまで注ぎ、フルーツフライの行方をより簡単に追跡します。FBOCを作るためにピペットチップを使用する場合は、カットオフピペットチップセクションを35または60ミリメートルのペトリ皿に入れます。
1%寒天ゲルをペトリ皿に約5ミリメートルの厚さに注ぎ、寒天が固まり、FBOCの底を密封するのを待ちます。その後、所望の厚さにFBOCに寒天ゲルを注ぎます。FBOCと同じ直径のエチルアミンフォームシートの中央に10ミリメートルの深い穴をボーリングして、FBOCベースを作ります。
穴に FBOC を挿入します。観察の目的に応じて、必要に応じて、酵母培地、人工食餌、または純粋なスクロースまたはグルコースでフライフードを作ります。ハエが餌を与えているかどうかを視覚的に判断するには、食品に食品染料を加え、100ミリリットル当たり12.5ミリグラムの最終濃度にします。
準備した食べ物をペトリ皿に8ミリメートルの高さに注ぎます。固化後、紙の上に描かれた長方形の上に食べ物を置き、それに応じて食べ物をカットし、プラスチックの上に置き、ハエが食べ物に着陸する時に異なる角度からのフライの行動を記録できるように四角形のピラミッドまたは四角形の錐体ピラミッドにカットします。プラスチック片をカットし、ピンセットを使用して、FBOCの中央にプラスチックと食品を配置します。
1%寒天ゲルを清潔な空のボトルに1〜2センチメートルの厚さに注ぎ、室温で1〜2時間置きます。ボトルにハエを移し、36時間以上摂氏25度に置きます。砕いた氷の中でハエを冷やして不活性化し、アイスパックでソートし、前述のようにFBOCに移します。
ハエをFBOCに移した後、30〜40ミリメートルのUVまたはクリアフィルタでカバーし、カメラがFBOC複合体を形成します。FBOC複合体をステレオ顕微鏡の下に置き、観察します。FBOC を照らします。
ミニLEDビデオライトを取り付けて、ホットシューマウントスタンドをフラッシュし、FBOCの左右にライトを置きます。ライトを点灯し、色温度を5,000~5、600ケルビン、明るさを100%に設定し、LEDビデオライトをオンにして、FBOCの端が肉眼ではっきりと見えるまでステレオズーム顕微鏡を調整します。FBOC を視野の中心に移動します。
ユニバーサル望遠鏡デジタルカメラアダプタのクランプを、ステレオ顕微鏡の接眼部に取り付けます。次に、カメラ取り付けネジとカメラ固定ネジを交互に回して、コンパクトなデジタルカメラをアダプターにしっかりと取り付けます。デジタルカメラをオンにし、カメラの液晶画面の明るい円形の視野の中央にFBOCエッジがはっきりと表示されるまで、水平/垂直微調整ノブをオンにします。
モードダイヤルをアパーチャ優先自動モードに回転させます。マルチセレクターでフォーカスモードを押し、マクロクローズアップを選択してOKボタンを押します。ズームスイッチを広角端から望遠端に移動し、中央部がLCD画面全体に表示されるまで円形の画像にズームします。
ムービー録音ボタンを押して、フライの動作の記録を開始します。FBOCのハエがはっきりと見えるまで顕微鏡のフォーカスノブを回します。観察やビデオ録画に関心のあるフライの動作を選択します。
ズームノブを回してズームイン/ズームアウトし、観察やビデオ録画に必要な倍率を達成します。UVフィルターを通して撮影した代表的な写真は、透明でシャープであり、培養バイアルが覆われなかったときに撮影された写真と非常によく似ています。ペトリ皿のガラスを通して撮影された写真の品質は非常に貧弱で、部分的にぼやけています。
ここでは、ハエの身体の各部の詳細を示すビデオ録画から撮影した写真を示します。カメラはズームステレオ顕微鏡に接続されているため、ズームシステムを使用してパノラマからクローズアップショットまで撮影するのは非常に簡単です。このプロトコルを使用すると、フライの動作を観察し、複数の視野角について文書化することができます。
例えば、メスのハエは、卵を産む過程で、常に後ろ足でオビポジターをこすっています。この産卵行動の詳細は、横からはっきりとは見えません。このシンプルで経済的な方法を使用して、ハエの挙動や形態のパノラマまたはクローズアップを取り、良質のビデオや写真を得ることができます。
